曹　藍(lán)，陳藝韻，魯恩潔，蘇文哲，劉靜雯，陳宗遒，陸劍云，劉艷慧，馬　鈺，李魁彪（廣州市疾病預(yù)防控制中心，廣東廣州　510440）

廣州市2015年禽類(lèi)市場(chǎng)禽流感流行病學(xué)監(jiān)測(cè)

曹藍(lán)，陳藝韻，魯恩潔，蘇文哲，劉靜雯，陳宗遒，陸劍云，劉艷慧，馬鈺，李魁彪
（廣州市疾病預(yù)防控制中心，廣東廣州510440）

為了解2015年廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)的禽流感病毒污染情況，為科學(xué)制定人感染禽源流感病毒的防控措施提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，對(duì)2015年廣州市12個(gè)區(qū)部分禽類(lèi)市場(chǎng)的3 447份樣本進(jìn)行了禽流感病毒熒光RT-PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示：全部樣品的A型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒的陽(yáng)性率分別為12.56%和6.24%。1月份為A型和H9亞型禽流感陽(yáng)性率最高的月份，陽(yáng)性率分別為23.94%和14.73%。從化區(qū)的A型禽流感病毒陽(yáng)性率最高（24.48%），黃埔區(qū)的H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性檢出率最高（14.76%）。不同類(lèi)型樣品中，A型禽流感病毒陽(yáng)性率最高為砧板、刀具類(lèi)（15.16%），最低為冰鮮生鮮（7.78%）。H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性檢出率最高為籠具（8.25%），最低為置物臺(tái)面（2.84%）。結(jié)果表明：廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)冬春季節(jié)禽流感病毒陽(yáng)性率較高；全市各區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)普遍存在禽流感病毒污染；禽類(lèi)交易各環(huán)節(jié)中，宰殺和飼養(yǎng)環(huán)節(jié)的污染最為嚴(yán)重。建議在加強(qiáng)活禽交易市場(chǎng)全面清洗消毒的基礎(chǔ)上，對(duì)不同季節(jié)、不同交易環(huán)節(jié)，采取差異化的和基于風(fēng)險(xiǎn)的消毒、監(jiān)測(cè)措施，以降低人通過(guò)禽類(lèi)市場(chǎng)感染禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)。

禽類(lèi)市場(chǎng)；禽流感；監(jiān)測(cè)

禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）是正黏病毒科的RNA病毒，根據(jù)病毒粒子表面抗原血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的不同，分為不同亞型：H1～H16、N1～N9。目前已知的各亞型流感病毒均可在禽類(lèi)中分離到［1］。根據(jù)致病性的不同，可將禽流感病毒分為高致病性、低致病性和無(wú)致病性禽流感病毒［2］。

H9N2亞型禽流感1994年在我國(guó)廣東省首次暴發(fā)，后逐漸擴(kuò)散至我國(guó)大陸的不同區(qū)域，并且成為在大陸地區(qū)家禽中流行的主要亞型［3-4］。此外，該病毒還可感染包括豬［5］、犬、貓［6］和雪貂［7］在內(nèi)的一系列哺乳動(dòng)物。1998年，廣東省報(bào)道了我國(guó)首例人感染H9N2亞型禽流感病例［8］。之后，廣東省還有多起人感染H9N2亞型禽流感病毒的報(bào)道［9-10］。研究表明，H9N2亞型禽流感病毒通過(guò)基因突變已具有適應(yīng)人群的特征，并且存在人際傳播的風(fēng)險(xiǎn)［11-12］。

H9N2亞型禽流感病毒除了可直接感染人外，還通過(guò)病毒基因“重配”，給人類(lèi)健康帶來(lái)重大的威脅［13］。1997年香港出現(xiàn)人H5N1亞型禽流感感染及死亡病例。現(xiàn)已研究證實(shí)，其6個(gè)內(nèi)部基因片段就是由H9N2病毒提供的［14］。另外，2013年首次在我國(guó)東部地區(qū)出現(xiàn)的H7N9亞型流感病毒［15-16］，以及2013年11月出現(xiàn)的H10N8亞型禽流感病毒［17］，其內(nèi)部基因均來(lái)源于不同譜系的H9N2亞型禽流感病毒。

