萬(wàn)李

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶　400010）

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正交試驗(yàn)法優(yōu)化麻桔止咳顆粒水提醇沉工藝

萬(wàn)李

（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，重慶400010）

摘要：目的優(yōu)化麻桔止咳顆粒的水提醇沉工藝。方法采用正交試驗(yàn)法，以鹽酸麻黃堿為指標(biāo)，考察用水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)水提取工藝的影響；以鹽酸麻黃堿保留率、固形物減少率為指標(biāo)，考察藥液相對(duì)密度、醇沉濃度、醇沉?xí)r間對(duì)醇沉工藝的影響。結(jié)果最佳水提取、醇沉工藝為加10倍量水，煎煮3次，第1次60 min，第2和第3次各40 min，提取液濃縮至相對(duì)密度為1.20，冷卻后加入乙醇使含醇量為80%，放置24 h，除去沉淀。結(jié)論優(yōu)化的水提取、醇沉工藝條件穩(wěn)定可行，重復(fù)性好，適用于本制劑的工業(yè)化生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：麻桔止咳顆粒；正交試驗(yàn)；鹽酸麻黃堿；工藝優(yōu)選

麻桔止咳顆粒為純中藥復(fù)方制劑，由麻黃、桔梗、川貝母、甘草等藥材組方，具有宣肺化痰、止咳平喘功效，用于風(fēng)寒咳嗽、痰喘引起的咳嗽氣喘、胸悶、痰多，以及急、慢性支氣管炎見(jiàn)上述證候者。本研究中采用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以鹽酸麻黃堿含量和固形物減少率為測(cè)評(píng)指標(biāo)，優(yōu)化麻桔止咳顆粒的水提醇沉工藝，旨在為該制劑的規(guī)范化生產(chǎn)和臨床療效提供參考。

1　儀器與試藥

高效液相色譜儀（日本島津10A）；LC-10ATVP輸液泵（雙泵）；SPD-10AVP紫外檢測(cè)器。

1.2試藥

鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為171241-201007）；麻黃Ephedra equiselina Bge.，桔梗Platycodon grandiflorun（Jacq.）A.DC.，川貝母Fritillaria cirrhosa D.Don，甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.為市售品，經(jīng)重慶市中藥研究院肖銘玉副研究員鑒定，均符合2010年版《中國(guó)藥典（一部）》項(xiàng)下相關(guān)規(guī)定。乙腈、磷酸為色譜純；水為重蒸水，其余均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1鹽酸麻黃堿含量測(cè)定

2.1.1色譜條件

色譜柱：Hypersil-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺，3∶97）；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。

2.1.2溶液制備

取干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對(duì)照品5.25 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，甲醇定容，精密量取10 mL，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得0.042 g/L鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液。

X射線徑向衍射數(shù)據(jù)用Singh,Singh[14]和Balasingh[15]提出的晶格應(yīng)變理論進(jìn)行分析.根據(jù)該理論，測(cè)得的dm(hkl)是Ψ角(金剛石對(duì)頂砧加壓方向和hkl衍射面法向的夾角)的函數(shù)，可以表示為：

取正交試驗(yàn)項(xiàng)下的提取液，濃縮至200 mL，從中精密量取5 mL提取液，加水10 mL及濃氨試液0.5 mL，用乙醚提取4次（30，30，20，20 mL），合并乙醚液，加鹽酸乙醇溶液（1→20）2 mL，混勻，低溫回收溶劑至干，殘?jiān)右掖?0 mL使溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，搖勻，過(guò)微孔濾膜（0.45 μm），離心，得供試品溶液。

2.1.3方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，依法測(cè)定。色譜圖見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液2，4，8，16，20 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得鹽酸麻黃堿回歸方程Y=3 614.4 X-7.836，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在0.084～0.84 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，在上述色譜條件下測(cè)定。結(jié)果峰面積的RSD為0.70%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，1，4，8，14 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積值的RSD為1.13%（n=5），表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品適量，依法制備6份供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果峰面積的RSD為1.32%（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品6份，分別加入對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1　高效液相色譜圖

表1　鹽酸麻黃堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2水提取工藝優(yōu)化

正交試驗(yàn)：照處方比例1/10稱取藥材，以提取液中的鹽酸麻黃堿含量為考察指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)進(jìn)行試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表2，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。可見(jiàn)，各因素對(duì)提取效果均有影響，影響鹽酸麻黃堿提取因素中C > A >B，最佳組合為A3B3C2。從處方全局及臨床應(yīng)用角度考慮，擬采用加10倍量水，煎煮3次，第1次60 min，第2和第3次各40 min。

表2　水提取工藝正交試驗(yàn)因素水平表

表3　麻桔止咳顆粒水提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

驗(yàn)證試驗(yàn)：按處方比例稱取藥材，分別采用最佳工藝條件和擬采用工藝條件提取，照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定鹽酸麻黃堿含量。結(jié)果見(jiàn)表4?？梢?jiàn)，在麻桔止咳顆粒選定提取工藝條件下，樣品中鹽酸麻黃堿含量相近，表明選定的工藝條件穩(wěn)定、可行。

