牛玉娟，王　亮，2，王鵬飛，張桂華，劉思當(dāng)（. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東泰安　27000；2. 新泰市畜牧獸醫(yī)局，山東新泰　27200）

山東省部分地區(qū)蛋種雞雞白痢和滑液囊支原體病的流行病學(xué)調(diào)查

牛玉娟1，王亮1，2，王鵬飛1，張桂華1，劉思當(dāng)1
（1. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東泰安271000；2. 新泰市畜牧獸醫(yī)局，山東新泰271200）

［目的］了解雞白痢和滑液囊支原體病在山東省部分地區(qū)種雞場的流行情況。［方法］采用血清平板凝集試驗(yàn)，對濟(jì)寧、泰安、聊城和菏澤4個(gè)市13個(gè)種雞場16 312只雞進(jìn)行了雞白痢沙門氏菌感染調(diào)查，對泰安和聊城2個(gè)市6個(gè)種雞場2 849只雞進(jìn)行了雞滑液囊支原體感染調(diào)查，并對其中的6個(gè)種公雞場進(jìn)行了雞白痢沙門氏菌和滑液囊支原體共感染調(diào)查。對雞白痢和滑液囊支原體血清陽性的雞只進(jìn)行了臨床病理組織學(xué)檢查。［結(jié)果］雞白痢的平均感染率為8.39%（1 368/16 312），其中公雞的感染率為9.32%（398/4 270），母雞的感染率為8.06% （970/12 042），90日齡以下雞的感染率為11%（206/1 872），90日齡以上雞的感染率為8%（1 160/14 440）?；耗抑гw的平均感染率為16.71%（476/2 849），其中公雞感染率為27.11%（398/1 409），母雞感染率為6.53% （94/1 440），90日齡以下雞的感染率為7.26%（119/1 640），90日齡以上雞的感染率為29.53%（357/1 209）。雞白痢和滑液囊支原體的共感率為0.91%（11/1 209）。疑似病雞病理學(xué)檢查，觀察到以白痢結(jié)節(jié)為特征的雞白痢和跗關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)及胸部滑膜囊炎性腫脹為特征的滑液囊支原體病。［結(jié)論］山東省部分種雞場普遍存在雞白痢和滑液囊支原體??；青年雞、產(chǎn)蛋雞都不同程度地受到雞白痢和雞滑液囊支原體病的威脅；對這兩種垂直傳染性疾病的凈化，勢在必行。

雞白??；雞滑液囊支原體病；血清學(xué)調(diào)查；病理變化

雞白?。≒ullorum Disease，PD）由雞白痢沙門氏菌引起的，各種品種及各年齡段的雞均易感的，最為重要的“蛋傳性”、細(xì)菌性禽類疾病之一［1］。感染雞不但可通過空氣、飼料等進(jìn)行群間傳播，還能通過種雞垂直傳播給雛雞。耐過的種雞長期帶菌，產(chǎn)的蛋也帶菌，可周而復(fù)始地代代相傳［2］，嚴(yán)重威脅養(yǎng)雞業(yè)的健康發(fā)展。沙門氏菌病屬于人獸共患病，可造成巨大的直接及間接損失［3-4］。雞滑液囊支原體病是由雞滑液囊支原體（Mycoplasma synoviane，MS）引起的，各日齡段的雞、鴨、鵝、鵪鶉、鴿子等均可感染的，以關(guān)節(jié)滲出性滑液囊膜炎及腱鞘滑膜炎為特征的慢性傳染性疾病，可造成雛雞、青年雞生長發(fā)育遲緩及胴體降級，產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能下降，雞群殘次率增加，嚴(yán)重的易繼發(fā)感染其他疾病而死亡。雞白痢和雞滑液囊支原體病是當(dāng)前我國雞群中常見的兩種垂直傳播性疫病。這兩種病的疫苗免疫效果和藥物治療效果均不佳，不能徹底治愈［5-6］。目前最有效的控制方法是檢測凈化。為了解山東省部分地區(qū)父母代種雞、商品代蛋雞雞白痢和滑液囊支原體的感染情況，采用血清平板凝集實(shí)驗(yàn)對部分雞場進(jìn)行檢測，為兩病的凈化提供一定的流行病學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1 材料

