卜小芳　王　健　倪　寧　田恒忠　祁慶松　孔占一

(安徽省淮南市婦幼保健院兒科，淮南 232007)

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肺炎支原體肺炎患兒外周血CXCL8及其mRNA表達(dá)①

卜小芳王健②倪寧田恒忠祁慶松孔占一

(安徽省淮南市婦幼保健院兒科，淮南 232007)

①本文為安徽省自然科學(xué)基金(No.1308085MH148)、安徽省教育廳自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.KJ2010A086)、淮南市2015年科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2015A2406)和安徽省教育廳重大自然科學(xué)研究項(xiàng)目(No.KJ2016SD20)。

②安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原學(xué)與免疫學(xué)教研室，淮南232001。

目的：探討支原體肺炎患兒外周血CXCL8及其mRNA表達(dá)的臨床意義。方法：收集2013年10月～2015年3月淮南市婦幼保健院收治的支原體肺炎患兒48例，其中重癥12例，輕癥36例，以ELISA法檢測(cè)患兒血清CXCL8含量，PCR法檢測(cè)患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)CXCL8 mRNA水平。以GAPDH為參照，以lgcDNA/lgGAPDH比值代表其最終mRNA水平。結(jié)果：支原體肺炎患兒外周血血清CXCL8含量及外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)CXCL8 mRNA水平分別為(298.917±51.860)pg/ml、(1.848±0.525)lgcDNA/lgGAPDH，與正常對(duì)照相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，重癥患兒外周血CXCL8及其mRNA進(jìn)一步升高，與輕癥組相比，血清CXCL8含量差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而CXCL8 mRNA水平差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性期以紅霉素靜脈注射7～10 d，使患兒病情得以明顯控制，咳嗽癥狀減輕，肺部炎癥逐漸改善，病情得到有效控制，再以阿奇霉素序貫治療2～3周，患兒病情逐步由急性期轉(zhuǎn)為恢復(fù)期，此時(shí)患兒外周血CXCL8及其mRNA水平明顯降低，與急性期相比，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：支原體肺炎患兒外周血CXCL8及其mRNA表達(dá)水平增高，并與病情的嚴(yán)重程度相關(guān)。CXCL8參與支原體肺炎的發(fā)病過(guò)程，并對(duì)病情的輕重程度和轉(zhuǎn)歸有一定的提示作用。阿奇霉素可通過(guò)抑制肺炎支原體增殖途徑降低患兒血清中CXCL8含量、下調(diào)CXCL8 mRNA的表達(dá)，逐漸抑制由肺炎支原體介導(dǎo)的免疫損傷。

肺炎支原體；支原體肺炎；外周血單個(gè)核細(xì)胞；CXCL8；mRNA

支原體肺炎(Mycoplasma pneumoniae pneumonia,MPP)亦稱原發(fā)性非典型性肺炎，是由肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,MP)引起，并以支氣管和肺間質(zhì)為主要病變的急性炎癥，嬰幼兒及兒童多見(jiàn)。近年來(lái)研究資料顯示嬰幼兒MP感染率達(dá)12.3%，且季度分布從1.5%至27.3%不等[1]。我國(guó)嬰幼兒MP感染水平亦呈上升趨勢(shì)[2]，且具有好發(fā)年齡提前、病程長(zhǎng)、易反復(fù)等特點(diǎn)，其確切機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。目前研究表明，肺炎支原體不僅是病原體，也是重要的變應(yīng)原，可激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)強(qiáng)烈的應(yīng)答反應(yīng)。細(xì)胞免疫在患兒肺間質(zhì)性炎癥病理改變過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)功能。CXCL8是CXC趨化因子亞家族中的重要成員，是關(guān)鍵的炎癥因子，在介導(dǎo)炎癥反應(yīng)中起重要作用[3]。為探討CXCL8在支原體肺炎疾病轉(zhuǎn)歸中的作用，本文選擇典型的支原體肺炎患兒，檢測(cè)其外周血CXCL8及其mRNA，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1臨床資料48例支原體肺炎患兒系2013年10月～2015年3月本市婦幼保健院收治的病人，其中男28例，女20例，年齡4月～10歲，其中年齡3～12月者6例，1～3歲者18例，3～10歲者24例。臨床診斷依據(jù)兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南(2013修訂)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4，5]。入選患兒血清抗-MP-IgM(+)，痰培養(yǎng)陰性，無(wú)免疫系統(tǒng)疾病，無(wú)長(zhǎng)期使用皮質(zhì)激素使用史。依患兒病情分為輕癥36例、重癥12例兩組，依患兒病程分為急性期和恢復(fù)期。取同期門(mén)診體檢正常30例兒童為對(duì)照，男女各為15例，年齡5個(gè)月～15歲，無(wú)呼吸道及全身感染。