禽類(lèi)市場(chǎng)是禽流感病毒發(fā)生重組擴(kuò)散的高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域［18］。市場(chǎng)內(nèi)不同種類(lèi)的禽類(lèi)長(zhǎng)期密集接觸，以及市場(chǎng)內(nèi)高濕高熱的環(huán)境，再加上消毒不及時(shí)、不徹底等，為禽流感病毒在動(dòng)物之間傳播創(chuàng)造了有利條件［19］。而禽類(lèi)市場(chǎng)的外環(huán)境是人直接和間接接觸禽類(lèi)的重要場(chǎng)所，更是禽流感病毒從禽到人跨種間傳播的重要環(huán)節(jié)［20-21］。而我國(guó)廣東省的居民有在禽類(lèi)市場(chǎng)挑選活禽、現(xiàn)場(chǎng)宰殺的習(xí)慣，這更增加了人在禽類(lèi)市場(chǎng)感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)［18］。為了解廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)的禽流感病毒，特別是H9N2亞型禽流感病毒的污染狀況，開(kāi)展了本次調(diào)查研究。

1　材料和方法

1.1 試劑

常溫病毒采集轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)（UTM）購(gòu)自意大利Copan公司；RNA提取試劑盒QIAamp?Viral RNA Mini Kit 購(gòu)自QIAGEN 公司；禽流感病毒通用A型及H9亞型熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司；熒光定量PCR儀7500 Fast購(gòu)自Applied Biosystems 公司。

1.2 樣本采集

按隨機(jī)抽樣的方式，對(duì)2015年廣州市12個(gè)區(qū)的禽類(lèi)市場(chǎng)進(jìn)行采樣。每個(gè)區(qū)選擇2～3個(gè)市場(chǎng)，每個(gè)市場(chǎng)隨機(jī)選擇2～4個(gè)檔口。主要采集禽類(lèi)泄殖腔拭子，糞便、飲用水、污水、籠具、砧板、刀具、脫毛機(jī)、冰箱，以及光雞、冰鮮雞等涂抹拭子樣品。采集后的標(biāo)本4 ℃保存，在24小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

標(biāo)本凍融后置于振蕩器充分震蕩（液體類(lèi)標(biāo)本上下顛倒混勻），參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行核酸RNA提取。對(duì)通用A型流感病毒熒光RT-PCR 檢測(cè)試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的標(biāo)本，再用H9亞型流感病毒熒光RTPCR 檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Excel表格，并進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)果

2.1 總體檢測(cè)情況

2015年1月至12月，采集廣州市12個(gè)區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)的活禽泄殖腔拭子和各種外環(huán)境拭子，共采集3 447份樣品。經(jīng)檢測(cè)，A型禽流感病毒陽(yáng)性樣品433份，陽(yáng)性率為12.56%；H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性樣品215份，陽(yáng)性率為6.24%。

2.2 時(shí)間分布情況

全年1—12月樣品的檢測(cè)結(jié)果顯示，不同月份A型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒的陽(yáng)性檢出率差異較大，具體如圖1所示。A型禽流感病毒陽(yáng)性率在1月份最高（23.94%），在6—8月份最低（未檢出，陽(yáng)性率為0）。H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率在1月份最高（14.73%），在5—10月份最低（未檢出，陽(yáng)性率為0）。各月采樣情況及陽(yáng)性率見(jiàn)表1。

圖1　不同月份的禽類(lèi)市場(chǎng)禽流感病毒陽(yáng)性率變化

表1　2015年1-12月采樣量及禽流感陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)

2.3 空間分布情況

2015年廣州市各區(qū)的采樣情況見(jiàn)表2。檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，各區(qū)之間的禽流感病毒陽(yáng)性率差異較大。其中，從化區(qū)的A型禽流感病毒陽(yáng)性率最高，為24.48%；白云區(qū)最低，為5.73%。H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性檢出率最高的為黃埔區(qū)（14.76%），最低為白云區(qū)（1.91%）。

表2　2015年各區(qū)采樣量及禽流感陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)

圖2　不同區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)禽流感病毒陽(yáng)性率情況

2.4 樣品分布情況

結(jié)合廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)家禽售賣(mài)、屠宰的實(shí)際情況及從業(yè)人員的行為習(xí)慣，本研究將采集的3 447份樣品分成11個(gè)標(biāo)本類(lèi)型。檢測(cè)結(jié)果顯示，A型禽流感病毒檢出陽(yáng)性率最高的為砧板刀具類(lèi)（15.16%），最低的為冰鮮生鮮（7.78%）；H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率最高的為籠具（8.25%），最低的為置物臺(tái)面（2.84%），結(jié)果詳見(jiàn)表3。

