唐永梅，韋繼紅，韋立紅，牟聯(lián)俊，徐麗湘，秦祖興，唐　妮

(廣西柳州市婦幼保健院，廣西 柳州 545001)

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不同受精方式的囊胚發(fā)育速度及其臨床結(jié)局分析

唐永梅，韋繼紅，韋立紅，牟聯(lián)俊，徐麗湘，秦祖興，唐妮

(廣西柳州市婦幼保健院，廣西 柳州 545001)

[摘要]目的探討不同受精方式對(duì)囊胚發(fā)育速度的影響及不同發(fā)育速度的囊胚對(duì)臨床結(jié)局的影響。方法回顧性分析行囊胚培養(yǎng)和移植的患者資料，按受精方式不同分常規(guī)體外受精(IVF)組和卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(ICSI)組，觀察2組新鮮培養(yǎng)周期的囊胚形成率、移植囊胚后的臨床妊娠率、種植率以及凍融囊胚不同胚齡的移植結(jié)局，比較不同發(fā)育速度的囊胚在新鮮周期和凍融周期的移植結(jié)局。結(jié)果具有相同D3優(yōu)胚率時(shí)，IVF組囊胚形成率和D5形成率明顯高于ICSI組，新鮮囊胚和凍融囊胚移植臨床妊娠率和種植率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。D5形成的囊胚比D6形成的囊胚優(yōu)胚率、囊胚種植率及妊娠率高(P均<0.05)。結(jié)論受精方式影響囊胚發(fā)育速度，IVF受精可以提高囊胚形成率和D5囊胚形成率；囊胚發(fā)育速度影響囊胚移植的臨床結(jié)局，移植D5囊胚比移植D6囊胚的妊娠率及種植率高。

[關(guān)鍵詞]受精方式；囊胚形成率；妊娠率；種植率

在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)和卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(ICSI)治療中，移植胚胎的發(fā)育潛能決定著妊娠結(jié)局。目前根據(jù)形態(tài)學(xué)評(píng)估指標(biāo)外，還要結(jié)合每個(gè)發(fā)育階段胚胎的專有特征綜合評(píng)價(jià)，以期準(zhǔn)確評(píng)價(jià)胚胎活力，挑選有活力的胚胎進(jìn)行移植。其中胚胎分裂速度是胚胎發(fā)育潛能的重要指標(biāo)。大樣本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)育停滯或卵裂過(guò)慢、過(guò)快胚胎中染色體異常發(fā)生率較正常胚胎顯著升高[1-2]。在穩(wěn)定的胚胎培養(yǎng)微環(huán)境下，胚胎體外培養(yǎng)延長(zhǎng)至囊胚期，以囊胚的形成及形態(tài)學(xué)特征反映胚胎的生命力[3]，而囊胚形成率是衡量胚胎質(zhì)量和發(fā)育潛力的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。本研究探討了不同受精方式對(duì)囊胚發(fā)育速度的影響及不同發(fā)育速度的囊胚對(duì)臨床結(jié)局的影響，旨在為有效提高臨床妊娠率，改善胚胎移植方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1臨床資料

1.1一般資料回顧性分析2013年1—12月在柳州市婦幼保健院生殖中心行IVF/ICSI治療的不孕癥患者資料，根據(jù)受精方式不同分為IVF組和ICSI組，然后根據(jù)移植囊胚的胚齡分為D5組和D6組。凍融囊胚移植周期入選標(biāo)準(zhǔn)為僅移植D5囊胚或D6囊胚的周期共計(jì)611個(gè)周期納入本研究。凍融囊胚內(nèi)膜準(zhǔn)備方法采用自然周期、激素替代周期或促排卵周期。

1.2囊胚培養(yǎng)和移植囊胚培養(yǎng)基采用序貫培養(yǎng)基(瑞典Vitrolife)，D3胚胎從G1培養(yǎng)液移入G2培養(yǎng)液，于37 ℃，6%CO2和5% O2環(huán)境培養(yǎng)。對(duì)形成的囊胚按照Gardner囊胚評(píng)分方法進(jìn)行評(píng)級(jí)。持續(xù)觀察D5和D6囊胚形成情況，形成3CC以上囊胚即可進(jìn)行移植或冷凍。冷凍和解凍試劑均采用玻璃化試劑(美國(guó)Medicult)。解凍后的囊胚在囊胚培養(yǎng)滴中培養(yǎng)2 h后重新擴(kuò)張到具有正常內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)外胚層形態(tài)視為存活。移植囊胚數(shù)不超過(guò)2個(gè)。囊胚移植后12 d檢測(cè)血、尿陽(yáng)性者確認(rèn)為生化妊娠，囊胚移植后28 d B超檢查發(fā)現(xiàn)有妊娠囊視為臨床妊娠。妊娠者予以黃體酮支持10～12周。