1.1.2試劑與儀器CXCL8酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(法國(guó)DIACLONE公司)；胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Bio Basic Inc(BBI)公司；Ficoll-Hypaque分離液(1.077±0.001)購(gòu)自上海試劑二廠；Trizol試劑購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；RPMI1640完全培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)Sigma公司； TIANScript cDNA合成試劑盒購(gòu)自北京天根生化科技有限公司；LightCyder FastStart DNA Master SYBR Green Ⅰ(德國(guó)Roche公司)。EXL-50X全自動(dòng)洗板機(jī)、EXL-808全自動(dòng)酶標(biāo)儀均購(gòu)自美國(guó)Bio-Tek公司；5415D臺(tái)式高速離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；UV-5800PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海元析儀器有限公司)；Nikon E-400熒光顯微鏡購(gòu)自日本Nikon公司；TaKaRa梯度PCR儀TP600(日本TaKaRa公司)；iCycle(R)熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司)；Hema-2000凝膠分析系統(tǒng)(珠海Hema公司)。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集采取患兒腹股溝靜脈血或外周肘靜脈血5 ml，分別置含肝素的無(wú)菌Eppendorf管和潔凈的Eppendorf管。肝素抗凝血以Ficoll-Hypaque常規(guī)分離PBMCs，提取總RNA和CXCL8 mRNA檢測(cè)；普通管常規(guī)分離血清檢測(cè)CXCL8。

1.2.2CXCL8檢測(cè)采用固相夾心ELISA法。以試劑盒所配標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每次檢測(cè)設(shè)空白及標(biāo)準(zhǔn)各2孔，復(fù)孔檢測(cè)。于450 nm處讀取吸光度值，每孔測(cè)定2次，取均值，根據(jù)樣品OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品CXCL8含量。

1.2.3PBMCs總RNA提取及其濃度、純度鑒定參照王健等[6]方法提取PBMCs，并進(jìn)一步提取總RNA，核酸凝膠圖像分析儀下可見(jiàn)清晰的28S、18S、5.8S三條帶，且28S條帶密度是18S條帶密度的2倍以上；分光光度計(jì)測(cè)OD260/OD280值為1.8～2.0，見(jiàn)圖1。

1.2.4CXCL8 mRNA檢測(cè)以隨機(jī)引物分別將所提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)GeneBank中人CXCL8基因序列，以Primer Express軟件設(shè)計(jì)特異性引物和探針，以磷酸甘油醛脫氫酶(Glyceralde-hyde phosphate dehydrogenase,GAPDH)為內(nèi)參，引物和探針序列見(jiàn)表1。所有引物和探針均購(gòu)自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。檢測(cè)步驟參照王健等[6]步驟。為克服系統(tǒng)誤差，以GAPDH為內(nèi)參照，

表1　MP、CXCL8、CXCR1、CXCR2、CD16、GAPDH引物和探針序列Tab.1　Primer sequences of MP,CXCL8,CXCR1,CXCR2,CD16,GAPDH

以lgcDNA/lgGAPDH比值代表其最終mRNA水平。

2　結(jié)果

2.1患兒CXCL8表達(dá)支原體肺炎患兒外周血CXCL8水平較正常對(duì)照組顯著升高，差異有顯著性(P<0.05)，以重癥患兒外周血CXCL8含量升高更顯著；對(duì)比觀察輕癥和重癥患兒外周血CXCL8水平，差異有顯著性(P>0.05)。但動(dòng)態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)患兒急性期CXCL8升高明顯，急性期與恢復(fù)期相比，差異有顯著性(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