1.1 .1 診斷試劑。雞白痢、雞傷寒多價(jià)染色平板凝集試驗(yàn)抗原，標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清，雞滑液囊支原體平板凝集抗原，均由北京中海動物保健科技公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為201401。

1.1.2 樣品采集。在菏澤、濟(jì)寧、泰安、聊城4個(gè)市13個(gè)父母代種雞場，共采集16 312份樣品，雞場規(guī)模從1萬到4萬不等。現(xiàn)場翅靜脈采血，對所有調(diào)查的雞，記錄其所在棚舍、雞只編號、雞只精神狀態(tài)等。所有采樣雞群均未接種過雞白痢和滑液囊支原體病疫苗。在所有雞場的血清調(diào)查結(jié)束后，從13個(gè)種雞場的雞白痢和滑液囊支原體血清陽性的雞只中，每個(gè)場選擇5只消瘦、精神萎靡的病雞進(jìn)行剖殺，觀察剖檢病變及病理組織學(xué)病變，并進(jìn)行沙門氏菌的分離鑒定。

2.2 方法

2.2.1 血清平板凝集試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)溫度在20～25 ℃，用移液器吸取30 μL被檢血清與抗原充分混勻，計(jì)時(shí)2 min，判斷結(jié)果。同時(shí)設(shè)陽性和陰性血清對照。

2.2.2 病理學(xué)檢查。取雞白痢或雞滑液囊支原體血清抗體陽性病雞，剖檢觀察心、肝、脾、肺、腎、胃腸等器官組織病變，并取組織病料于10%福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色，光鏡觀察組織病理學(xué)病變。

2.2.3 沙門氏菌分離鑒定。將剖檢的65只病雞的肝臟取出，剪碎，置于5 mL的LB增菌液中，37 ℃搖菌18～24 h。將擴(kuò)菌液接種于SS瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h。挑取可疑菌落繼續(xù)在SS培養(yǎng)基上純化。

2.2.4 PCR鑒定。針對雞白痢沙門氏菌，設(shè)計(jì)了D血清型的特異性基因RFBS的引物，上游引物F：5'-ACTGGCGTTATCCCTTTCTCTGCTG-3'，下游引物R：5'-ATGTTGTCCTGCCCCTGGTAAGAGA-3'，預(yù)期條帶為300 bp，反應(yīng)體系為25 μL，模板為純化后的沙門氏菌單菌落DNA。擴(kuò)增程序?yàn)?4 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性1 min，55 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，共30循環(huán)；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存，擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

表1　引物的設(shè)計(jì)與合成

2　結(jié)果

2.1 雞白痢沙門氏菌和滑液囊支原體感染情況

2.1.1 雞白痢沙門氏菌感染情況。先后調(diào)查了菏澤、濟(jì)寧、泰安、聊城4個(gè)市13個(gè)父母代種雞場。13個(gè)養(yǎng)殖規(guī)模不同（1萬～4萬）、管理水平不同的蛋種雞場中，均有雞白痢沙門氏菌感染，總陽性率為8.4%（1 368/16 312），其中公雞感染率為9.3% （398/4 270），母雞感染率為8.1%（970/12 042），詳見表2。90日齡以下雞的平均感染率為11%（206/1 872）；養(yǎng)殖規(guī)模不同，感染率也不等（0.5%～38.3%），差異較大，詳見表3；90日齡以上的雞平均感染率為8%（1 160/14 440），平均陽性率為1.96%～15.7%，其中公雞為1.6%（190/2 398），母雞為8.1%（970/12 042），詳見表4和表5。

