王　冰,舒　艷,梁　佳,姚紅兵

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科　400014)

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·論著·

IL-6在兒童慢性鼻竇炎中的表達(dá)及其意義*

王冰,舒艷,梁佳,姚紅兵△

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科400014)

[摘要]目的研究白細(xì)胞介素-6(IL-6)在兒童慢性鼻竇炎(CRS)患兒外周血及腺樣體中的表達(dá)情況，探討IL-6在CRS患兒發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。方法收集CRS伴有腺樣體肥大患兒95例(CRS組)，變應(yīng)性鼻炎伴有腺樣體肥大患兒70例(變應(yīng)性鼻炎組)，單純腺樣體肥大患兒51例(對照組)，采用 ELISA 法檢測3組患兒外周血中IL-6的水平；免疫組織化學(xué)染色觀察3組患兒腺樣體組織中IL-6的分布及表達(dá)情況。結(jié)果對照組外周血IL-6的水平為(33.6±6.9) pg/mL，變應(yīng)性鼻炎組為(35.9±5.6) pg/mL，CRS組(49.8±8.3) pg/mL，CRS組與變應(yīng)性鼻炎組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CRS組與對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，變應(yīng)性鼻炎組與對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。腺樣體組織中IL-6主要分布在浸潤的炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，少量分布在間質(zhì)，CRS組與變應(yīng)性鼻炎組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，CRS組與對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，變應(yīng)性鼻炎組與對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論兒童CRS外周血中及局部組織中IL-6表達(dá)均明顯高于不伴CRS的兒童，提示IL-6可能在兒童CRS的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。

[關(guān)鍵詞]鼻竇炎;慢性病;白細(xì)胞介素6;兒童

慢性鼻竇炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是發(fā)生于鼻腔及鼻竇黏膜的一種常見的慢性炎癥性疾病，是兒童耳鼻咽喉科的常見病和多發(fā)病。但對于兒童CRS的研究較少，對于兒童CRS的發(fā)病機(jī)制至今仍有很多不明確的地方。IL-6是一種調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，具有多種的免疫調(diào)節(jié)功能。它能促進(jìn)T細(xì)胞及B細(xì)胞增殖和活化，并能促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白，在機(jī)體的很多炎性反應(yīng)中都發(fā)揮著重要作用。已有研究證實(shí)IL-6在CRS伴鼻息肉患者的鼻竇黏膜中高表達(dá)，而且鼻黏膜細(xì)胞的IL-6信號傳導(dǎo)通路可能也發(fā)生了變化[1]。本文旨在通過研究IL-6在CRS患兒外周血及局部組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討IL-6在兒童CRS發(fā)病過程中的作用機(jī)制。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年6月至2013年2月在本科住院的腺樣體肥大患兒216例，其中男91例，女125例，年齡4～9歲。其中伴有CRS的患兒95例(CRS組)，伴有變應(yīng)性鼻炎患兒70例(變應(yīng)性鼻炎組)，單純腺樣體肥大患兒51例(對照組)。3組患兒年齡、性別、體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有入選患兒均無支氣管哮喘病史，并排除心、肺、腦、肝、腎等全身系統(tǒng)性疾病及肝炎、結(jié)核等傳染性疾病。本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會備案并批準(zhǔn)。入選患兒合法監(jiān)護(hù)人均簽署臨床研究同意書，入選的所有CRS患兒均不伴有鼻息肉。

1.2方法

1.2.1外周血的采集與處理于手術(shù)當(dāng)天清晨采取患兒空腹靜脈血液3～5 mL，保存于抗凝管內(nèi)，以1 200 r/min的速度離心標(biāo)本15 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱，用于后期的細(xì)胞因子的測定。

1.2.2腺樣體標(biāo)本的處理手術(shù)中取患兒整塊的新鮮腺樣體組織標(biāo)本，立即用4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋備用。