2.2患兒PBMCs內(nèi)CXCL8 mRNA表達(dá)支原體肺炎患兒PBMCs內(nèi)CXCL8 mRNA水平較正常對(duì)照組顯著上調(diào)，差異有顯著性(P<0.05)，進(jìn)一步對(duì)比觀察，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是輕癥和重癥患兒之間，還是急性期與恢復(fù)期相比，CXCL8 mRNA載量均有顯著增加，彼此相比差異有顯著性(P<0.05)。如圖3、圖4。凝膠灰度掃描示重癥患兒外周血CXCL8mRNA的掃描激發(fā)熒光條帶亮度增強(qiáng)，如圖4。

圖1　PBMCs總RNA電泳圖Fig.1　Electrophorogram of total RNA from PBMCs

圖2　支原體肺炎患兒外周血CXCL8表達(dá)水平Fig.2　Levels of CXCL8 in peripheral blood of Mycoplasma pneumoniae

2.3患兒胸部X線特征改變支原體肺炎患兒以輕癥病例為主，胸部X線呈現(xiàn)兩肺斑點(diǎn)狀和斑片狀模糊狀陰影，以右肺多見(jiàn)，如圖5A示；而重癥患兒胸片可見(jiàn)大片狀模糊陰影，以右肺大葉性肺炎多見(jiàn)，如圖5C示。予紅霉素、阿奇霉素序貫治療3～4周，患兒病情得以明顯控制，咳嗽癥狀緩解，肺部炎癥逐漸吸收，肺部斑點(diǎn)狀和斑片狀模糊陰影明顯吸收，病情逐步由急性期轉(zhuǎn)歸為恢復(fù)期，如圖5B、D。

圖3　支原體肺炎患兒外周血CXCL8及其mRNA表達(dá)Fig.3　Expression of CXCL8 mRNA in PBMCs of mycoplasmal pneumoniaNote: M.DL2000;1,2.GAPDHC and XCL8 of normal control;3-6.GAPDH and CXCL8 of mycoplasmal pneumonia(light 1 and light 2);7-10.GAPDH and CXCL8 of mycoplasmal pneumonia (severe 1 and sever 2).

圖4　支原體肺炎患兒PBMCs內(nèi)CXCL8 mRNA表達(dá)水平Fig.4　Levels of CXCL8 mRNA in PBMCs of Mycopla-sma pneumoniae

圖5　支原體肺炎治療前后影像學(xué)特征Fig.5　Iconography features of Mycoplasma pneumoniae before and after treatmentNote: A and B.Before and after treatment of the patient (Light)；C and D.Before and after treatment of the patient (Severe).

3　討論

支原體肺炎以間質(zhì)性炎性浸潤(rùn)和急性毛細(xì)支氣管炎為主要病理改變。其以特殊頂端結(jié)構(gòu)中的P1表面蛋白(170 kD)和P30(32 kD)為主要黏附素，黏附于宿主上皮細(xì)胞表面，定植于細(xì)胞間隙，導(dǎo)致宿主細(xì)胞損傷[7,8]。其毒性代謝產(chǎn)物如神經(jīng)毒素、磷脂酶C、過(guò)氧化氫等使宿主纖毛細(xì)胞運(yùn)動(dòng)減弱甚至脫落消失，繼發(fā)引起宿主黏膜上皮細(xì)胞損傷。浸潤(rùn)性炎癥沿支氣管、肺血管周?chē)l(fā)展,達(dá)肺泡間隔,并累及肺泡,引起肺小葉、肺泡間隔的間質(zhì)性浸潤(rùn)[9]。

細(xì)胞免疫在其致病機(jī)制中起重要作用。當(dāng)肺炎支原體感染，觸發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生多種趨化因子如CXCL8、TNF-α等[10]，參與局部和全身炎癥反應(yīng)。適度的炎癥反應(yīng)有利于清除致炎因子，對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用，過(guò)度的炎癥反應(yīng)可致免疫病理?yè)p傷，并不有利于病情恢復(fù)。CXCL8屬ELR+CXC趨化因子，來(lái)源于多種免疫細(xì)胞，如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和肝細(xì)胞等[11]，其趨化吸引多種炎癥細(xì)胞至肺部組織浸潤(rùn)積聚,釋放血管活性物質(zhì),引起組織免疫損傷?，F(xiàn)有研究表明支原體肺炎時(shí)肺部的浸潤(rùn)細(xì)胞主要是單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及中性粒細(xì)胞[12]。

