傅敬忠，黃龍璋，于　強(qiáng)，儲節(jié)勝，匡美波，徐冠軍.江西省九江市第三人民醫(yī)院腫瘤科，江西 九江 33000；.江西省修水縣第一人民醫(yī)院腫瘤科，江西 修水 33400

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IGF-1R基因通過調(diào)控BMP2表達(dá)影響SMMC7721細(xì)胞的增殖和凋亡

傅敬忠1，黃龍璋1，于強(qiáng)1，儲節(jié)勝1，匡美波2，徐冠軍1
1.江西省九江市第三人民醫(yī)院腫瘤科，江西 九江 332000；2.江西省修水縣第一人民醫(yī)院腫瘤科，江西 修水 332400

［摘要］背景與目的：胰島素生長因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）是一種重要的肽類激素，通過與其受體（IGF-1 receptor，IGF-1R）和胰島素受體（insulin receptor，IR）結(jié)合并激活下游信號通路發(fā)揮生物學(xué)作用，骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs）因可促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲而日益成為腫瘤分子研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。該研究通過RNA干擾（RNAi）技術(shù)沉默IGF-1R基因，探討其對肝癌SMMC7721細(xì)胞中BMP2表達(dá)的影響以及對細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法：構(gòu)建靶向IGF-1R基因的RNAi真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染至肝癌SMMC7721細(xì)胞，用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）和蛋白［質(zhì)］印跡法（Western blot）檢測IGF-1R和BMP2基因表達(dá)抑制效應(yīng)，MTT實(shí)驗(yàn)檢測IGF-1R基因沉默后細(xì)胞生長曲線，流式細(xì)胞術(shù)檢測IGF-1R基因沉默后細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：成功構(gòu)建靶向IGF-1R基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2轉(zhuǎn)染至肝癌SMMC7721細(xì)胞后，對IGF-1R基因的mRNA抑制效率分別達(dá)到68.9%和80.7%（P＜0.05），對BMP2基因的mRNA抑制效率分別達(dá)到79.5%和83.3%（P＜0.05），對IGF-1R蛋白表達(dá)抑制率分別為46.1%和62.1%，對BMP2蛋白表達(dá)抑制率分別為42.5%和60.9%（P＜0.05）。根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果，繪制的生長曲線顯示，IGF-1R基因沉默后SMMC7721細(xì)胞增殖速率明顯低于對照組（P＜0.05），細(xì)胞凋亡比例高于對照組（P＜0.05）。結(jié)論：IGF-1R基因沉默表達(dá)能介導(dǎo)BMP2基因不同水平下調(diào)表達(dá)，抑制SMMC7721細(xì)胞增殖，并促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡。

［關(guān)鍵詞］IGF-1R基因；BMP2基因；肝癌SMMC7721細(xì)胞；細(xì)胞增殖；細(xì)胞 凋亡

Correspondence to：XU GuanjunE-mail：xgjxiu80@163.com

胰島素生長因子-1 （insulin-like growth factor-1，IGF-1）是一種重要的肽類激素，存在于人體乳腺、結(jié)腸和前列腺等多種組織中，與胚胎組織分化、器官發(fā)育、物質(zhì)代謝等密切相關(guān)，并且在正常生理活動中發(fā)揮著極其重要的作用［1-2］。在許多惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)IGF-1信號相關(guān)配體、受體和調(diào)節(jié)性結(jié)合蛋白存在不同表達(dá)水平的改變，從而激活I(lǐng)GF信號通路，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)也證實(shí)IGF-1信號通路在惡性腫瘤的起始和發(fā)展過程中有著重要的作用［3-4］。

