趙喜娃，魏許瑞，張輝，張海波，趙煒，張會(huì)超

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

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·臨床研究·

子宮內(nèi)膜癌組織中LOC285194的表達(dá)變化及其意義

趙喜娃，魏許瑞，張輝，張海波，趙煒，張會(huì)超

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，石家莊050011)

目的觀察子宮內(nèi)膜癌組織中長鏈非編碼RNA(lncRNA)LOC285194的表達(dá)變化，分析其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法采用real-time PCR法檢測108例子宮內(nèi)膜癌組織(病例組)和66例正常子宮內(nèi)膜組織(對(duì)照組)中的LOC285194，分析LOC285194表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果病例組和對(duì)照組LOC285194的相對(duì)表達(dá)量分別為2.160±1.382和4.577±2.865，兩組相比，P<0.05。以病例組LOC285194中位表達(dá)量(1.537)為界，將病例組進(jìn)一步分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。FIGOⅠ、Ⅱ期者LOC285194高表達(dá)率高于Ⅲ、Ⅳ期者(P<0.05)；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者LOC285194高表達(dá)率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。LOC285194低表達(dá)者和高表達(dá)者的術(shù)后生存時(shí)間分別為(53.4±15.6)、(59.8±8.7)個(gè)月，LOC285194低表達(dá)者術(shù)后生存時(shí)間較高表達(dá)者縮短(P<0.05)。結(jié)論子宮內(nèi)膜癌組織中LOC285194呈低表達(dá)，LOC285194表達(dá)異?？赡軈⑴c子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展。

子宮內(nèi)膜癌；長鏈非編碼RNA；LOC285194

子宮內(nèi)膜癌是常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后較差[1]。因此，探索有效的腫瘤標(biāo)志物對(duì)子宮內(nèi)膜癌早期診斷和治療方案的制定有重要意義。長鏈非編碼RNA(lncRNAs)是一組轉(zhuǎn)錄本大于200 nt的RNA，其本身并不具備蛋白編碼功能，但多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)lncRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[2,3]。LOC285194最早見于一項(xiàng)骨肉瘤研究中，被認(rèn)為一種腫瘤生長抑制基因，其表達(dá)下調(diào)后可通過調(diào)控骨細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期從而促進(jìn)骨細(xì)胞增殖[4]。另外，在其他種類腫瘤的相關(guān)研究中，LOC285194也被證實(shí)為腫瘤生長抑制基因[5～8]。目前關(guān)于LOC285194與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究較少，為此，我們觀察了子宮內(nèi)膜癌組織中LOC285194的表達(dá)變化，并分析其與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2010年1月～2012年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦科行手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜癌患者108例，年齡(55 ± 9)歲；根據(jù)2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟分期(FIGO2009)Ⅰ、Ⅱ期83 例，Ⅲ、Ⅳ期25例；組織病理類型為子宮內(nèi)膜樣腺癌91例、非子宮內(nèi)膜樣腺癌17例(漿液性腺癌11例、透明細(xì)胞癌5例、未分化癌1例)。所有子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前均未接受放療、化療及激素治療，術(shù)中取子宮內(nèi)膜癌組織(病例組)，標(biāo)本切除后立即放入液氮冷凍，用于提取RNA。選擇同期行子宮切除且病理檢查證實(shí)子宮內(nèi)膜正常的婦科良性疾病患者66例，年齡(52 ± 12)歲，術(shù)中留取正常子宮內(nèi)膜組織納入對(duì)照組。兩組患者一般資料有可比性。

1.2LOC285194檢測方法采用real-time PCR法。用TRIzol試劑提取組織RNA，紫外分光光度計(jì)檢測其濃度。按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，在20 μL體系中加2 μg總RNA進(jìn)行cDNA合成。根據(jù)real-time PCR試劑盒說明書，以合成的cDNA為模版，加入反應(yīng)試劑，進(jìn)行PCR反應(yīng)，以GAPDH作為內(nèi)參照。LOC285194上游引物序列為5′-TGTGCCTGTTTGACCTCTGA-3′，下游引物序列為5′-AGGAAGGATAAAAGACCGACCA-3′；GAPDH基因上游引物序列為5′-GTCAACGGATTTGGTCTGTATT-3′，下游引物序列為5′-AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT-3′。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，40個(gè)循環(huán)。以2-ΔΔCt表示LOC285194相對(duì)表達(dá)量。