表3　不同樣品類(lèi)型采樣量及陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)

3　討論

本研究發(fā)現(xiàn)，2015年廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)的A型禽流感病毒和H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率分別為12.56%和6.24%，均高于廣州市2013年的調(diào)查數(shù)據(jù)（3.26%和1.28%）［22］，說(shuō)明近年來(lái)廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)的禽流感病毒污染較為嚴(yán)重。同時(shí)，對(duì)廣州市12個(gè)區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)的活禽樣品以及外環(huán)境樣品的禽流感病毒污染情況進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)的A型和H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率差異較大。A型禽流感病毒陽(yáng)性率在5.73%～24.48%之間，H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率在1.91%～14.76%之間，表明廣州市各區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)受禽流感病毒污染的現(xiàn)象較為普遍。同時(shí)，A型禽流感病毒陽(yáng)性率以從化區(qū)和越秀區(qū)較高，可能與這些地區(qū)的禽類(lèi)交易消費(fèi)量或活禽來(lái)源有關(guān)，需進(jìn)一步進(jìn)行調(diào)查和分析。

本研究對(duì)2015年廣州市12個(gè)區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)的活禽泄殖腔樣品和外環(huán)境樣品進(jìn)行采樣和檢測(cè)，分析不同月份的A型和H9亞型禽流感病毒的陽(yáng)性率情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率與A型禽流感病毒陽(yáng)性率的變化趨勢(shì)基本一致。對(duì)于A型禽流感病毒而言，雖然全年大部分月份均有病毒檢出，但6—8月期間均未檢出病毒。該結(jié)果與段曉冬等［18］及梁能秀［23］的調(diào)查結(jié)果存在一定差異，主要的原因可能與6—8月采集的樣品量少有關(guān)，也可能與時(shí)間、氣候和地區(qū)差異等客觀因素有關(guān)。但總體上，禽流感病毒陽(yáng)性率在冬春季節(jié)相對(duì)較高，在春夏季節(jié)較低，這與以往的研究結(jié)果一致［12，24］。進(jìn)一步比較發(fā)現(xiàn)，一般在A型禽流感病毒陽(yáng)性率高的月份，H9病毒的檢出率也相對(duì)較高，但3月、5月、9月和10月除外。這4個(gè)月的A型禽流感病毒陽(yáng)性率在1.67%～10.00%之間，而H9病毒陽(yáng)性率均為0，說(shuō)明禽類(lèi)市場(chǎng)中除存在H9亞型禽流感病毒之外，還有諸如H4、H5、H6、H7等其他多種亞型的禽流感病毒［25］。同時(shí)，也提示對(duì)于禽類(lèi)市場(chǎng)而言，與單獨(dú)檢測(cè)H9亞型禽流感病毒相比，A型禽流感病毒的檢測(cè)結(jié)果可能更能反映市場(chǎng)內(nèi)禽流感病毒的污染情況。

對(duì)不同類(lèi)型樣品的檢測(cè)結(jié)果分析顯示，砧板、刀具類(lèi)標(biāo)本的A型禽流感病毒陽(yáng)性率最高，表明禽類(lèi)在宰殺環(huán)節(jié)受禽流感病毒的污染最為嚴(yán)重。一般情況下，活禽被宰殺后直接被市民挑選購(gòu)買(mǎi)，因此宰殺環(huán)節(jié)是普通人群感染禽流感的高風(fēng)險(xiǎn)環(huán)節(jié)。建議市場(chǎng)管理部門(mén)加強(qiáng)禽類(lèi)宰殺環(huán)節(jié)的衛(wèi)生清洗和消毒，以降低普通人群通過(guò)接觸宰殺后的家禽感染禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)。2013年以來(lái)，廣州市先后出現(xiàn)人感染H7N9、H5N6亞型流感病毒病例。為降低人感染禽流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)，廣州市政府推行實(shí)施“冰鮮上市”措施。本研究結(jié)果顯示，在11個(gè)樣品類(lèi)型中，冰鮮、生鮮樣品的A型禽流感病毒檢出率最低，且明顯低于活禽泄殖腔拭子的病毒檢出率。該數(shù)據(jù)也從正面支持了政府大力推行“冰鮮生鮮”上市措施的正確性和科學(xué)性。本研究還發(fā)現(xiàn)，飲水、飼料和籠具拭子中也有較高的A型禽流感病毒檢出率，并且在各類(lèi)型樣品中，籠具樣品的H9亞型禽流感病毒陽(yáng)性率最高，說(shuō)明市場(chǎng)中活禽的飼養(yǎng)環(huán)境受禽流感病毒污染的情況也較為嚴(yán)重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市場(chǎng)內(nèi)普遍存在多種禽類(lèi)在高溫、高濕環(huán)境下密集飼養(yǎng)。在這種應(yīng)激條件下，禽類(lèi)免疫力降低，更易受到環(huán)境中禽流感病毒的感染。此外，通常禽類(lèi)市場(chǎng)內(nèi)存在多種亞型禽流感病毒［25］，這增加了不同禽流感病毒在活禽體內(nèi)重組進(jìn)化，進(jìn)而出現(xiàn)新型病毒株的可能性。李魁彪等［26］的研究發(fā)現(xiàn)，廣州市活禽交易市場(chǎng)職業(yè)暴露人群的H9N2亞型禽流感病毒的隱性感染較為嚴(yán)重。本研究的結(jié)果也顯示，所有類(lèi)型的樣品中都存在不同程度的H9亞型禽流感病毒感染，說(shuō)明在禽類(lèi)市場(chǎng)的屠宰、售賣(mài)等多個(gè)環(huán)節(jié)都存在H9病毒的污染。因此有必要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)職業(yè)人群的健康宣教，要求其做好個(gè)人防護(hù)，以減少人感染禽流感的發(fā)生。

