隋利強(qiáng)　王　建　黃禮書　陳喆明

(1 福建中醫(yī)藥大學(xué)，福州，350122； 2 濟(jì)寧市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，濟(jì)寧，272025)

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蜜炙酸棗仁中斯皮諾素含量測(cè)定

隋利強(qiáng)1王建2黃禮書1陳喆明1

(1 福建中醫(yī)藥大學(xué)，福州，350122； 2 濟(jì)寧市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，濟(jì)寧，272025)

摘要目的：以高效液相色譜法測(cè)定蜜炙酸棗仁中斯皮諾素的含量。方法：采用反相高效液相色譜法，以WondaCract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5 μm)為色譜柱，乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)335 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃。結(jié)果：斯皮諾素的線性范圍0.005～0.3 mg/mL，r=0.9965，平均回收率為99.74%，RSD=1.46%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為蜜炙酸棗仁的炮制工藝研究及質(zhì)量控制提供檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞高效液相色譜法；蜜炙酸棗仁；斯皮諾素

酸棗仁為鼠李科Rhamnaceae植物酸棗的種子，是臨床應(yīng)用較為廣泛的中藥，具有養(yǎng)肝、寧心安神、生津、斂汗的功效，臨床主要用于治療失眠、心脾氣血兩虛，脾不統(tǒng)血證與治陰虧內(nèi)熱，心神不寧證,臨床常用于治療虛煩不眠[1-2]。

有關(guān)酸棗仁炮制方法的記載，最早見于南齊《劉涓子鬼遺方》，記載方法為炒法。歷代炮制方法包括蒸法、酒浸法、姜汁炒等。2015版《中華人民共和國(guó)藥典》中收載酸棗仁、炒酸棗仁。除此之外，福建省臨床常用蜜棗仁，初步調(diào)研,福州同春藥業(yè)有限公司供應(yīng)的酸棗仁有酸棗仁、炒酸棗仁、蜜棗仁3種炮制品，近些年蜜棗仁銷售量接近炒酸棗仁，說明蜜棗仁在福建省用的比較普遍，是地方習(xí)慣用藥。該飲片用藥歷史悠久，收載于《福建省中藥飲片炮制規(guī)范》[3]。

實(shí)踐證明,酸棗仁蜜炙后不但可增強(qiáng)益陰斂汗作用，而且利于貯藏。研究顯示，酸棗仁、炒酸棗仁、蜜棗仁3種炮制品在相同條件下貯藏12個(gè)月，蜜棗仁顏色、光澤、氣味、霉變、蟲蛀等5個(gè)方面均優(yōu)于酸棗仁和炒酸棗仁。初步分析，酸棗仁經(jīng)煉蜜炮制后，蜂蜜易滲人酸棗仁內(nèi)部組織，降低酸棗仁的含水量，使酸棗仁不易吸潮霉變，顏色鮮艷，光澤度好，易于貯藏。此外,蜂蜜含有較豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，如葡萄糖、果糖、蔗糖、有機(jī)酸、維生素及無機(jī)鹽類等，具滋補(bǔ)作用，味甜能矯味，并具有潤(rùn)肺止咳、潤(rùn)腸通便、解毒的作用，所以酸棗仁蜜炙后可增強(qiáng)益陰斂汗作用。另外，蜂蜜中含有大量還原糖，能防止藥材有效成分的氧化變質(zhì)[4]。

現(xiàn)代研究表明酸棗仁含酸棗仁皂苷、三萜化合物等，具有鎮(zhèn)靜、催眠、安神的作用。此外，2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》中所規(guī)定的酸棗仁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中還包括斯皮諾素，該成分是酸棗仁中起效成分和質(zhì)控成分。所以本研究以斯皮諾素為標(biāo)準(zhǔn)品，用高效液相色譜法測(cè)定了蜜炙酸棗仁中該成分的含量，旨在為蜜炙酸棗仁中斯皮諾素的含量測(cè)定及質(zhì)量控制提供檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[5]。

1儀器與試劑

電子天平(梅特勒-托利多稱重設(shè)備有限公司，XS105型)；電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，京制00000246)；高效液相色譜儀(戴安，U3000型)。

甲醇(20141218，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(20140321，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；酸棗仁(20141107，隴西聚堂中藥材實(shí)業(yè)有限公司)；斯皮諾素(99.35%，MuST-14042311，中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱WondaCract ODS-2，(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水；檢測(cè)波長(zhǎng)：335 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；以乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B；梯度洗脫；理論板數(shù)按斯皮諾素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

表1　斯皮諾素HPLC梯度洗脫條件

圖1　蜜棗仁樣品HPLC圖譜

圖2　斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC圖譜

2.2對(duì)照品溶液的制備取斯皮諾素對(duì)照品10 mg,精密稱定，于10 mL容量瓶中加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得，HPLC圖譜見圖1。

