李林+吳勵(lì)梅+羅一平+連蔚+李彩英

【摘要】 目的 分析探討不育患者精子DNA完整性與精液參數(shù)的相關(guān)性， 為臨床治療男性不育提供參考依據(jù)。方法 50例男性不育患者精液標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組， 50例健康體檢的正常生育男性精液標(biāo)本作為對(duì)照組， 兩組均進(jìn)行精液常規(guī)檢查、精子形態(tài)分析和精子DNA完整性檢測(cè)， 對(duì)比分析兩組的精子濃度、精子存活率、前向運(yùn)動(dòng)精子（PR）百分率及精子DNA碎片化指數(shù)（DFI）。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組的精子濃度、精子存活率、PR百分率均低于對(duì)照組， 精子DFI高于對(duì)照組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 不育患者的精液參數(shù)和正常生育者存在差異， 精子DNA完整性與精液參數(shù)具有不同的相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】 不育；精子DNA完整性；精液參數(shù)；相關(guān)性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.18.073

男性不育是指育齡夫婦同居1年， 未采取任何避孕措施， 因男方原因造成不育的現(xiàn)象稱為男性不育[1]， 相關(guān)的臨床研究資料表明， 精子DNA完整性和男性的生育能力具有密切的關(guān)系[2]。本文為進(jìn)一步研究不育患者精子DNA 完整性和精液參數(shù)的相關(guān)性， 特選擇了本院?？崎T診就診的不育患者和正常生育者各50例標(biāo)本作為本次研究的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組， 兩組均進(jìn)行精子DNA完整性檢測(cè)和精子形態(tài)分析， 最后分析其精子濃度、精子存活率、PR百分率及精子DFI來(lái)得出研究結(jié)論， 現(xiàn)報(bào)告整理完畢， 具體陳述如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇本院生殖健康與不孕科2013年2月～2014年1月就診的男性不育患者50例的精液標(biāo)本作為本次研究的實(shí)驗(yàn)組， 另選擇同時(shí)段進(jìn)行健康體檢的正常生育的男性50例精液標(biāo)本作為本次研究的對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組年齡25～45歲， 平均年齡（26.07±7.26）歲；不育時(shí)間2～6年， 平均不育時(shí)間（3.09±2.32）年；精液體積（2.32±0.15）ml；其中包括10例少精癥患者（精子濃度<15×106/ml）、21例弱精癥患者（PR%<32%）及19例白細(xì)胞精子癥患者[白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）>1×106/ml]。對(duì)照組年齡25～44歲， 平均年齡（27.54±6.37）歲。經(jīng)確認(rèn)， 參與本次研究的所有患者均在婚后同居1年以上、夫妻性生活正常、未采取避孕措施而未育， 所有患者均符合本次研究的基本條件。兩組年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法

1. 2. 1 精液標(biāo)本采集 所有受檢者檢查前必須禁欲3～7 d， 要求在實(shí)驗(yàn)室附近取精， 采用手淫法取精液， 全部收集于干燥無(wú)菌取精杯中， 且精液量≥1.5 ml， 放置37℃恒溫箱內(nèi)， 等待其完全液化。

1. 2. 2 精液常規(guī)及精子形態(tài)分析 嚴(yán)格按照《世界衛(wèi)生組織人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行精液分析。采用一次性精子分析玻片法， 人工鏡檢法分析精子濃度和活動(dòng)率；采取0.5%伊紅染色法分析精子存活率；精液白細(xì)胞過(guò)氧化酶（正甲苯胺法）染色法檢測(cè)精液中的白細(xì)胞數(shù)；改良巴氏染色法染色， 并嚴(yán)格采取精子形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)精子進(jìn)行判斷、分類計(jì)算形態(tài)正常精子百分率。

1. 2. 3 精子DNA完整性檢測(cè) 采用精子染色質(zhì)擴(kuò)散法（SCD）檢測(cè)精子核DNA完整性， 檢測(cè)試劑盒由深圳華康生物公司提供，方法：用精子稀釋液將精子密度調(diào)至（5～10）×106/ml， 再吸取60 μl上述稀釋液加到低熔點(diǎn)瓊脂糖管中， 混勻取出30 μl滴加到水平位置的預(yù)處理載玻片上， 蓋上蓋玻片， 載玻片置于2～8℃冰箱4 min， 從冰箱取出載玻片， 輕輕滑拉移走蓋玻片。迅速將預(yù)處理載玻片浸入變性液中7 min， 在蒸餾水浸泡5 s；然后取出載玻片使其豎立， 用濾紙吸干玻片表面上水珠， 浸入裂解液中準(zhǔn)確反應(yīng)20 min， 反應(yīng)畢浸入洗滌液3 min， 依次浸入70%、90%、無(wú)水乙醇溶液中脫水各2 min， 載玻片自然晾干。 用瑞氏染色劑進(jìn)行染色， 風(fēng)干載玻片， 待完全干燥后在常規(guī)顯微鏡下觀察， 計(jì)數(shù)400個(gè)精子， 統(tǒng)計(jì)小暈環(huán)、無(wú)暈環(huán)和退化的異常精子百分率， 精子DNA完整性=1-DFI。