2　結(jié)果

2.1兩組LOC285194相對(duì)表達(dá)量比較病例組和對(duì)照組LOC285194相對(duì)表達(dá)量分別為2.160±1.382、4.577±2.865，兩組相比,P<0.05。

2.2LOC285194表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系以病例組LOC285194中位表達(dá)量(1.537)為界，將病例組進(jìn)一步分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。FIGOⅠ、Ⅱ期者LOC285194高表達(dá)率高于Ⅲ、Ⅳ期者(P<0.05)；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者LOC285194高表達(dá)率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見表1。

表1　LOC258194表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(%)

注：與Ⅰ、Ⅱ期者相比，*P<0.05；與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比，#P<0.05。

2.3LOC285194表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的關(guān)系LOC285194低表達(dá)者和高表達(dá)者的術(shù)后生存時(shí)間分別為(53.4±15.6)、(59.8±8.7)個(gè)月，LOC285194低表達(dá)者術(shù)后生存時(shí)間較高表達(dá)者縮短(P<0.05)。

3　討論

人類基因測序結(jié)果顯示，人類基因組主要為蛋白非編碼基因，而蛋白編碼基因僅僅占2%左右[9]。lncRNA作為蛋白非編碼基因的一類，其轉(zhuǎn)錄本長度超過200 nt，缺乏有意義的開放閱讀框，在過去被認(rèn)為是基因組轉(zhuǎn)錄的“噪音”，近年來其功能受到越來越多的關(guān)注[10]。lncRNA可通過表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平等調(diào)控方式調(diào)控目的基因表達(dá)，在機(jī)體多種生理過程中發(fā)揮重要作用[11,12]。lncRNA表達(dá)失調(diào)參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展，尤其是腫瘤[13]。目前發(fā)現(xiàn)的與腫瘤發(fā)病有關(guān)的lncRNA并不多，且其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的確切作用機(jī)制尚未明確[14～16]。研究[17,18]表明，Hox基因反義基因間RNA(HOTAIR)作為“明星”lncRNA，在子宮內(nèi)膜癌組織和細(xì)胞中呈高表達(dá)，敲低其表達(dá)可抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖及遷移，并可抑制活體子宮內(nèi)膜癌瘤體生長。

LOC285194作為一種新的lncRNA，轉(zhuǎn)錄本長度為2 105 nt，由4個(gè)外顯子構(gòu)成，定位于3q13.31，目前認(rèn)為是一種腫瘤生長抑制基因。LOC285194在骨肉瘤組織及細(xì)胞中呈低表達(dá)，進(jìn)一步降表達(dá)后能通過調(diào)控骨細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期從而促進(jìn)其增殖[4]。研究[5]顯示，LOC285194通過與miR-211、p53等發(fā)生相互作用，進(jìn)而抑制腫瘤進(jìn)展。目前，LOC285194與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的相關(guān)報(bào)道較少。本研究選擇了子宮內(nèi)膜癌組織及正常子宮內(nèi)膜組織，采用real-time PCR法檢測LOC285194，結(jié)果發(fā)現(xiàn)病例組LOC285194相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照組，提示LOC285194低表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病有關(guān)；進(jìn)一步分析LOC285194與子宮內(nèi)膜癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，病例組中FIGOⅠ、Ⅱ期者LOC285194高表達(dá)率高于Ⅲ、Ⅳ期者，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者LOC285194高表達(dá)率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，這提示LOC285194低表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜癌的侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

一項(xiàng)食管鱗癌相關(guān)研究表明，LOC285194低表達(dá)者預(yù)后更差[7]。我們比較了LOC285194高表達(dá)者與低表達(dá)者的生存期，結(jié)果顯示，LOC285194低表達(dá)者術(shù)后生存期較高表達(dá)者明顯縮短，這進(jìn)一步提示LOC285194可能起到抑制子宮內(nèi)膜癌進(jìn)展的作用，與相關(guān)研究結(jié)果一致[4～8]。我們推測，LOC285194與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，有望成為子宮內(nèi)膜癌的一個(gè)新的治療靶點(diǎn)及預(yù)后監(jiān)測指標(biāo)。然而，LOC285194在子宮內(nèi)膜癌發(fā)病中的具體作用機(jī)制尚未明確，這將是我們下一步研究的重點(diǎn)。

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張會(huì)超(E-mail: 185664593@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.014

R737.33

B

1002-266X(2016)19-0042-03

2016-02-28)