表2　山東省部分地區(qū)雞白痢感染情況

表3　90日齡以下的海蘭褐父母代種雞群雞白痢陽性情況

2.1.2 雞滑液囊支原體感染情況。本次共調(diào)查了2個(gè)市的6個(gè)種雞場，共計(jì)2 849只雞，平均感染率為16.7%（476/2 849），感染率從6.5%～39.7%不等，詳見表6；不同日齡的雞群感染率也顯著不同，90日齡以下的雞感染率為7.3%（119/1 640），90日齡以上的雞感染率為29.5%（357/1 209），詳見表7；公雞的平均感染率為27.1%（398/1 409），母雞的平均感染率為6.5%（94/1 440），詳見表8。

表4　90日齡以上的海蘭褐父母代種雞群雞白痢陽性情況

表5　90日齡以上雞的感染情況

表6　MS感染的調(diào)查情況

表7　90日齡以下與以上的雞MS感染情況

表8　性別不同的雞MS感染情況

2.1.3 混合感染情況。共調(diào)查了2個(gè)市6個(gè)雞場1 209只種公雞的雞白痢和滑液囊支原體共感染情況，發(fā)現(xiàn)有11只雞共同感染了這2種病原體，共感染率為0.9%；不同雞場的共感染率相差不大，在0～2%之間，詳見表9。

表9　雞白痢和滑液囊支原體病混合感染情況

2.2 病理變化

2.2.1 雞白痢的剖檢病理變化。取雞白痢血清學(xué)陽性，且雞只消瘦、精神萎靡的病雞65只，剖檢觀察器官組織病變。典型病雞的心冠脂肪呈膠凍樣萎縮，心肌表面有大小不一的黃白色結(jié)節(jié)（圖1-A、1-B）。肺臟淤血，呈暗紅色，被膜下及切面分布著大小不一、質(zhì)地硬實(shí)的黃色結(jié)節(jié)（圖1-C）。脾臟顯著腫大，呈暗紅色，被膜下可見均勻散在灰白色壞死灶，切面質(zhì)脆，散在白色壞死灶（圖1-D）。胰腺和腎臟表面也可見米粒至豆粒大小的黃白色結(jié)節(jié)（圖1-E、1-F）。肝臟腫大淤血，呈青銅色，表面布滿灰白色壞死點(diǎn)，膽囊充盈（圖1-G）。肌胃表面及切面肌肉內(nèi)存在黃豆粒大小或更大的黃白色結(jié)節(jié)（圖1-H、1-I）。十二指腸和直腸處黏膜腫脹，散在黃白色隆起的結(jié)節(jié)（圖1-J、1-K、1-L）。

圖1　雞白痢的剖檢病理變化

2.2.2 雞白痢的病理組織學(xué)變化。心肌纖維間呈大量巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、異嗜性粒細(xì)胞灶狀浸潤，結(jié)締組織增生，局部心肌細(xì)胞壞死消失（圖2-A、2-B）。肺臟的肺房、二級和三級支氣管等正常結(jié)構(gòu)遭到破壞，出現(xiàn)大小不同的灰白色肉芽腫結(jié)節(jié)（圖2-C）。脾臟白髓壞死，結(jié)構(gòu)模糊，散在大量壞死崩解的淋巴細(xì)胞；壞死灶呈絲網(wǎng)狀、條索狀或片狀均質(zhì)紅染的結(jié)構(gòu)，正常脾臟組織幾乎完全消失（圖2-D、2-E）。胰腺和腎臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞壞死崩解，呈現(xiàn)大量巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤增生（圖2-F、2-G）。肝細(xì)胞出現(xiàn)灶狀壞死，壞死區(qū)內(nèi)呈網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）、淋巴細(xì)胞和異嗜性粒細(xì)胞浸潤（圖2-H、2-I）。肌胃肌層有巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤，局部平滑肌細(xì)胞壞死消失（圖2-J）。腸黏膜上皮細(xì)胞壞死脫落，腸腺壞死，固有層、黏膜下層及肌層呈大量巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤增生（圖2-K、2-L）。