1.2.3ELISA 法檢測患兒血清中IL-6水平采用美國RD公司生產(chǎn)的IL-6 ELISA試劑盒，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.4腺樣體組織中IL-6的表達(dá)將腺樣體組織制為厚度為4 μm的石蠟切片。采用SP法對切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。以PBS溶液代替一抗作陰性對照。陽性細(xì)胞的判定標(biāo)準(zhǔn)為在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)有環(huán)狀沉淀的棕黃色或棕紅色顆粒狀物質(zhì)。染色結(jié)果參照Form-witz評分方法[2]，采取綜合染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)兩個方面進(jìn)行半定量分析，分別評為0～3分。染色強(qiáng)度相同于陰性對照為0分；染色強(qiáng)度較弱，但明顯強(qiáng)于陰性對照為1分；染色清晰為2分；染色強(qiáng)為3分。陽性細(xì)胞數(shù)百分比小于10%為0分；在10%～25%為1分；在26%～50%為2分；>50%為3分。根據(jù)兩項指標(biāo)相加分?jǐn)?shù)劃為4級：0、1分為“-”；2分為“+”；3、4分為“++”；5、6分為“+++”。“-”和“+”判定為陰性；“++”和“+++”為陽性。

2結(jié)果

2.1外周血中 IL-6水平對照組患兒血清中IL-6水平為(33.6±6.9)pg/mL；變應(yīng)性鼻炎組患兒為(35.9±5.6)pg/mL；CRS組患兒為(49.8±8.3)pg/mL。CRS組與變應(yīng)性鼻炎組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，CRS組與對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，變應(yīng)性鼻炎組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2腺樣體組織中IL-6的表達(dá)免疫組織化學(xué)染色顯示在CRS組中，IL-6在腺樣體黏膜下浸潤的炎性細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中高表達(dá)，細(xì)胞間質(zhì)也有少量表達(dá)。而在對照組及變應(yīng)性鼻炎組中，在腺樣體組織中只有少量的細(xì)胞有IL-6陽性表達(dá)。CRS組中腺樣體組織中有62例IL-6陽性表達(dá)，而在變應(yīng)性鼻炎組病例中，僅有3例腺樣體組織中IL-6陽性表達(dá)。在對照組病例中，也只有2例腺樣體組織中IL-6陽性表達(dá)。IL-6在CRS組與變應(yīng)性鼻炎組及對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而在變應(yīng)性鼻炎組與對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

IL-6是一種由氨基酸構(gòu)成并可被多種細(xì)胞產(chǎn)生的糖蛋白，是一種多功能的細(xì)胞因子，它具有多活性、多功能等特點(diǎn),有著多種不同的生理功能。其中，IL-6具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能,能抑制Th1、Treg細(xì)胞的分化[3],是一種具有重要生理病理的多功能和多向性細(xì)胞因子，在炎癥、免疫防御及組織損傷中具有重要作用[4]。很多細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-6，例如單核細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、Th2細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等，還有一些腫瘤細(xì)胞也可以產(chǎn)生IL-6。在自然狀態(tài)下，IL-6一般是通過旁分泌和自分泌形式在局部發(fā)揮作用，但在病理狀態(tài)下也可通過內(nèi)分泌形式在全身發(fā)揮作用。目前的研究表明，IL-6與多種炎性疾病有關(guān)，比如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘等，在這些炎癥疾病中的高表達(dá)，提示IL-6在這些炎性疾病的發(fā)病過程中可能都起著重要作用[5]。

近年來對IL-6在自身免疫性疾病中的免疫調(diào)節(jié)作用的研究得到了很多新的進(jìn)展。其中IL-6對變應(yīng)性疾病有重要的調(diào)節(jié)作用。比如IL-6在過敏性鼻炎(AR)的發(fā)病機(jī)制就起著重要的調(diào)節(jié)作用。有研究證實(shí)：Th1/Th2細(xì)胞免疫失衡是AR 的重要發(fā)病機(jī)制，主要表現(xiàn)為Th2 主導(dǎo)及相關(guān)細(xì)胞因子參與的炎癥性疾病[6]。AR的發(fā)生是由IgE介導(dǎo)的，并受多種細(xì)胞和細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。其中Th2 細(xì)胞及其釋放的細(xì)胞因子起著重要的作用。而IL-6 為Th2 細(xì)胞所釋放的主要細(xì)胞因子，主要反映疾病是否處于急性期[7]，對調(diào)節(jié)IgE免疫應(yīng)答具有重要作用。