2.3醇沉工藝優(yōu)化

正交試驗(yàn)：按處方比例投料，照選定的水提取條件，合并濾液，濃縮至一定相對(duì)密度后按表5試驗(yàn)，醇沉后過(guò)濾，濃縮，干燥，得醇沉干膏。以因素E（藥液相對(duì)密度＜60℃>）、因素F（醇沉濃度＜%>）、因素G（醇沉后放置時(shí)間＜h >）為考察因素，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，并以鹽酸麻黃堿保留率和固形物減少率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，篩選出最佳工藝。結(jié)果見(jiàn)表6。由直觀分析可知，影響醇沉效果的因素順序?yàn)镚 > E > F，以E3F3G3組合最佳。因素E和F對(duì)醇沉效果基本無(wú)影響。從節(jié)約成本考慮，故確定醇沉方案為E3F1G3：藥液濃縮至相對(duì)密度為1.20（60℃），放冷后加入一定量的乙醇使藥液含醇量為80%，放置24 h，濾過(guò)，即得。

表4　水提取正交驗(yàn)證鹽酸麻黃堿含量測(cè)定結(jié)果（%）

表5　醇沉工藝正交試驗(yàn)因素水平

表6　醇沉工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

驗(yàn)證試驗(yàn)：取藥液相對(duì)密度為1.20的藥液3份，分別加入一定量乙醇，使含醇量為80%進(jìn)行醇沉，醇沉?xí)r邊攪拌，邊緩慢加入乙醇，以避免藥液中局部乙醇濃度過(guò)高造成有效成分被沉淀物包裹所造成的損失。靜置24 h后，過(guò)濾。分別測(cè)定麻黃堿的保留率，并測(cè)定固形物重量計(jì)算固形物減少率。結(jié)果見(jiàn)表7?？梢?jiàn)，醇沉工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)篩選結(jié)果基本一致，表明該分離純化工藝條件穩(wěn)定可行，重復(fù)性好。

表7　醇沉工藝試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果（%）

3　討論

3.1色譜柱的選擇［1-2］

試驗(yàn)中比較了Apollo，Hypersil，Capcell PAK，Dimasil，Agilent等不同品牌色譜柱，按擬訂含量測(cè)定方法操作。在使用不同色譜柱的情況下，結(jié)果均能較好地將鹽酸麻黃堿與相鄰色譜峰成分分離。綜合考慮，選用Hypersil-C18色譜柱，在選用的液相色譜條件下，理論板數(shù)以鹽酸麻黃堿峰計(jì)不得低于5 000。

3.2流動(dòng)相的選擇［3-6］

考察了5種流動(dòng)相系統(tǒng)：1）乙腈-含0.2%三乙胺的0.02 moL/L磷酸二氫鉀溶液（3∶97），用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.7；2）甲醇-磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH 為2.5，6∶94）；3）乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺，3∶97）；4）乙腈-含0.3%三乙胺的0.02 moL/L磷酸二氫鉀溶液（5∶95），用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0；5）乙腈-0.1%磷酸（3∶97）。結(jié)果流動(dòng)相1）和4）的鹽酸麻黃堿與相鄰色譜峰分離度不好；流動(dòng)相2）和5）色譜條件下保留時(shí)間長(zhǎng)，故未采用；流動(dòng)相3）色譜條件下出峰時(shí)間快，分離度好，故選擇其作為流動(dòng)相。

3.3提取方法的選擇

麻桔止咳顆粒藥味多，由麻黃、桔梗、貝母、甘草等藥材配伍而成，組成復(fù)雜，固形物收膏率較高，要制成服用方便的顆粒制劑，須進(jìn)行提取、經(jīng)純化減少固形物得量［7-11］。為便于服用，保持原方療效，對(duì)此方采用水提取，經(jīng)不同濃度含醇量進(jìn)行醇沉工藝試驗(yàn)。通過(guò)L9（34）正交試驗(yàn)法優(yōu)化水提醇沉工藝，確定了該復(fù)方制劑制備工藝中水提醇沉的最佳工藝條件，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，該工藝穩(wěn)定可行。

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Process Optimization on Water Extract-Alcohol Extraction of Majiezhike Granules

Wan Li
（Chongqing Medical University Second Affiliated Hospital，Chongqing，China 400010）

Abstract：Objective To optimize water extract-alcohol extraction method of Majiezhike Granules.Methods The content of ephedrine hydrochloride was examined by orthogonal design，and the influence of the extraction times，extraction duration and consumption of water on the extraction process by water were observed；the retention rate of ephedrine hydrochloride and decrement of solid mater were examined，and the influence of relative density of medication，concentration of alcohol and alcohol extraction duration on the extraction procedure by alcohol were observed.Results The best optimizations of water extract-alcohol extraction were the weight of water was 10 times，boiled 3 times，the first time 60 min，the second and the last time 40 min；then the extract was concentrated to a relative density of 1.20，after it was cooled，added alcohol to make the alcohol content being 80%；placed for 24 h，removed precipitate.Conclusion The optimized method of water extract-alcohol extraction is stable，feasible，reproducible and is suitable for industrial production.

Key words：Majiezhike Granules；orthogonal experiment；ephedrine hydrochloride；process optimization

中圖分類號(hào)：TQ461；R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-4931（2016）07-0008-03

作者簡(jiǎn)介：萬(wàn)李，女，大學(xué)本科，主要從事醫(yī)院藥學(xué)與藥事管理，（電子信箱）2120317719@qq.com。

收稿日期：（2015-08-17；修回日期：2015-10-17）