1.3觀察指標(biāo)觀察不同受精方式的新鮮培養(yǎng)周期的囊胚形成率、移植囊胚后的臨床妊娠率、種植率以及凍融囊胚不同胚齡的移植結(jié)局，比較不同發(fā)育速度的囊胚在新鮮周期和凍融周期的移植結(jié)局。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1患者一般情況納入研究的1 222例患者的1 227個(gè)囊胚培養(yǎng)周期，其中IVF有1 036個(gè)周期，ICSI 191個(gè)周期。行新鮮囊胚移植249個(gè)周期，其中移植D5囊胚218個(gè)周期，移植D6囊胚31個(gè)周期；行凍融囊胚移植611個(gè)周期，其中移植D5囊胚344個(gè)周期，移植D6囊胚267個(gè)周期。

2.2不同受精方式的新鮮囊胚培養(yǎng)及移植結(jié)局2組具有相同D3優(yōu)胚率，IVF組的囊胚形成率和D5形成率顯著高于ICSI組，2組D5優(yōu)胚率均顯著高于D6優(yōu)胚率(P均<0.05)，但2組臨床妊娠率和種植率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3不同受精方式的凍融囊胚移植結(jié)局2組同級(jí)別囊胚移植具有相似的臨床妊娠率、種植率和流產(chǎn)率(P均>0.05)。見(jiàn)表2。

表1　不同受精方式的新鮮囊胚培養(yǎng)及移植結(jié)局　%

表2　不同受精方式的凍融囊胚移植結(jié)局

2.4新鮮周期和凍融周期D5和D6囊胚移植妊娠結(jié)局比較在新鮮移植周期中，D5組囊胚優(yōu)胚率、臨床妊娠率、種植率均顯著高于D6組(P均<0.05)，而早期流產(chǎn)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。在凍融胚胎移植周期中，D5組囊胚優(yōu)胚率、臨床妊娠率和種植率與D6組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，而早期流產(chǎn)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表4。

3討論

表3　新鮮周期D5和D6囊胚移植妊娠結(jié)局的比較

表4　凍融周期D5和D6囊胚移植妊娠結(jié)局的比較

胚胎體外培養(yǎng)成囊胚的過(guò)程有助于胚胎的自我篩選，囊胚期移植使胚胎發(fā)育和子宮內(nèi)膜的生理階段同步化，宮頸黏液減少，利于移植操作，同時(shí)縮短了胚胎植入宮腔后進(jìn)一步發(fā)育與著床之間的間隔，且子宮收縮逐漸減少，可減少胚胎排出體外的機(jī)會(huì)[5]。選擇高質(zhì)量的囊胚移植不但可以顯著提高胚胎著床率及臨床妊娠率，還可減少多胎妊娠發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[6]。

胚胎的質(zhì)量影響囊胚形成率、囊胚質(zhì)量和種植率。隨著胚胎碎片的增多，囊胚形成率降低，囊胚的細(xì)胞數(shù)目尤其是滋養(yǎng)外胚層數(shù)目減少。胚胎碎片會(huì)影響細(xì)胞之間的連接，干擾細(xì)胞的融合、囊腔和囊胚的形成；碎片釋放的有毒物質(zhì)會(huì)損傷其鄰近的細(xì)胞，使其凋亡；碎片還會(huì)減少胞質(zhì)的體積，耗竭胚胎發(fā)育所需要的細(xì)胞器，造成卵裂球和/或胞漿的損失；囊胚形成率與卵裂速度成正比，卵裂速度較快的胚胎更容易形成優(yōu)質(zhì)囊胚[7-9]。Loutradi等[10]報(bào)道嚴(yán)重畸形精子在受精率、卵裂率、優(yōu)胚率等方面明顯低于非嚴(yán)重畸形精子組。因?yàn)榛尉拥某⒔Y(jié)構(gòu)的異常、內(nèi)部DNA的微缺失等導(dǎo)致的功能缺陷通過(guò)ICSI后將影響胚胎的發(fā)育潛能，從而使受精率、卵裂率、優(yōu)胚率等有所下降。這也解釋了本研究結(jié)果新鮮周期胚胎培養(yǎng)囊胚時(shí)，具有相同D3優(yōu)胚率，IVF組的囊胚形成率和D5囊胚形成率明顯高于ICSI組的原因，但不同受精方式獲得的相同級(jí)別的凍融囊胚移植可獲得相似的妊娠率和種植率。