IGF-1主要通過與其受體（IGF-1 receptor，IGF-1R）和胰島素受體（insulin receptor，IR）結(jié)合并激活I(lǐng)GF-1R和IR下游信號通路發(fā)揮生物學(xué)作用。但是現(xiàn)在多數(shù)靶向IGF-1信號通路治療策略都是通過特異性抑制IGF-1R并同時避開對IR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制，那是因?yàn)镮R在正常的生理代謝過程中有著重要作用，同時抑制IR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)將會對機(jī)體產(chǎn)生不良反應(yīng)［5］。在正常組織中，機(jī)體通過多種機(jī)制對IGF-1R信號通路活化進(jìn)行嚴(yán)格調(diào)控，其中包括配體表達(dá)轉(zhuǎn)錄抑制、配體與結(jié)合蛋白（IGFBPs）和非信號受體（IGF-2R）結(jié)合。但是在人類惡性腫瘤中，這些調(diào)控系統(tǒng)出現(xiàn)紊亂，從而導(dǎo)致IGF-1R信號通路過度活化［3］。

骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs）因可促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲而日益成為腫瘤分子研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。有研究表明，IGF-1與BMPs兩者在細(xì)胞增殖、分化及組織修復(fù)等方面起重要作用［6-7］。我們前期研究已證實(shí)IGF-1能促進(jìn)肝癌SMMC7721細(xì)胞增殖，可增強(qiáng)肝癌細(xì)胞中BMP2基因及其蛋白的表達(dá)［8］，但I(xiàn)GF-1R與BMP2之間的作用機(jī)制目前尚未明確。因此本試驗(yàn)將設(shè)計(jì)并構(gòu)建靶向IGF-1R基因的siRNA表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染至SMMC7721細(xì)胞后檢測相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，并分析其對細(xì)胞增殖和凋亡的影響，初步研究IGF-1R與BMP2之間的作用機(jī)制。

1　材料和方法

1.1材料與試劑

肝癌細(xì)胞株SMMC7721購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。細(xì)胞培養(yǎng)瓶、凍存管和6孔板均由美國Corning公司生產(chǎn)，新生牛血清購自浙江天杭生物科技公司，胰酶和1640培養(yǎng)基購自美國Gibco公司，siRNA表達(dá)載體由上海吉凱公司合成構(gòu)建，LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑購自Invitrogen公司，RNA提取試劑盒、cDNA合成試劑盒、PCR mix和ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒均購自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司，MTT購自美國Sigma公司，兔抗人IGF-1R和兔抗人BMP2單克隆抗體購自美國Anbo公司，羊抗兔IgG抗體購自北京中杉金橋公司，細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購自美國BD公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1設(shè)計(jì)靶向IGF-1R基因的siRNA并構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒

從NCBI數(shù)據(jù)庫中查詢?nèi)祟怚GF-1R基因的GENBANK序列號，并應(yīng)用生物信息學(xué)軟件siDRM（http：//sidrm.biolead.org/index.php）對靶向IGF-1R基因的siRNA進(jìn)行預(yù)測，根據(jù)預(yù)測的siRNA靶點(diǎn)設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)的寡核苷酸鏈。寡核苷酸序列和表達(dá)質(zhì)粒由吉凱生物公司合成并構(gòu)建，分別命名為IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2。

1 . 2 . 2 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（r e v e r s e transcription-polymerase chain reaction，RTPCR）和蛋白［質(zhì)］印跡法（Western blot）檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞IGF-1R和BMP2基因和蛋白表達(dá)