CXCL8是一種分子量約8～10 kD并具有高度活性的小分子多肽，是一種多源性來(lái)源的促炎反應(yīng)細(xì)胞因子[13,14]。本文研究結(jié)果顯示，支原體肺炎患兒外周血CXCL8水平較正常對(duì)照組顯著升高，提示定植于氣管、支氣管上皮細(xì)胞的MP釋放毒性代謝產(chǎn)物，不僅可引起局部上皮細(xì)胞損傷，支氣管水腫、炎癥浸潤(rùn)，還可沿支氣管、肺血管累及肺泡間隔和肺泡，引起肺小葉、肺泡間隔呈間質(zhì)性炎癥。此外，肺炎支原體還可激活患兒的免疫系統(tǒng)，促使單核-巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及上皮細(xì)胞大量分泌CXCL8，部分CXCL8釋放入血，使外周血中CXCL8水平升高，高水平的CXCL8有助于機(jī)體防御MP進(jìn)一步侵入[15]，但過(guò)量的CXCL8可趨化吸引大量炎癥細(xì)胞于病灶處聚集浸潤(rùn)，介導(dǎo)肺、氣管、支氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生免疫損傷，使患兒出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽、胸痛等癥狀。進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)，重癥患兒外周血CXCL8水平進(jìn)一步升高，與輕癥患兒相比，差異無(wú)顯著性，提示CXCL8雖然參與MP所致的免疫病理?yè)p害，但與免疫損傷的程度沒(méi)有明顯關(guān)系。重癥患兒外周血中CXCL8滴度較高，MP黏附局部上皮細(xì)胞使其分泌更多的CXCL8，它們彼此相互協(xié)調(diào)，共同趨化吸引單核-巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞至病灶處聚集，引起氣道平滑肌收縮，腺體分泌增加，氣道反應(yīng)性增高，誘導(dǎo)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)和嚴(yán)重的組織損傷[16]。臨床上針對(duì)這類(lèi)患兒在傳統(tǒng)應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素基礎(chǔ)上，聯(lián)合應(yīng)用糖皮質(zhì)激素或/和靜注人免疫球蛋白，能抑制過(guò)強(qiáng)的免疫反應(yīng)對(duì)組織造成的免疫損傷。

mRNA是反映細(xì)胞內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄翻譯的指標(biāo)，可進(jìn)一步了解某基因在特定條件下的調(diào)控能力。CXCL8 mRNA是調(diào)控轉(zhuǎn)譯CXCL8的敏感指標(biāo)，能直接影響外周血CXCL8的表達(dá)水平[17,18]。肺炎支原體缺乏細(xì)胞壁，細(xì)胞膜中富含膽固醇，其特殊的末端結(jié)構(gòu)(Terminal structure)能促使支原體于呼吸道黏膜上皮細(xì)胞表面黏附定植，引起細(xì)胞損傷，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。PBMCs富含多種免疫細(xì)胞，在機(jī)體抗感染免疫過(guò)程中起關(guān)鍵作用。本文研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，支原體肺炎患兒PBMCs內(nèi)CXCL8 mRNA水平亦較正常對(duì)照組顯著升高，提示細(xì)胞免疫在由支原體介導(dǎo)的炎癥過(guò)程中起重要作用，并能在基因轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)表達(dá)，趨化吸引大量單核-巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，促進(jìn)免疫細(xì)胞活化并分泌更多的CXCL8進(jìn)入外周血[19]，形成局限性的炎性浸潤(rùn)，促進(jìn)吞噬和殺傷支原體。已知支原體肺炎以間質(zhì)性肺炎和急性毛細(xì)支氣管炎為主，感染中毒癥狀輕，但本文發(fā)現(xiàn)少數(shù)重癥患兒表達(dá)高水平的CXCL8 mRNA，過(guò)度上調(diào)的CXCL8 mRNA并不有利于清除入侵的肺炎支原體，反而進(jìn)一步激活炎性因子信號(hào)傳導(dǎo)通路，釋放更多炎性因子，使肺、支氣管等局部炎癥進(jìn)一步加重[20]。