但是IL-6在炎性反應(yīng)中的作用不是單向的，它具有致炎和抗炎的雙向功能。它的作用與水平有關(guān),當(dāng)組織中的IL-6水平正常時對機(jī)體是有利的,但是當(dāng)IL-6水平過高就會引起一系列的炎性損害。近年研究發(fā)現(xiàn)：IL-6在呼吸系統(tǒng)炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,這主要表現(xiàn)在IL-6對氣道炎癥的發(fā)生和氣道結(jié)構(gòu)重建的促進(jìn)作用。CRS也是一種呼吸道疾病,有研究證實(shí)IL-6在CRS的鼻腔黏膜中表達(dá)升高,同樣IL-6在鼻息肉的炎癥和氣道重建中也有著重要作用[8]。有研究發(fā)現(xiàn)鼻竇炎患者鼻腔灌洗液中IL-6水平增高，而在鼻息肉中IL-6的作用卻存在爭議。Danielsen等[8]曾報道鼻息肉中IL-6水平較正常下鼻甲中的IL-6水平更高，提示IL-6可能促進(jìn)鼻息肉的發(fā)展。張美麗等[9]研究發(fā)現(xiàn),IL-6存在基因多態(tài)性,且IL-6的某些基因型與CRS易感性有一定的關(guān)系。

兒童CRS的誘因當(dāng)中，腺樣體肥大是一個重要的病因[10]。由于腺樣體肥大影響患兒鼻腔通氣及引流功能，進(jìn)而引起兒童CRS。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-6在腺樣體組織中的表達(dá)與腺樣體肥大的分級相關(guān)，腺樣體肥大越明顯，腺樣體組織中的IL-6水平越高，提示腺樣體組織中IL-6高表達(dá)導(dǎo)致局部免疫異常，與兒童腺樣體肥大引起的各種耳鼻喉科并發(fā)癥相關(guān)[11]。Rudmik等[12]研究發(fā)現(xiàn),在腺樣體組織中含有豐富的肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞等淋巴細(xì)胞,腺樣體發(fā)炎時可以通過激活肥大細(xì)胞,釋放多種分泌性介質(zhì),其中包括組胺、類胰蛋白酶等,使外周血單核細(xì)胞釋放IL-6增加。

本研究發(fā)現(xiàn)，IL-6在伴有CRS患兒血漿中的水平明顯升高，而腺樣體組織中IL-6的表達(dá)也明顯升高，作者推測IL-6可能通過一些途徑作用于炎癥細(xì)胞，使炎癥細(xì)胞合成釋放多種細(xì)胞炎性因子，同時又可直接或間接地促進(jìn)炎癥細(xì)胞的聚集及活化，從而促進(jìn)了細(xì)胞因子和炎癥細(xì)胞的惡性循環(huán)，使得鼻黏膜炎癥持續(xù)存在并加重，從而參與CRS的發(fā)生，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]Attur MG,Patel RN,Abramson SB,et al.Interleukin-17 up-regulation of nitric oxide production in human osteoarthritis cartilage[J].Arthritis Rheum,1997,40(6):1050-1053.

[2]Polgar A,Brozik M,Toth S,et al.Soluble interleukin-6 receptor in plasmaand in lymphocyte culture supernatants of healthy individuals and patients with systemic lupus erythematosus and rheumatoid arthritis[J].Med SciMonit,2000,6(1):13-18.

[3]Kimura A,Kishimoto T.IL-6:Regulator of Treg/Th17 balance[J].Eur J Immunol,2010,40(7):1830-1835.

