馬曉梅，曹燕珍，姬文莉，趙　峰，房新志

(新疆醫(yī)科大學第三附屬腫瘤醫(yī)院病理科， 烏魯木齊　830011)

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·論著·

新疆原發(fā)性肺腺癌表皮生長因子受體基因突變與臨床病理特征分析

馬曉梅，曹燕珍，姬文莉，趙峰，房新志△

(新疆醫(yī)科大學第三附屬腫瘤醫(yī)院病理科， 烏魯木齊830011)

目的：探討新疆原發(fā)性肺腺癌中表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor, EGFR)基因突變情況及與臨床病理特征的關系。方法：采用擴增阻滯突變系統(tǒng)(amplificationrefractorymutationsystem，ARMS)熒光PCR法對59 例(維吾爾族15例，漢族44例)新疆維吾爾族及漢族原發(fā)性肺腺癌手術切除標本進行EGFR基因第18-21號外顯子的突變檢測，同時分析其與患者臨床病理特征的關系。結果：在新疆地區(qū)原發(fā)性肺腺癌手術切除標本患者中，EGFR基因突變率維吾爾族低于漢族，分別為20%(3/15)和54.5%(24/44)，差異具有統(tǒng)計意義(P<0.05)；其中EGFR外顯子19缺失突變維吾爾族2例，漢族9例，外顯子21L858R突變維吾爾族1例，漢族12例，外顯子18G719X突變漢族2例，外顯子21L861Q突變漢族1例。在病理組織學類型上，腺泡狀為主型腺癌EGFR突變率為71%(22/31)，高于實性為主型EGFR突變率6.7%(1/15)和黏液腺癌EGFR突變率20%(1/5)。EGFR基因突變與維吾爾族或漢族肺腺癌患者的性別、年齡、部位、大體類型、淋巴結轉移情況、吸煙指數(shù)及臨床分期等差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論：新疆原發(fā)性肺腺癌EGFR基因突變率在維吾爾族與漢族有不同，可能反映民族遺傳差異性，值得進一步研究。EGFR基因突變常見于高-中分化腺癌，或以腺泡狀為主型多見。

肺腺癌；受體，表皮生長因子；突變；聚合酶鏈反應

目前，肺癌依然是導致人類因惡性腫瘤死亡的首位疾病，其中80%～90%的患者為非小細胞肺癌，并且腺癌已經(jīng)是最常見的病理類型。2011年國際肺癌研究學會(internationalassociationforthestudyoflungcancer,IASCL)、美國胸科學會(Americanthoracicsociety,ATS)和歐洲呼吸學會(Europeanrespiratorysociety,ERS)提出原發(fā)性肺腺癌新的分類標準[1]。肺癌治療方法的選擇主要根據(jù)肺癌的病理類型、分期等個體差異而進行，個體化分子靶向治療是現(xiàn)代腫瘤治療的方向[2]。表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)是一種受體型酪氨酸激酶，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲等方面密切相關，是目前的特異性腫瘤靶向治療分子之一[3-4]。肺腺癌EGFR突變型不僅常見于非吸煙者、女性患者，更顯示明顯的人種差異，即亞裔人群遠高于歐美[5]。新疆維吾爾自治區(qū)位于中國西北邊陲，地處亞歐大陸腹地，周邊與俄羅斯、哈薩克斯坦、蒙古、印度、阿富汗等8個國家接壤，是個多民族聚居地區(qū)，其中維吾爾族和漢族是兩大主要民族。本次研究以維吾爾族和漢族59例原發(fā)性肺腺癌患者為研究對象，檢測了EGFR基因突變情況，從民族差異、病理組織學類型的特點等進行分析。

1　資料與方法

1.1臨床病例

選取2010年1月至2013年3月間新疆醫(yī)科大學第三附屬腫瘤醫(yī)院收治的原發(fā)性肺癌經(jīng)手術切除并病理確診的腺癌標本59例，并按照族別、性別、年齡、部位、大體類型、分化程度、病理組織學類型、淋巴結轉移情況、吸煙指數(shù)及臨床分期等進行臨床病理特征分析。所有患者術前均未接受過放化療和EGFR酪氨酸激酶抑制劑(tyrosinekinaseinhibitor,TKI)等抗腫瘤治療。