阿奇霉素是第二代大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素,是在紅霉素結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上經(jīng)重排、擴(kuò)環(huán)、還原和N-甲基化等分子重構(gòu)而成，具有組織滲透性好的優(yōu)點(diǎn)[21]，巨噬細(xì)胞可通過(guò)跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)方式促使阿奇霉素在局部病灶細(xì)胞內(nèi)維持較高水平,提高其治療效果。急性期以紅霉素靜脈注射7～10 d，使患兒病情得以明顯控制，咳嗽癥狀減輕，肺部炎癥逐漸改善，病情得到有效控制，再以阿奇霉素序貫治療2～3周， 病情逐步由急性期轉(zhuǎn)歸為恢復(fù)期，此時(shí)患兒外周血CXCL8及其mRNA均明顯降低，與急性期相比，差異有顯著性(P<0.05)。提示阿奇霉素不僅可抑制MP增殖，降低病原體的致炎作用，亦可抑制炎癥反應(yīng)，減輕免疫損傷，并能下調(diào)CXCL8 mRNA表達(dá)，減少CXCL8的分泌，使免疫損傷逐漸恢復(fù)。但部分恢復(fù)期的病例與正常對(duì)照相比，外周血CXCL8或CXCL8 mRNA水平仍較高，對(duì)這些患兒即使臨床癥狀改善，還應(yīng)繼續(xù)鞏固治療，預(yù)防病情復(fù)發(fā)。

胸部X線檢查對(duì)診斷患兒肺和氣道病變，評(píng)估疾病的嚴(yán)重程度及轉(zhuǎn)歸有重要意義[22]。本文研究發(fā)現(xiàn)支原體肺炎患兒以輕癥病例為主，胸部X線以右肺斑點(diǎn)狀和斑片狀模糊狀陰影多見(jiàn)，急性期患兒常呈現(xiàn)混合性通氣功能障礙，即既有限制性通氣功能障礙，又有阻塞性通氣功能障礙。有趣的是不同年齡組患兒胸部X線表現(xiàn)各異，3歲以下的嬰幼兒以斑片狀密度增高影病變多見(jiàn)，兩肺均可受累；年長(zhǎng)患兒以肺段或肺葉實(shí)質(zhì)性浸潤(rùn)病變?yōu)橹鳎乙詥蝹?cè)為主，尤以右下肺和右肺中葉病變多見(jiàn)，邊緣模糊，密度較低，此可能與右肺中葉支氣管較細(xì)長(zhǎng)的解剖結(jié)構(gòu)有關(guān)。隨著進(jìn)一步治療，患兒癥狀改善，病情逐步進(jìn)入恢復(fù)期，但部分患兒因氣道高反應(yīng)性，肺順應(yīng)性恢復(fù)相對(duì)較慢，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)特別加強(qiáng)對(duì)氣道炎癥針對(duì)性治療，增加呼吸訓(xùn)練，促進(jìn)間質(zhì)性病變的恢復(fù)[23,24]。

綜上所述，支原體肺炎是兒童常見(jiàn)的呼吸道疾病，肺炎支原體作為支原體肺炎的病原體，亦是致炎的關(guān)鍵始動(dòng)因素。CXCL8作為一種促炎因子，參與支原體肺炎的發(fā)病過(guò)程，并在炎癥浸潤(rùn)免疫病理反應(yīng)過(guò)程中起重要作用。支原體肺炎患兒外周血CXCL8及其mRNA表達(dá)水平增高，并與病情的嚴(yán)重程度具有一定的相關(guān)性，可作為監(jiān)控病情轉(zhuǎn)歸的實(shí)驗(yàn)室輔助診斷指標(biāo)。阿奇霉素可降低患兒血清中CXCL8含量、下調(diào)CXCL8 mRNA的表達(dá)，逐漸抑制由肺炎支原體介導(dǎo)的免疫損傷。

[1]Dumke R,Schnee C,Pletz MW,etal.Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia spp.infection in community-acquired pneumonia,Germany,2011-2012 [J].Emerg Infect Dis,2015,21(3):426-634.