將構(gòu)建的IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)至染SMMC7721細(xì)胞，以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染GV248空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至SMMC7721細(xì)胞組為對照組。轉(zhuǎn)染后48 h收集細(xì)胞，加入1 mL TRIzol試劑混勻，按照說明書步驟提取細(xì)胞總RNA，用無RNase水進(jìn)行溶解，用核酸蛋白測定儀檢測RNA的純度和濃度，取2 μg RNA溶液并按照北京康為世紀(jì)生物科技有限公司生產(chǎn)的SuperQuickRT cDNA第一鏈合成試劑盒說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)完成后按照2×Es Taq MasterMix產(chǎn)品說明書進(jìn)行PCR反應(yīng)，反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性30 s，58 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，擴(kuò)增28個循環(huán)。PCR擴(kuò)增引物序列如下，IGF-1R-F：5'-CAACGGCAACCTGAGTTAC-3'和IGF-1R-R：5'-GCACGAAGATGGAGTTGTG-3'，產(chǎn)物大小為286 bp；BMP2-F：5'-AACTACCAGAAACGAGTGGG-3'和BMP2-R：5'-GCTGTGTTCATCTTGGTGC-3'，產(chǎn)物大小為409 bp；β-actin-F：5'-GCACTCTTCCAGCCTTCCTT-3'和β-actin-R：5'-AGGTCTTTGCGGATGTCCA-3'，產(chǎn)物大小為101 bp，擴(kuò)增完成后72 ℃溫育10 min，4 ℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物用2%濃度的瓊脂糖凝膠電泳后用Quantity Qne軟件進(jìn)行拍照，Image J分析軟件對電泳條帶進(jìn)行半定量分析。同樣按照上述方法進(jìn)行轉(zhuǎn)染，48 h后收集細(xì)胞，加入RIPA裂解液（含有蛋白酶抑制劑PMSF）后冰上裂解細(xì)胞1 h，4 ℃，10 000×g離心10 min，并取上清液進(jìn)行BCA法蛋白定量，取相同蛋白量的上清液并加入1/5倍體積的5×Loading緩沖液，煮沸10 min后，4 ℃，10 000×g離心10 min，取6 μL上樣進(jìn)行SDS-PAGE，半干電轉(zhuǎn)移法將凝膠上蛋白轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上，取出膜于封閉液（5%脫脂牛奶溶于PBST中）中室溫封閉1 h，分別加入1∶500稀釋的兔抗人IGF-1R和BMP2抗體，4 ℃溫育過夜，用PBST漂洗3次，每次10 min，再加入1∶5 000的HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗，37 ℃溫育1 h，用PBST漂洗3次，每次10 min，取出膜，用ECL顯色，壓片并保存結(jié)果。

1.2.3MTT檢測IGF-1R-siRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖

將IGF-1R-siRNA-1、IGF-1R-siRNA-2表達(dá)質(zhì)粒和對照質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至SMMC7721細(xì)胞，48 h后用胰酶消化并分別鋪種至96孔板，鋪種細(xì)胞密度為2 000個/孔，每組重復(fù)4個孔。在鋪種0、12、24、36、48和60 h后向相應(yīng)的細(xì)胞中加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL）；繼續(xù)培養(yǎng)4 h后去掉培養(yǎng)基，加入150 μL DMSO，充分振蕩后測定吸光度（D490 nm）值并繪制生長曲線。

1.2.4流式細(xì)胞術(shù)檢測IGF-1R基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡

鋪種SMMC7721細(xì)胞至6孔板，細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法按照LipofectamineTM2000說明書中步驟進(jìn)行，轉(zhuǎn)染48 h后用無EDTA的胰酶消化細(xì)胞，收集并清洗細(xì)胞后按照BD凋亡檢測試劑盒操作進(jìn)行抗體溫育以及PI染色，避光15 min后加入Binding緩沖液后混勻，上機(jī)檢測。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩組樣本均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多個樣本均數(shù)兩兩比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1質(zhì)粒構(gòu)建結(jié)果鑒定

根據(jù)siRNA生物信息學(xué)軟件給出的結(jié)果篩選出2對靶向IGF-1R基因的發(fā)卡結(jié)構(gòu)siRNA并設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)寡核苷酸引物（表1）。用GV248表達(dá)質(zhì)粒的上游測序引物H1-F對構(gòu)建的siRNA表達(dá)載體進(jìn)行測序，用測序結(jié)果所示序列（圖1）與合成引物序列進(jìn)行比對，比對結(jié)果一致，表明重組質(zhì)粒IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2表達(dá)載體構(gòu)建成功。

表1　靶向IGF-1R基因的siRNA靶點(diǎn)和寡核苷酸引物序列Tab. 1　　Primer sequence of siRNA target spot and oligonucleotides