1.2標本采集

常規(guī)病理切片及診斷：手術切除標本，常規(guī)取材，10%(體積分數(shù))中性甲醛液體固定24h，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm厚切片，HE染色，按照2011年IASCL、ATS和ERS提出的原發(fā)性肺腺癌分類標準[1]，由高年資病理診斷醫(yī)師進行診斷。

腫瘤組織石蠟切片：10μm厚連續(xù)切10片，用干凈鑷子將9張切片移至干凈的1.5mL離心管，最后一張進行常規(guī)HE染色，觀察腫瘤細胞數(shù)量。

1.3DNA提取

取腫瘤組織病理切片9片，采用德國QIAGEN公司的QIAampDNAFFPETissueKit試劑盒，并按說明書步驟提取DNA，用紫外分光光度計測定DNA純度及濃度。

1.4實時熒光定量PCR擴增

采用擴增耐突變系統(tǒng)(amplificationrefractorymutationsystem，ARMS)擴增EGFR基因18、19、20及21外顯子，具體操作方法參照人類EGFR基因29種突變檢測試劑盒(熒光PCR法，廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司)說明進行。每次實驗均設定各突變的陰、陽性對照孔及空白對照孔。反應循環(huán)參數(shù)：95 ℃ 5min，循環(huán)1次；95 ℃ 25s，64 ℃ 20s，72 ℃ 20s，循環(huán)10次；93 ℃ 25s，60 ℃ 35s，72 ℃ 20s，循環(huán)36次。

1.5統(tǒng)計學分析

采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用卡方檢驗， P< 0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1臨床病理基本資料

59例原發(fā)性肺腺癌患者中，維吾爾族15例，漢族44例；男性26例，女性33例；年齡32～80歲，平均年齡(60.19±10.98)歲。病理組織學類型上，貼壁生長為主型3例，腺泡為主型31例，乳頭狀為主型1例，實性為主型15例，黏液腺癌型5例，腺鱗癌4例。

2.2EGFR基因突變與族別

在59例原發(fā)性肺腺癌手術切除標本中，共有27例患者檢出EGFR基因突變，總突變檢出率為45.8%，其中維吾爾族患者EGFR突變率為20%(3/15)，低于漢族患者54.5%(24/44)，差異具有統(tǒng)計意義(P<0.05)。維吾爾族EGFR外顯子19缺失突變2例，外顯子21L858R突變1例，漢族EGFR外顯子21L858R突變12例，外顯子19缺失突變9例，外顯子18G719X突變2例，外顯子21L861Q突變1例，ARMS法EGFR基因突變檢測結果曲線圖見圖1、2。

2.3EGFR基因突變與臨床特征的關系

從性別上看，女性患者EGFR基因突變率為45.5%(15/33)，男性為46.2%(12/26)；從年齡上看，≥60歲以上患者EGFR基因突變率為44.4%(16/36)，45～59歲為58.8%(10/17)，≤44歲為16.7%(1/6)；從部位上看，左肺突變率為34.8%(8/23)，右肺為52.8%(19/36)；從大體類型上來看，周圍型EGFR突變率為47.4%(18/38)，中央型為42.9%(9/21)。吸煙指數(shù)(每天吸煙支數(shù)×吸煙年數(shù)):指數(shù)為0的EGFR基因突變率為47.6%(20/42)，指數(shù)為0～400的為33.3%(2/6)，指數(shù)≥400的為45.5%(5/11)。有淋巴結轉移的患者EGFR突變率為35.5%(11/31)，無淋巴結轉移的為57.1%(16/28)。從臨床分期上來看，Ⅰ期患者EGFR基因突變率為55.6%(10/18)，Ⅱ期為42.9%(6/14)，Ⅲ期為44%(11/25)，Ⅳ期為0(0/2)。維吾爾族與漢族間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

圖1ARMS法EGFR基因突變檢測結果陰性曲線圖，未檢測到EGFR基因外顯子18、19、20、21突變
Figure 1Graph of EGFR mutation detection negative results by ARMS method, EGFR mutations at Exon-18, Exon-19,Exon-20, Exon-21 were not detected