[4]趙鵬展,胡克,崔忠惠,等.阻塞性睡眠呼

吸暫停低通氣綜合征患者呼出氣冷凝液中TNF-α、IL-6的研究[J].臨床肺科雜志,2011,16(4):620-622．

[5]Barczyk A,Pierzchala W,Kon OM,et al.Cytokine production by bronchoalveolar lavage T lymphocytes in chronic obstructive pulmonary disease.[J].J Allergy Clin Immunol,2006,117(6):1484-1492.

[6]Agrawal DK,Shao Z.Pathogenesis of Allergic Airway Inflammation[J].Curr Allergy Asthm R,2010,10(1):39-48.

[7]李亞灝，林向陽．慢性支氣管炎急性期患者血清白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子-α水平變化的研究[J]．海南醫(yī)學(xué),2008,19(5)：23-24．

[8]Danielsen A,Tynning T,Brokstad KA,et al.Interleukin 5,IL-6,IL-12,IFNy,RANTES,and fractalkine in human nasal polyps,turbinate mucosa and serum[J].Eur Arch Otorhinolaryngol,2006,263(3):282-289.

[9]張美麗，倪培華，蔡昌枰，等．IL-6基因多態(tài)性與慢性鼻-鼻竇炎易感性的相關(guān)性研究[J]．臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2012，26(5)：197-200,204．

[10]高惠萍，龐敏飛．腺樣體肥大兒童合并慢性鼻竇炎的臨床調(diào)查及相關(guān)性分析[J]．中國耳鼻咽喉頭頸外科，2015，22(2)：89-91.

[11]沈康，李文生，趙征．腺樣體肥大與IL-6及耳鼻喉并發(fā)癥的相關(guān)性分析[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2013,42(13)：1512-1514．

[12]Rudmik L,Soler ZM,Orlandi RR,et al.Early postoperative care following endoscopic sinus surgery:an evidence-based review with recommendations[J].Isnt Forum Allergy Rhinol,2011,1(6):417-430.

Expression and significance of interleukin-6 in children with chronic rhinosinusitis*

WangBing,ShuYan,LiangJia,YaoHongbing△

(DepartmentofOtolaryngology,HeadandNeckSurgery,theChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014,China)

[Abstract]ObjectiveTo evaluate the expression of interleukin-6(IL-6) on peripheral blood and adenoid in children with chronic rhinosinusitis (CRS) and adenoidal hypertrophy,to investigate the mechanism of IL-6 on the occurrence and development of CRS.MethodsA total of 216 cases of hypertrophic adenoids were collected,including 95 CRS children with hypertrophic adenoid(CRS group),70 children with allergic rhinitis and hypertrophic adenoid (AR group)and 51 children with hypertrophic adenoid(control group).The plasma IL-6 concentrations were detected by ELISA,and the expression and distribution of IL-6 in adenoid tissue was detected by immunohistochemistry.ResultsThe plasma IL-6 level in CRS group was (49.8±8.3)pg/mL,significantly higher than that of in control group (33.6±6.9)pg/mL and in AR group (35.9±5.6)pg/mL,differences had statistic significance(P<0.05).However,there was no statistically significant difference between AR group and control group.Meanwhile,the presence of IL-6 in adenoid tissue was mainly seen in inflammation cells and fibroblasts while less in mesenchymal cells,there were statistical differences between CRS group and control group/AR group (P<0.05),but no statistical difference between AP group and control group(P>0.05).ConclusionAmong children with CRS,expression of IL-6 whether in peri-plasma or in focal tissue was higher than those without CRS,demonstrating that IL-6 may play an important role in the pathogenesis and developemnt of CRS in children.

[Key words]sinusitis;chronic disease;interleukin-6;children

doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.01.007

基金項目：重慶市衛(wèi)生局課題資助項目(20090116)。

作者簡介：王冰(1977-)，講師，碩士，主要從事耳鼻喉研究。通訊作者，E-mail:yaohongbing@163.net。

[中圖分類號]R765.4

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)01-0019-02

(收稿日期：2015-09-18修回日期：2015-10-25)