[2]Sun H,Chen Z,Yan Y,etal.Epidemiology and clinical profiles of Mycoplasma pneumoniae infection in hospitalized infants younger than one year [J].Respir Med,2015,109(6):751-757.

[3]Lin CH,Nai PL,Bien MY,etal.Thrombin-induced CCAAT/enhancer-binding protein β activation and IL-8/CXCL8 expression via MEKK1,ERK,and p90 ribosomal S6 kinase 1 in lung epithelial cells [J].J Immunol,2014,192(1):338-348.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組.兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南(2013修訂)(上)[J].中華兒科雜志,2013,51(10):745-752.

[5]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)呼吸學(xué)組.兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南(2013修訂)(下)[J].中華兒科雜志,2013,51(11):856-862.

[6]王健,韓忠燕,周娜.CXCL8及其受體CXCR1、CXCR2在慢性乙肝患者外周血PMNs中的表達(dá)[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,2015,31(3):375-379,383

[7]Hausner M,Schamberger A,Naumann W,etal.Development of protective anti-Mycoplasma pneumoniae antibodies after immunization of guinea pigs with the combination of a P1-P30 chimeric recombinant protein and chitosan [J].Microb Pathog,2013,64:23-32.

[8]Chang HY,Jordan JL,Krause DC.Domain analysis of protein P30 in Mycoplasma pneumoniae cytadherence and gliding motility [J].J Bacteriol,2011,193(7):1726-1733.

[9]Romero-García J,Francisco C,Biarnés X,etal.Structure-function features of a Mycoplasma glycolipid synthase derived from structural data integration,molecular simulations,and mutational analysis [J].PLoS One,2013,8(12):e81990.

[10]Wang M,Wang Y,Yan Y,etal.Clinical and laboratory profiles of refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia in children [J].Int J Infect Dis,2014,29:18-23.

[11]Kobayashi Y,Wada H,Rossios C,etal.A novel macrolide solithromycin exerts superior anti-inflammatory effect via NF-κB inhibition [J].J Pharmacol Exp Ther,2013,345(1):76-84.

[12]Saraya T,Nakata K,Nakagaki K,etal.Identification of a mechanism for lung inflammation caused by Mycoplasma pneumoniae using a novel mouse model [J].Results Immunol,2011,1(1):76-87.

[13]Russo RC,Garcia CC,Teixeira MM,etal.The CXCL8/IL-8 chemokine family and its receptors in inflammatory diseases [J].Expert Rev Clin Immunol,2014,10(5):593-619.

[14]畢慧娟，王健，黃河勝，等.慢性乙肝患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中CXCR1、CXCR2及IL-8 mRNA表達(dá)與干擾素治療關(guān)系[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2012,28(4):422-425.

[15]Jornot L,Cordey S,Caruso A,etal.T lymphocytes promote the antiviral and inflammatory responses of airway epithelial cells [J].PLoS One,2011,6(10):e26293.

[16]Liu L,Gao Z,Xia C,etal.Comparative study of trans-oral and trans-tracheal intratracheal instillations in a murine model of acute lung injury [J].Anat Rec(Hoboken),2012,295(9):1513-1519.

[17]Jundi K,Greene CM.Transcription of interleukin-8:how altered regulation can affect cystic fibrosis lung disease [J].Biomolecules,2015,5(3):1386-1398.

[18]Gottipati KR,Bandari SK,Nonnenmann MW,etal.Transcriptional mechanisms and protein kinase signaling mediate organic dust induction of IL-8 expression in lung epithelial and THP-1 cells [J].Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol,2015,308(1):L11-L21.

[19]Wang J,Lu Q.Expression of T subsets and mIL-2R in peripheral blood of newborns with hypoxic ischemic encephalopathy [J].World J Pediatr,2008,4(2):140-144.

[20]Tsivkovskii R,Sabet M,Tarazi Z,etal.Levofloxacin reduces inflammatory cytokine levels in human bronchial epithelia cells:implications for aerosol MP-376(levofloxacin solution for inhalation)treatment of chronic pulmonary infections [J].FEMS Immunol Med Microbiol,2011,61(2):141-146.