圖2ARMS法EGFR基因突變檢測結果陽性曲線圖，檢測到EGFR基因外顯子21L858R突變
Figure 2Graph of EGFR mutation detection positive results by ARMS method, EGFR mutations at Exon-21 L858R were detected

2.4EGFR基因突變與腺癌病理學

高分化腺癌EGFR突變率為68.4%(13/19)，中分化腺癌EGFR突變率為52.4%(11/21)，低分化腺癌EGFR突變率為15.8%(3/19)。在組織學類型上，腺泡狀為主型腺癌EGFR突變率71%(22/31)，高于實性為主型EGFR突變率6.7%(1/15)和黏液腺癌EGFR突變率20%(1/5)，見圖3～7，其余組織學類型EGFR突變率為37.5%(3/8)。維吾爾族與漢族間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3　討論

EGFR基因位于人類7號染色體短臂上，由28個外顯子組成，其酪氨酸激酶功能區(qū)由外顯子18～24編碼?；蛲蛔兾挥贓GFR酪氨酸激酶活性區(qū)域的ATP結合位點，TKI通過與ATP競爭結合EGFR胞內酪氨酸激酶區(qū)，阻止酪氨酸殘基磷酸化，從而阻止EGFR信號通路的傳導，最終達到抑制腫瘤增殖、轉移、血管生成等一系列腫瘤細胞生物活動[3]，這也是EGFR-TKI對EGFR基因突變的肺癌患者有效的原因，因此，EGFR基因突變檢測對于臨床肺癌患者的藥物治療具有重要的參考價值。大量研究發(fā)現(xiàn)，EGFR-TKI的療效與EGFR基因外顯子19和21的突變有關，且突變多發(fā)生于腺癌、非吸煙和女性肺癌患者[4-5]。

研究報道表明[6-10]，在日本、韓國、中國臺灣等東亞國家和地區(qū)，非小細胞肺癌中腺癌EGFR基因的突變率為49%～55%，印度、孟加拉國等南亞國家為44%～23%，而沙特阿拉伯等中東地區(qū)、意大利、美國等國家EGFR突變率則比較低，為3%～15%。從人種上來說，蒙古人種(黃色人種)要比高加索人種(白色人種)和尼格羅人種(黑色人種)EGFR突變率要高。新疆是多民族聚集地，其中維吾爾族和漢族是兩大主要民族，分別占總人口的45.7%和39.8%，人類學研究表明，漢族屬于蒙古人種，而維吾爾族混有高加索及蒙古人種等[11]，除種族不同外，兩個民族在社會文化、居住地域、生活方式上亦存在差異。在肺癌的發(fā)生上，維吾爾族和漢族相比，亦有不同的發(fā)病特點，從新疆醫(yī)科大學第三附屬腫瘤醫(yī)院近十年來收治的肺癌患者民族構成情況及臨床資料進行分析發(fā)現(xiàn)，維吾爾族肺癌患者約占6%，漢族患者約占85%，維吾爾族原發(fā)性肺腺癌發(fā)病率相比漢族較低，病理類型鱗癌略高于腺癌，而漢族腺癌略高于鱗癌[12]。本次研究數(shù)據(jù)顯示，維吾爾族原發(fā)性肺腺癌EGFR基因突變率與漢族相比較低，并且兩民族間在性別、年齡、吸煙史，以及組織學類型上差異無統(tǒng)計學意義，因此提示維吾爾族EGFR基因突變率低的原因可能與其民族遺傳特征性有關，但由于維吾爾族病例數(shù)較少，還需擴大樣本量進一步研究。

本次研究以手術切除的浸潤性腺癌為研究對象，EGFR突變陽性病理組織學類型以腺泡狀為主型多見，而實性型為主的低分化腺癌、黏液腺癌等則突變率較低，在分化程度上，EGFR突變陽性常見于高-中分化腺癌。

綜上所述，本研究初步發(fā)現(xiàn)維吾爾族肺癌在啟動基因上可能與漢族不同，更接近于歐美人群，因此，需進一步擴大樣本進行檢測,同時，確定新的驅動基因將有助于維吾爾族肺癌的分子靶向治療。在病理類型上，EGFR突變陽性常見于高-中分化腺癌，以腺泡狀為主型多見，而實性型為主的低分化腺癌、黏液腺癌等則突變率較低，因此對于不同病理類型的肺腺癌患者在選擇分子靶向治療時，從病理類型特征上分析可能會有一定的參考意義。