綜上所述，廣州市禽類(lèi)市場(chǎng)冬春季節(jié)的禽流感病毒陽(yáng)性率較高，全市各區(qū)禽類(lèi)市場(chǎng)普遍存在禽流感病毒污染現(xiàn)象，禽類(lèi)交易各環(huán)節(jié)中的宰殺和飼養(yǎng)環(huán)節(jié)病毒污染最為嚴(yán)重。因此，建議在加強(qiáng)禽類(lèi)市場(chǎng)全面清洗消毒的基礎(chǔ)上，對(duì)冬春季節(jié)以及宰殺和飼養(yǎng)環(huán)節(jié)采取差異化和基于風(fēng)險(xiǎn)的消毒防控措施，嚴(yán)格執(zhí)行“休市”政策，加強(qiáng)從業(yè)人員的宣傳教育，降低禽流感病毒污染率，進(jìn)而降低人感染禽流感的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，有必要繼續(xù)加強(qiáng)禽流感病毒的流行病學(xué)和分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)和調(diào)查工作。這對(duì)及時(shí)了解禽流感病毒的變異和流行情況，有效評(píng)估禽流感病毒向人間傳播的風(fēng)險(xiǎn)，以及對(duì)人感染禽流感病毒進(jìn)行早期預(yù)警，具有重要的公共衛(wèi)生意義。

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（責(zé)任編輯：朱迪國(guó)）

Epidemiological Surveillance of Avian Influenza in Retail Live Poultry Markets of Guangzhou City in 2015

Cao Lan，Chen Yiyun，Lu Enjie，Su Wenzhe，Liu Jingwen，Chen Zongqiu，Lu Jianyun，Liu Yanhui，Ma Yu，Li Kuibiao
（Guangzhou Center for Disease Prevention and Control，Guangzhou，Guangdong 510440）

To understand the distribution of avian influenza virus （AIV） in live poultry markets of Guangzhou city，to provide the technical supports for decision making on AIV prevention and control measures，3 447 samples including cloacal swabs and environmental swabs were collected and tested by real-time RT-PCR for AIV A type and H9 subtype. Of all samples，the positive rates of AIV A type and H9 subtype were 12.56% and 6.24% respectively. January witnessed the highest positive rates of A type and H9 subtype virus. The positive rate of A type in Conghua district was higher than in other 11 districts and the highest positive rate of H9 subtype virus among 12 districts was in Huangpu. The results indicated that AIV infection of retail live poultry markets in Guangzhou was severe and the highest positive rates of AIV were in the spring and winter. In the retail live poultry markets，the highest positive rates were found in slaughtering and feeding places. Therefore，more effective prevention and control measures are needed for reducing the risk of human infection with AIV.

retail live poultry market；live poultry swabs；environmental swabs；avian influenza；surveillance

S858.3文獻(xiàn)識(shí)別碼：B

1005-944X（2016）08-0008-05

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.08.003

廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目（20161A010058、20141A011058）

李魁彪