囊胚發(fā)育速度反映了胚胎質(zhì)量和發(fā)育潛能。岳超敏等[11]通過(guò)單囊胚移植周期亦發(fā)現(xiàn)，第5天發(fā)育為囊胚的胚胎比第6天的囊胚具有較高的種植率。Kovalevsky等[12]比較D5、D6和D7 3組囊胚，發(fā)現(xiàn)D5囊胚種植率、臨床妊娠率和持續(xù)妊娠率明顯高于D6、D7組的囊胚，認(rèn)為囊胚發(fā)育速度能夠影響囊胚移植的結(jié)局。本研究結(jié)果顯示，在新鮮周期囊胚培養(yǎng)中不論受精方式， D5形成的囊胚均比D6形成的囊胚優(yōu)胚率高，意味著囊胚形成延遲的胚胎質(zhì)量較差，所以移植囊胚時(shí)，具有較高優(yōu)胚率組的臨床妊娠率和種植率更高，當(dāng)囊胚優(yōu)胚率相似時(shí)，D6囊胚與D5囊胚具有相似的妊娠率，Alfaraawati等[13]利用滋養(yǎng)層活檢對(duì)囊胚進(jìn)行非整倍體發(fā)生率時(shí)發(fā)現(xiàn)，發(fā)育延遲的囊胚非整倍體率顯著高于正常發(fā)育組。這也解釋了移植D5囊胚比D6囊胚可獲得更好的妊娠結(jié)局的原因之一。但Sunkara等[14]對(duì)1995—2008年的相關(guān)凍融囊胚移植的研究資料進(jìn)行meta分析得出結(jié)論：D5囊胚比D6囊胚具有較高的臨床妊娠率和持續(xù)妊娠率，但在評(píng)分一致的情況下，D6囊胚與D5囊胚具有相似的妊娠率。這也提示在行凍融囊胚移植時(shí)既要考慮胚齡，同時(shí)還應(yīng)該參考囊胚評(píng)級(jí)。囊胚培養(yǎng)是體外篩選胚胎的好方法，但目前認(rèn)為原核期胚胎發(fā)育成囊胚并不完全說(shuō)明它具有生存能力，囊胚培養(yǎng)體系還不夠完善，囊胚的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)還有待細(xì)化，體外延長(zhǎng)培養(yǎng)過(guò)程的不利環(huán)境可以影響胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育，降低胚胎冷凍率，甚至?xí)黾踊颊邿o(wú)囊胚移植的風(fēng)險(xiǎn)。

總之，胚胎培養(yǎng)體外延長(zhǎng)至囊胚期使胚胎的發(fā)育潛能在體外得到進(jìn)一步篩選，囊胚移植更符合生理要求，可減少移植胚胎數(shù)量、降低多胎妊娠率但不降低臨床妊娠率。囊胚的發(fā)育速度及形態(tài)學(xué)特征可反映胚胎的生命力，囊胚形成率可衡量胚胎質(zhì)量和發(fā)育潛力，這是在我們進(jìn)行胚胎移植和凍融胚胎移植時(shí)要考慮的因素。在人類輔助生殖技術(shù)上我們要盡可能地選擇接近生理?xiàng)l件的體外受精方式，以最大限度地保護(hù)好卵子的發(fā)育潛能，同時(shí)還要選擇發(fā)育速度正常的健康胚胎移植，使輔助生殖技術(shù)更好地為人類造福。

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Analysis of growth speed of blastaea and clinical outcomes of different fertilization type

TANG Yongmei, WEI Jihong, WEI Lihong, MOU Lianjun, XU Lixiang, QIN Zuxing, TANG Ni

(Liuzhou maternal and child health hospital, Liuzhou 545001, Guangxi, China)

Abstract:Objective It is to explore the effect of different fertilization type on growth factor of blastaea and the effect of different speed on clinical outcomes. Methods The data of patients accepted blastaea culture and transplantation were retrospectively analyzed. They were divided into normal in vitro fertilization (IVF) group and intracytoplasmic sperm injection (ICSI) group according to the fertilization. The production rate of blastaea in fresh culture stage, clinical pregnant rate after blastaea transplantation, implantation rate and transplantation outcome of different embryonic age of frozen-thawed embryo were observed, the implantation results of embryo with different growth speed between fresh culture stage and frozen-thawed stage were compared in both groups. Results When with the same D3 high qualified embryo rate, the production rate of blastaea and D5 production rate in IVF group were higher than that in ICSI group, there was no significant difference in clinical pregnant rate and implantation rate between fresh blastaea and frozen-thawed ones (P>0.05). The high qualified embryo rate, implantation rate and pregnant rate of blastaea in D5 were higher than that in the ones in D6(P<0.05).Conclusion Fertilization type could influence the growth speed of blastaea, IVF could increase the production rate of blastaea and D5 production rate; blastaea growth speed could influence clinical outcome of blastaea transplantation, D5 blastaea's pregnant rate and implantation rate were higher.

Key words:fertilization type; production rate of blastaea; pregnant rate; implantation rate

[收稿日期]2015-03-30

[中圖分類號(hào)]R711.6

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-8849(2016)08-0813-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.08.005

[基金項(xiàng)目]廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2013604)

[作者簡(jiǎn)介]唐永梅，女，副主任醫(yī)師，在職研究生，研究方向?yàn)樯翅t(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。