2.2RT-PCR和Western blot分析IGF-1R-siRNA對IGF-1R和BMP2基因及其蛋白表達(dá)的影響

RT-PCR結(jié)果顯示，SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2表達(dá)載體后，IGF-1R和BMP2基因mRNA水平都出現(xiàn)明顯下調(diào)表達(dá)，其中IGF-1R-siRNA-1轉(zhuǎn)染組IGF-1R 和BMP2基因的表達(dá)相對于正常對照組分別下調(diào)68.9%和79.5%，IGF-1R-siRNA-2轉(zhuǎn)染組IGF-1R和BMP2基因的表達(dá)分別下調(diào)80.7%和83.3%（圖2），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組IGF-1R和BMP2蛋白明顯出現(xiàn)不同水平的下調(diào)，對IGF-1R蛋白表達(dá)抑制率分別為46.1%和62.1%，對BMP2蛋白表達(dá)抑制率分別為42.5%和60.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖3）。

2.3IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2轉(zhuǎn)染后對SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響

SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染IGF-1R-siRNA-2表達(dá)質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒后，不同時間段加入MTT后并測D490nm值后繪制生長曲線（圖4），發(fā)現(xiàn)IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖速度明顯要低于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而且IGF-1R-siRNA-2表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖速度稍高于IGF-1R-siRNA-1轉(zhuǎn)染組，也就表明IGF-1R基因表達(dá)下調(diào)會抑制細(xì)胞的增殖。

圖1　IGF-1R-siRNA質(zhì)粒測序結(jié)果Fig. 1　　Plasmid sequencing of IGF-1R small interfering RNA

圖2　RT-PCR檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞后IGF-1R和BMP2基因表達(dá)差異Fig. 2　　Detection of the diference of IGF-1R and BMP2 gene expression after plasmid transfection into SMMC-7721 cells by RT-PCR

圖3　Western blot檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SMMC-7721細(xì)胞后IGF-1R和BMP2蛋白的表達(dá)Fig. 3　　Detection of expression of IGF-1R and BMP2 proteins after plasmid transfection into SMMC-7721 cells by Western blot

2.4IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后對SMMC-7721細(xì)胞凋亡的影響

SMMC-7721細(xì)胞轉(zhuǎn)染IGF-1R-siRNA-1 和IGF-1R-siRNA-2表達(dá)質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒后，48 h后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況（圖5），結(jié)果顯示，IGF-1R-siRNA-1和IGF-1R-siRNA-2表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的晚期細(xì)胞凋亡比例（17.3%和23.1%）明顯高于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對照組（2.5%），差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），IGF-1R-siRNA-2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組凋亡比例稍高于IGF-1R-siRNA-1組，也就表明IGF-1R基因表達(dá)下調(diào)會促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。

圖4　MTT檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖情況Fig. 4　　Detection of cell proliferation among the 3 groups at 0，12，24，36，48 and 60 h after transfection by MTT assay

圖5　流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞凋亡Fig. 5　　Detection of apoptosis rates of the cells after transfection by fow cytometry

3　討論

近年來，IGF-1R作為腫瘤治療靶點(diǎn)，已經(jīng)成為抗腫瘤藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，并已開發(fā)出相關(guān)的靶向藥物。Linsitinib是一種靶向IGF-1R和IR的雙重酪氨酸激酶抑制劑，現(xiàn)已進(jìn)入ⅠB期臨床研究，聯(lián)合依維莫斯治療難治性轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌［9-10］。靶向IGF-1R的單克隆抗體Ganitumab也已進(jìn)入臨床Ⅲ期的隨機(jī)雙盲多中心研究，與吉西他濱聯(lián)用并成為治療轉(zhuǎn)移性胰腺癌的一線藥物［11］。盡管現(xiàn)已研發(fā)出相關(guān)靶向藥物，但是對于IGF-1R參與的信號通路和分子機(jī)制至今仍未闡明。

前期研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌SMMC7721細(xì)胞中，IGF-1可以上調(diào)BMP2基因的表達(dá)，并通過阻斷p38/MAPK信號通路抑制BMP2基因的表達(dá)［8］。IGF-1與其受體IGF-1R結(jié)合，并激活下游的MAPK和PI3K信號通路，BMP2基因的上調(diào)表達(dá)是由IGF-1R/MAPK信號通路活化所介導(dǎo)的。但是IGF-1R是否也會通過激活PI3K/Akt信號通路介導(dǎo)BMP2基因的上調(diào)表達(dá)至今仍未見報(bào)道，Graham等［12］對前列腺癌的研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt-NF-κB信號軸通過對BMP2基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄調(diào)控從而促進(jìn)BMP-Smad信號通路活化，ChIP實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)NF-κB可能通過與BMP2基因啟動子結(jié)合從而參與對BMP2基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。