2.3供試品溶液的制備參考文獻(xiàn)[6-8]，取蜜棗仁樣品粉末(過四號(hào)篩)約1 g，精密稱定，置索式提取器中，加石油醚(60%～90%)適量，加熱回流4 h，棄去石油醚液，藥渣揮去溶劑，加入70%乙醇20 mL，加熱回流2 h，濾過，濾渣用70%乙醇5 mL洗滌，合并洗液與濾液，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[9-15]，HPLC圖譜見圖2。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取斯皮諾素對(duì)照品貯備液0.1、0.15、0.2、0.3、0.6 mL,分別置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，配成系列對(duì)照品溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)得各濃度峰面積，以峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，得回歸曲線Y=220.23x+1.4498，R=0.9930，結(jié)果顯示斯皮諾素在0.05～0.3范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。見圖3。

2.5精密度試驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液(1 mg/mL)0.2 mL于2 mL容量瓶，加甲醇定容，進(jìn)樣量為10 μL,分別連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果對(duì)照品峰面積的RSD=1.52%。見表2。

圖3　斯皮諾素標(biāo)準(zhǔn)曲線

編號(hào)123456RSD%峰面積23.9924.0524.1724.1224.3124.991.52

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取對(duì)照品溶液(1 mg/mL)0.2 mL于2 mL容量瓶，加甲醇定容，進(jìn)樣量為10 μL，分別于1、2、3、4、6、8、10和12 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果對(duì)照品峰面積的RSD=1.89%。見表3。

表3　穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品5份，每份1 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備溶液，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定5個(gè)結(jié)果RSD為2.0%。見表4。

表4　重復(fù)性試驗(yàn)

2.8加樣回收率試驗(yàn)精密量取已知含量(0.1430 mg/mL)的炒酸棗仁樣品溶液0.9 mL，加入0.1 mL對(duì)照品溶液(1 mg/mL)，搖勻，進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測(cè)定，平行測(cè)定6份。計(jì)算平均回收率，結(jié)果平均回收率為99.74%，RSD=1.46%。見表5。

表5　斯皮諾素加樣回收率

2.9樣品含量測(cè)定樣品按上述供試品溶液的制備方法制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液10 μL，依照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。見表6。

表6　樣品斯皮諾素含量測(cè)定結(jié)果

3討論

本實(shí)驗(yàn)以斯皮諾素為標(biāo)準(zhǔn)品，用HPLC法測(cè)定了福州特色飲片蜜炙酸棗仁中該成分的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為蜜炙酸棗仁的炮制工藝研究及質(zhì)量控制提供檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

目前，蜜棗仁生產(chǎn)多依賴傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，缺乏客觀化、數(shù)字化、可推廣的工藝參數(shù)。如此條件下，很難保證飲片質(zhì)量，進(jìn)而會(huì)影響臨床療效。因此，斯皮諾素含量可作為質(zhì)控指標(biāo)，開展蜜棗仁炮制工藝規(guī)范化和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

實(shí)驗(yàn)過程中，嘗試分析生棗仁中斯皮諾素的含量，發(fā)現(xiàn)酸棗仁蜜炙后斯皮諾素含量稍有升高，可能與炮制過程輔料和加熱有關(guān)，尤其是加熱可在一定程度上促進(jìn)藥效成分的溶出。如需進(jìn)一步研究酸棗仁蜜炙過程中的變化，需結(jié)合多個(gè)化學(xué)成分指標(biāo)和藥效學(xué)分析進(jìn)行深入研究。

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(2015-10-20收稿責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

Determination of Spinosin in Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae

Sui Liqiang1,Wang Jian2,Huang Lishu3,Chen Zheming3

(1FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China; 2JiNingCenterforFoodandDrugControl,JiNing272025,China; 3FujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122,China)

AbstractObjective:To determine the content of Spinosin in Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae(Mizhi Suanzaoren) by HPLC(High Performance Liquid Chromatography).Methods:The experiment was conducted in the condition of WondaCract ODS-2(250 mm×4.6 mm,5μm),mobile phase isacetonitrile-water,detection wavelength 335nm,and flow velocity 1 mL/min,column temperature 30 ℃,using RP-HPLC.Results:The linearity range of Spinosin is 0.005～0.3 mg/mL,r=0.9965,average recovery rate is 99.74%,RSD=1.46%.Conclusion:This method is accurate with great reproducibility.It can offer testing standards for processing study and quality control of Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae.

Key WordsHPLC; Honey-fried Semen Zizyphi Spinosae; Spinosin

基金項(xiàng)目：福建省自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目——基于特征成分“安神”增效的“蜜棗仁”炮制原理研究(編號(hào)：2016J01386)；福建中醫(yī)藥大學(xué)校管重點(diǎn)學(xué)科專項(xiàng)課題——福州特色飲片“蜜棗仁”炮制工藝規(guī)范化研究(編號(hào)：X2014106-學(xué)科)

通信作者：隋利強(qiáng)(1981.05—)，男，研究生，講師，研究方向：中藥炮制原理與炮制工藝研究，E-mail：suiliqiang007@163.com

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.06.040