(志謝：本文經(jīng)北京大學基礎醫(yī)學院病理學系張波教授指導與修改，特此致謝)

圖3腺泡為主型(高分化)，EGFR(+) (HE ×100)圖4腺泡為主型(中分化)，EGFR(+) (HE ×100)圖5實性為主型(低分化)，EGFR(-)(HE ×100)圖6黏液腺癌，EGFR(-) (HE ×100)圖7黏液腺癌(微乳頭)，EGFR(-) (HE ×100)
Figure 3Alveolar predominant adenocarcinoma (well-differentiated ), EGFR mutation detection positive (HE ×100)Figure 4Alveolar predominant adenocarcinoma ( moderately differentiated ), EGFR mutation detection positive (HE ×100)Figure 5Solid predominant (poorly differentiated), EGFR mutation detection negative (HE ×100)Figure 6Mucinous adenocarcinoma, EGFR mutation detection negative (HE ×100)Figure 7Mucinous adenocarcinoma (micro papillary), EGFR mutation detection negative (HE ×100)

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(2015-04-22 收稿)

(本文編輯：劉淑萍)

Analysisofepidermalgrowthfactorreceptormutationsanditsclinico-pathologiccharacteristicsoftheprimarylungadenocarcinomainXinjiangUighurAutonomousRegion

MAXiao-mei,CAOYan-zhen,JIWen-li,ZHAOFeng,FANGXin-zhi△

(DepartmentofPathology,TheThirdAffiliatedHospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China)

Objective：Toclarifytherelationshipbetweenepidermalgrowthfactorreceptor(EGFR)mutationsandtheclinicopathologicfeaturesofprimarylungadenocarcinomasinXinjiang.Methods:ThemutationsofEGFRgeneatexons18-21in59cases(including15casesofUighurand44casesofHan)oflungadenocarcinomatissues,whichwereobtainedfromsurgicalresection,weredetectedbyamplificationrefractorymutationsystem(ARMS)method.Andtherelationshipsamongmutations,raceandclinicopathologicfeatureswereanalyzed.Results:ThefrequenciesofEGFRmutationsinlungadenocarcinomawere20%forUighur,whichwaslowerthanthatinHan(54.5%), P<0.05.Thedeletionmutationsatexon19wereseenin2of15Uighurcasesand9of44Hancases. EGFRmutationswerepresent,includingexon21L858RinoneUighurcaseand12Hancases,exon18G719Xintwoof44casesofHan,exon21L861Qinoneofthem.Onhistologicaltype,thefrequenciesofEGFRmutationinalveolarpredominantadenocarcinomawas71% (22/31),whichwashigherthanboththatinsolidpredominantandmucinouscarcinoma( 6.7%, 20%respectively).Accordingtostatisticanalysis, EGFRmutationswerewithoutcorrelationwiththepatient’sgender,age,location,grosstype,smokingstatusandlymphnodemetastasis(P>0.05). EGFRmutationwasmorefrequentinwell-differentiatedcancer,mainlyinacinarcarcinoma,whilepoorlydifferentiatedadenocarcinomaandmucousadenocarcinomawerelower.Conclusion:TherewasadifferenceofEGFRmutationinprimarylungadenocarcinomabetweenUighurandHaninXinjiang,perhapsreflectingethnicgeneticvariation,whichisworthfurtheranalyzing. EGFRmutationwascommonlydetectedinwellormiddledifferentiatedadenocarcinoma,mainlyinacinarcarcinoma.

Adenocarcinomaoflung;Receptor,epidermalgrowthfactor;Mutation;Polymerasechainreaction

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學基金面上項目(2014211C115)資助SupportedbytheNaturalScienceFoundationofXinjiangUighurAutonomousRegion(2014211C115)

R734.2

A

1671-167X(2016)04-0663-04

10.3969/j.issn.1671-167X.2016.04.019

△Correspondingauthor’se-mail,fangxinzhi2013@163.com

網(wǎng)絡出版時間：2016-6-2210：09：57網(wǎng)絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.4691.R.20160622.1009.002.html