圖2　雞白痢的病理組織學(xué)變化（HE染色）

2.2.3 MS剖檢病變病理變化。病雞跗關(guān)節(jié)腫脹，剪開皮膚可見滑液囊腫脹及靠近末端處有水泡樣的腫脹，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量滲出液，呈黏稠黃色膠凍樣或有黃色干酪樣物質(zhì)（圖3-A），翅關(guān)節(jié)、龍骨突處也有囊腫（圖3-B、3-C）；氣囊增厚，有氣囊炎。

圖3　MS剖檢病變病理變化

2.2.4 MS病理組織學(xué)變化。在患滑膜炎的關(guān)節(jié)腔和腱鞘中，可見異嗜性白細(xì)胞和纖維素性浸潤（圖4-A、4-B）；滑液囊膜因絨毛形成，其下層淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤而增生，滑膜增厚（圖4-C、4-D）。

圖4　MS病理組織學(xué)變化

2.3 沙門氏菌的分離鑒定結(jié)果

疑似菌在SS培養(yǎng)基上形成了無色或是中心帶黑色、邊緣整齊、光滑濕潤的圓形小菌落（圖5-A）。65個(gè)平板中，通過初步培養(yǎng)，共有55個(gè)平板出現(xiàn)了疑似菌落。PCR擴(kuò)增約擴(kuò)出300 bp的片段。50株菌的擴(kuò)增結(jié)果如圖5-B。在泗水A場和菏澤A場的被剖殺雞中沒有分離到沙門氏菌。細(xì)菌分離結(jié)果與雞白痢平板試驗(yàn)結(jié)果符合率為84.6%，病理組織學(xué)檢查與雞白痢平板凝集試驗(yàn)的符合率達(dá)90%。

3　討論

本次血清學(xué)調(diào)查采用了血清平板凝集反應(yīng)試驗(yàn)。該方法操作簡單、方便，適用于規(guī)?；B(yǎng)殖場開展雞白痢和滑液囊支原體病的調(diào)查。在此基礎(chǔ)上，隨機(jī)剖檢血清陽性、稍顯消瘦的病雞，發(fā)現(xiàn)病雞的剖檢變化與雞白痢和滑液囊支原體病基本吻合，最終通過細(xì)菌分離鑒定進(jìn)一步確診?？傮w來看，平板凝集試驗(yàn)血清陽性結(jié)果與病雞的剖檢結(jié)果吻合率達(dá)90%，與細(xì)菌分離鑒定結(jié)果的吻合率為84.6%，與其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致［6］。13個(gè)場都存在雞白痢血清陽性，但是在2個(gè)場沒有分離到沙門氏菌。這2個(gè)場是多年經(jīng)營的種雞場，長期以來形成了自己的用藥程序，所以導(dǎo)致雞體內(nèi)的沙門氏菌不易被分離到；也可能是該場的雞群處于前期感染，因有抗體存在，導(dǎo)致病原被清除。

圖5　沙門氏菌的分離鑒定結(jié)果

從調(diào)查的13個(gè)雞場的雞白痢沙門氏菌感染情況來看，青年雞和產(chǎn)蛋雞都存在一定比例的感染，90日齡以下的雞群比90日齡以上的感染率高，即育成雞、青年雞感染較重。這與個(gè)別產(chǎn)蛋雞群在產(chǎn)蛋前進(jìn)行過沙門氏菌的凈化及病殘雞的嚴(yán)格淘汰有關(guān)。此外，陽性雞在開產(chǎn)后的上升期死亡率較高也是一個(gè)重要原因。8個(gè)場90日齡以下的種公雞雞白痢陽性率差異較大，可能與個(gè)別場之前進(jìn)行過種公雞的雞白痢凈化有關(guān)。隨著養(yǎng)殖水平的不斷提高，養(yǎng)殖場疫病防控觀念也在逐步改善，有的場已著手進(jìn)行雞白痢凈化。90日齡以上的雞感染率相差不大，公雞和母雞的檢出率大致相同。在檢測過程中發(fā)現(xiàn)，如果一個(gè)舍的一只雞呈雞白痢陽性，那么周圍其他籠的雞大多也呈陽性。這是因?yàn)殡u白痢會排菌，污染周圍的環(huán)境，經(jīng)水平途徑傳播，雞群日齡越大，水平感染的機(jī)會就越多［7］。