1. 3 觀察指標(biāo) 對(duì)兩組標(biāo)本的精子濃度、精子存活率、PR百分率及精子DFI進(jìn)行觀察， 以探討不育患者精子DNA完整性與精液參數(shù)的相關(guān)性。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組的精子濃度、精子存活率、PR百分率均低于對(duì)照組， 精子DFI高于對(duì)照組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

遺傳物質(zhì)正確傳遞給后代需要以精子及卵子DNA保持完整為前提， 精子DNA 的完整性在受精過(guò)程和胚胎發(fā)育中扮演著重要的角色。多年的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)表明[3]， 自然生育、輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局與精子質(zhì)量的優(yōu)劣具有密切的聯(lián)系， 精子DNA的損傷會(huì)給輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局、自然生育造成不良影響， 且其損傷與低受精率、低著床率及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)具有密切的關(guān)系。目前， 臨床上關(guān)于DNA的損傷機(jī)制尚未有明確的闡述， 但多認(rèn)為精子DNA的損傷和生精過(guò)程中細(xì)胞的凋亡、精子運(yùn)輸過(guò)程中氧自由基的影響、精子染色質(zhì)包裝異常、細(xì)胞凋亡與魚精蛋白異常有關(guān)， 且相關(guān)的臨床研究資料表明[4-6]， 低水平的氧自由基會(huì)影響精子高激活運(yùn)動(dòng)， 進(jìn)而導(dǎo)致精子DNA損傷增加。相關(guān)的臨床資料表明[7， 8]， 男性精子DFI如果在30%以上， 就會(huì)降低正常妊娠的可能性， 精子細(xì)胞核內(nèi)的DFI含量一般經(jīng)歷著從少到多的過(guò)程， DFI的分布含量較少， 精子DNA蛋白編碼區(qū)基因就會(huì)在精漿中有害因素的影響下發(fā)生損壞， 精子功能在此影響下也會(huì)受到損傷， 且精子染色質(zhì)中的DFI也會(huì)影響精子的穩(wěn)定性[9， 10]， 導(dǎo)致體外受精（IVF）過(guò)程中雄性原核的形成受阻， 降低受精率。

本研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明， 實(shí)驗(yàn)組的精子濃度、精子存活率、PR百分率均低于對(duì)照組， 精子DFI高于對(duì)照組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述， 不育患者的精液參數(shù)和精子活力正常者存在差異， 精子DNA 完整性與精液參數(shù)具有不同的相關(guān)性。

參考文獻(xiàn)

[1] 焦瑞寶， 唐吉斌， 馮恒孝， 等.不育患者精子DNA完整性與精液參數(shù)關(guān)系的臨床研究.安徽醫(yī)學(xué)， 2013， 34（6）：804-806.

[2] 龔道元， 李子萍， 莊錫偉， 等.男性不育癥患者精子DNA 完整性與精液分析參數(shù)相關(guān)性研究.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2012， 33（19）：2321-2322， 2324.

[3] 蔡成云， 徐振山， 宋禮華， 等.不育癥患者精子DNA 完整性與精液相關(guān)參數(shù)的研究.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2014， 25（6）：798-801.

[4] 馬強(qiáng)， 申琴， 焦海燕， 等.精子DNA完整性和hOGG1 rs1052133 與原發(fā)性男性不育的相關(guān)性研究.中國(guó)男科學(xué)雜志， 2015， 29（9）： 18-23.

[5] 段永剛， 張瓊麗， 劉大偉， 等.精漿彈性硬蛋白酶、IL-6、IL-23 在男性不育患者精漿中的表達(dá)及其臨床意義. 中華臨床醫(yī)師雜志（電子版）， 2012， 6（24）：8103-8107.

[6] 姚文亮， 陳勝輝.補(bǔ)腎強(qiáng)精顆粒改善特發(fā)性弱精子癥患者DNA完整性的臨床研究.中國(guó)生化藥物雜志， 2015， 35（10）：25-28.

[7] 馬莉， 馬芳芳， 王厚照. 福建地區(qū)5680例男性不育患者精子參數(shù)和精子DNA完整性分析. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2015（9）： 100-101.

[8] 曾蘭， 葉飛， 李運(yùn)星， 等. 精子 DNA 完整性與精液常規(guī)參數(shù)相關(guān)性分析. 中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科， 2014（4）：47-50.

[9] 孫靜波， 姜宏， 何瑞冰. 精子DNA完整性與精液參數(shù)的相關(guān)性研究. 中國(guó)男科學(xué)雜志， 2010， 24（4）：26-29.

[10] 焦瑞寶， 馮恒孝， 唐吉斌， 等. 不育患者精液的氧化應(yīng)激對(duì)精子DNA完整性等參數(shù)的影響. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)， 2013， 28（6）：487-491.

[收稿日期：2016-05-16]