[21]Curatolo W,Foulds G,Labadie R.Mechanistic study of the azithromycin dosage-form-dependent food effect [J].Pharm Res,2010,27(7):1361-1366.

[22]Tanaka R,Sanada S,Fujimura M,etal.Ventilatory impairment detection based on distribution of respiratory-induced changes in pixel values in dynamic chest radiography:a feasibility study [J].Int J Comput Assist Radiol Surg,2011,6(1):103-110.

[23]舒林華，尚云曉，蔡栩栩，等.肺炎支原體肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液和血清中肺表面活性蛋白的變化及意義[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2012,14(12):928-932.

[24]馬香，丁明杰，趙秀俠，等.不同胸部影像學(xué)表現(xiàn)的肺炎支原體肺炎兒童的肺功能變化特征[J].中國(guó)當(dāng)代兒科雜志,2014,16(10):997-1000.

[收稿2015-11-09修回2015-12-01]

(編輯倪鵬)

Expression of CXCL8 and its mRNA in peripheral blood of children with Mycoplasmal pneumonia

BU Xiao-Fang,WANG Jian,NI Ning,TIAN Heng-Zhong,QI Qing-Song,KONG Zhan-Yi.Department of Pediatrics,the Maternal and Child Health-Care Hospital of Huainan,Huainan 232007,China

Objective:To study the expression of CXCL8 in the serum and CXCL8 mRNA in the peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) of the children with Mycoplasma pneumoniae pneumonia(MPP) and its clinical significance.Methods: Forty-eight children(severe cases 12,light cases 36) with MPP were recruited from October 2013 to March 2015 in the Maternal and Child Health-Care Hospital of Huainan.The concentration of the CXCL8 in serum and the level of CXCL8 mRNA in the PBMCs were measured by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and polymerase chain reaction(PCR).Taking GAPDH as the internal reference,the ratio of lgcDNA/lgGAPDH was regarded as the extreme level of CXCL8 mRNA.Results: The serum level of CXCL8 and expression of CXCL8 mRNA in PBMCs in the children with MPP were (298.917±51.860)pg/ml and (1.848±0.525)lgcDNA/lgGAPDH.Compared with the normal control,there were significant differences between the two groups(P<0.05).Further observation showed that the levels of CXCL8 in serum were no significant difference between in light cases and severe illness(P>0.05).However,the expression of CXCL8 mRNA in peripheral blood of the children with severe illness was significantly higher than those in light cases(P<0.05).Intravenous infusion of Erythromycin was provided in the acute phase for seven to ten days,so that the children′s condition could be significantly controlled,and the symptoms of pulmonary inflammation were also relieved.Followed by the use of sequential therapy of Azithromycin for about two to three weeks,the children′s condition were gradually from acute stage to recovery stage.At this time,the CXCL8 and its mRNA levels in peripheral blood of the sick children were all significantly decreased comparing with those in the acute stage(P<0.05).Conclusion: The expression of CXCL8 and its mRNA were increased in the peripheral blood of the sick children with Mycoplasma pneumonia,and also correlated with the severity of the disease.CXCL8 can participate in the pathogenesis of Mycoplasma pneumonia,and has a certain cue effect on the severity and prognosis of the disease.Azithromycin can reduce the content of CXCL8 in serum of the sick children via the pathway of inhibiting the proliferation of Mycoplasma pneumoniae,and down regulate the expression of mRNA,so that the immune injury mediated by Mycoplasma pneumoniae may be gradually inhibited.

Mycoplasma pneumoniae(MP);Mycoplasma pneumoniae pneumonia(MPP);Peripheral blood mononuclear cells(PBMCs);CXCL8;mRNA

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.08.025

R375+.2R392.11文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

1000-484X(2016)08-1195-05

卜小芳(1967年-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事兒科呼吸道感染與免疫臨床研究，E-mail:13956456688@126.com。

及指導(dǎo)教師：王健(1962年-)，男，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事病原感染與免疫研究，E-mail:wangjian8237@sina.com。