本研究通過RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染靶向IGF-1R基因的siRNA表達(dá)質(zhì)粒后，肝癌SMMC7721細(xì)胞中IGF-1R和BMP2基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平都有明顯下調(diào)，MTT細(xì)胞生長曲線和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染組SMMC7721細(xì)胞增殖速率明顯低于對照組，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡比例也高于對照組。本研究結(jié)果也說明通過RNA干擾IGF-1R基因表達(dá)阻滯IGF-1R參與的信號通路的活化，明顯抑制BMP2基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖，并且促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡。至于IGF-1R是通過MAPK還是PI3K相關(guān)信號通路調(diào)節(jié)BMP2基因的表達(dá)至今尚未見報(bào)道，也可能是通過IGF1R/PI3K/Akt-NF-κB信號通路發(fā)揮對BMP2基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，但是本課題尚未對此假說進(jìn)行驗(yàn)證。

［參 考 文 獻(xiàn)］

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Silencing IGF-1R gene inhibits proliferation of human SMMC7721 cell and promotes its apoptosis through down-regulating BMP2 expression

FU Jingzhong1，HUANG Longzhang1，YU Qiang1，CHU Jiesheng1，KUANG Meibo2，XU Guanjun1（1.Department of Oncology，the Third People's Hospital of Jiujiang，Jiujiang 332000 Jiangxi Province，China；2.Department of Oncology，the First People's Hospital of Xiushui，Xiushui 332400，Jiangxi Province，China）

［Key words］IGF-1R gene；BMP-2 gene；Hepatocellular carcinoma SMMC7721 cell；Cell proliferation；Cell apoptosis

［Abstract］Background and purpose：Insulin-like growth factor-1 （IGF-1） is a peptide that participates in many biological processes by stimulating the downstream signaling pathways through their interaction with IGF-1 receptor （IGF-1R） and insulin receptor （IR）. Bone morphogenetic proteins （BMPs） are a group of functional proteins which participate in the biological processes of proliferation and migration in many kinds of cancers and have become a hot area of cancer research. The study aimed to investigate the effects of silencing IGF-1R gene on the expression level of BMP2 gene, and the cell proliferation and apoptosis of SMMC7721 cells. Methods：The RNAi plasmid targeting IGF-1R gene was constructed and transfected into SMMC7721 cells. Then the inhibition effect on the expression level of IGF-1R and BMP2 gene was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and Western blot. The SMMC7721 growth curve and cell apoptosis were detected by MTT assay and flow cytometry after they were transfected with RNAi plasmid. Results：The RNAi plasmid targeting IGF-1R gene was constructed successfully. The inhibition efficiencies at mRNA expression levels were 68.9% and 80.7% （IGF-1R gene）, 79.5% and 83.3% （BMP2 gene）, respectively, aftertransfection with IGF-1R-siRNA-1 and IGF-1R-siRNA-2 plasmid （P＜0.05）. The inhibition efficiencies at protein levels were 46.1% and 62.1% （IGF-1R gene, P＜0.05）, 42.5% and 60.9% （BMP2 gene, P＜0.05）, respectively. The results of MTT growth curve showed that the proliferation rate in the transfected SMMC7721 cells was significantly slower than that in the control group （P＜0.05）. The proportion of apoptotic cells in transfected groups was significantly higher than that in the control group （P＜0.05）. Conclusion：Silencing IGF-1R gene can downregulate the expression of BMP2 gene at different levels that results in inhibition of cell proliferation and promotion of apoptosis in SMMC7721 cells.

DOI：10.3969/j.issn.1007-3969.2016.04.003

中圖分類號：R735.7

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1007-3639（2016）04-0297-06

通信作者：徐冠軍 E-mail：xgjxiu80@163.com

收稿日期：（2015-06-28修回日期：2015-08-25）