通過對山東省部分地區(qū)雞群雞滑液囊支原體血清學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)雞群血清陽性率最高的可達(dá)39.7%，最低的也為6.5%，整體平均陽性率為16.7%，說明這些種雞場均存在不同程度的雞滑液囊支原體感染。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)各雞場場主均希望對公雞進(jìn)行MS凈化，這是現(xiàn)階段無法做到全群凈化前提下的明智之舉。從檢測數(shù)據(jù)可以看出，公雞的感染率遠(yuǎn)高于母雞，所以MS對公雞的危害性更大。分析其原因可能與公母雞的飼養(yǎng)管理方式不同，或與公母雞的易感性不同有關(guān)。比較不同日齡雞群雞滑液囊支原體的調(diào)查結(jié)果，發(fā)現(xiàn)隨著日齡的增長，陽性率也隨之增高。這說明陽性雞在飼養(yǎng)過程中不斷排毒，通過水平傳播的方式感染同群易感雞只（抵抗力弱者），使雞群陽性率不斷上升。

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（責(zé)任編輯：朱迪國）

Epidemiological Investigation on Pullorosis and Mycoplasma Synovial of Laying Breeder Hens in Part Area of Shandong Province

Niu Yujuan1，Wang Liang1，2，Wang Pengfei1，Zhang Guihua1，Liu Sidang1
（1. Shandong Agricultural University，Tai'an，Shandong 271000；2. Xintai Animal Husbandry and Veterinary Bureau，Xintai，Shandong 271200）

［Objective］To understand the prevalence of pullorosis and mycoplasma synoviae on breeding chicken farms in some areas of Shandong province. ［Methods］By the method of serum plate agglutination，16 312 serums collected from 13 farms of Jining，Taian，Liaocheng and Heze were tested for pullorosis infection，and 2 849 serums collected from 6 farmsof Taian and Liaocheng were tested for mycoplasma synoviae infection. Meanwhile，the co-infection status of pullorosis and mycoplasma synoviae on 6 breeder rooster farms among the above mentions farms were also investigated. ［Results］The survey found that the average infection rate of pullorosis was 8.39%（1 368/16 312）with the rate of cocks being 9.32%（398/4 270），hens 8.06%（970/12 042），chicken below 90-day-old 11%（206/1 872），and chicken more than 90-day-old 8%（1 160/14 440）. The average infection rate of mycoplasma synoviae was 16.71% （476/2 849）with the rate of cocks being 27.11%（398/1 409），hens 6.53%（94/1 440），chicken below 90-day-old 7.26% （119/1 640），and chicken more than 90-day-old 29.53%（357/1 209）. The co-infection rate of the two disease was0.91% （11/1 209）. By clinical pathological examination，the pullorosis was characterized by nodes and mycoplasma synoviae was characterized by joint swelling. ［Conclusion］The research shows that pullorosis and mycoplasma diseases are popular on some breeding chicken farms of Shandong province，and the young roosters and laying hens are still at the risk of infection with these two diseases，so it is imperative to clean up these two vertica linfectious diseases from chicken farms.

pullorum disease；mycoplasma synoviae disease；serological investigation；pathological changes

S852.65

A

1005-944X（2016）08-0021-06

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.08.006

劉思當(dāng)

注：牛玉娟、王 亮同為第一作者