□ 吳惠麗　焉耆回族自治縣質(zhì)量與計量檢測所

氣相色譜法測定食品中苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸、山梨酸鉀及注意事項(xiàng)

□ 吳惠麗焉耆回族自治縣質(zhì)量與計量檢測所

食品中苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸、山梨酸鉀的測定原理

食品試樣酸化后，利用苯甲酸、山梨酸易溶于乙醚的性質(zhì)，用乙醚將食品中的苯甲酸、山梨酸提取出來，在氣相色譜儀上進(jìn)行分離測定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出食品中苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸和山梨酸鉀的含量。

試劑

乙醚：不含過氧化物；石油醚：沸程30～60 ℃；鹽酸；無水硫酸鈉；鹽酸（1∶1）：量取100 mL水，一邊搖動，一邊緩緩加入100 mL鹽酸，混勻，冷卻至室溫備用。氯化鈉酸性溶液（40 g/L）：稱取4.0 g氯化鈉，加水溶解，并定容至100 mL，然后加數(shù)滴鹽酸（1∶1）酸化。

氣相色譜儀檢測條件

色譜柱：固定液AT添加劑玻璃毛細(xì)柱，柱長15 m，內(nèi)徑0.53 mm，液膜厚度：1.00 μm；柱溫：150 ℃、汽化溫度：250 ℃、檢測溫度260 ℃。

制備標(biāo)準(zhǔn)曲線系列

苯甲酸、山梨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

食品防腐劑苯甲酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)值1.00 mg/mL。

食品防腐劑山梨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)值1.00 mg/mL。

制備苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)使用液

分別準(zhǔn)確吸取0.4 mL苯甲酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和0.4 mL山梨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合置于1個10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶劑稀釋至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)混合使用液含苯甲酸或山梨酸為40 μg/mL。以此類推，再分別準(zhǔn)確吸取0.8、1.2、1.6、2.0 mL和2.4 mL苯甲酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和山梨酸溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，混合后置于一組10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶劑稀釋并定容至刻度，混勻備用。蓋好瓶塞，防止溶劑揮發(fā)造成濃度變化，同時控制實(shí)驗(yàn)室溫度為20 ℃。

此標(biāo)準(zhǔn)混合使用液系列中，苯甲酸或山梨酸的濃度分別為40、80、 120、160、200μg/mL和 240μg/mL。同時，準(zhǔn)備一個試劑空白使用液。

試樣提取

（1）將試樣預(yù)先混合均勻，備用。

（2）無水硫酸鈉于130 ℃電熱恒溫干燥箱中干燥30 min，取出后于干燥器中冷卻至室溫，備用。

（3）在萬分之一電子天平上，于25 mL帶塞量筒中準(zhǔn)確稱取2.50 g預(yù)先混合均勻的試樣，精確至0.000 2 g。平行測定2次，因此平行稱取試樣2份。

（4）分別于試樣中加0.5 mL鹽酸（1:1）酸化、搖勻，第一次加入10 mL乙醚，蓋好量筒塞，振搖1 min，靜置15 min，用吸管將上層乙醚提取液吸入一個125 mL分液漏斗中，蓋好分液漏斗塞。第二次于酸化的試樣中加入10 mL乙醚，按照上述提取方法，重復(fù)提取一次，合并乙醚提取液于分液漏斗中。第3次于酸化的試樣中加入5 mL乙醚，再按照上述方法提取第3次，合并3次提取的乙醚于125 mL分液漏斗中。

（5）于提取的乙醚溶液中加入5 mL氯化鈉酸性溶液（40 g/L），洗滌乙醚提取液，靜置15 min，分層，棄去下層氯化鈉酸性溶液。然后于提取的乙醚溶液中再加5 mL氯化鈉酸性溶液（40 g/L），重復(fù)洗滌1次，靜置15 min，分層，棄去下層氯化鈉酸性溶液。

（6）于干燥漏斗中放好濾紙，在濾紙上加入事先干燥的無水硫酸鈉5 g，將乙醚提取液緩緩放入，將無水硫酸鈉脫水后的乙醚濾入25 mL容量瓶中，用乙醚定容至刻度，混勻。

（7）用單標(biāo)線吸量管準(zhǔn)確吸取5 mL乙醚提取液于5 mL帶塞試管中，置于40 ℃水浴上揮干，用單標(biāo)線吸量管準(zhǔn)確加入2 mL石油醚-乙醚(3∶1)混合溶劑。

測定

依次分別進(jìn)樣2 μL苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)混合使用液于氣相色譜儀中，分別測得標(biāo)準(zhǔn)系列苯甲酸、山梨酸的峰面積，同時進(jìn)樣試劑空白使用液。以濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，分別繪制苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。

同時進(jìn)樣2 μL試樣提取液，分別測得山梨酸和苯甲酸的峰面積，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。平行試樣，分別進(jìn)樣測定。

結(jié)果計算

試樣中苯甲酸或山梨酸的含量按式（1）進(jìn)行計算。

x—試樣中苯甲酸或山梨酸的含量，mg/kg；A—試樣提取液中苯甲酸或山梨酸的質(zhì)量，μg；2—加入石油醚-乙醚(3:1)混合溶劑的體積，mL；2—測定時進(jìn)樣的體積，μL；m—試樣的質(zhì)量，g；V1—測定時吸取乙醚提取液的體積，mL；V2—試樣乙醚提取液的總體積，mL。

注意：計算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)

檢測結(jié)果換算的注意事項(xiàng)

（1）

所以換算系數(shù)是1.18。即實(shí)驗(yàn)結(jié)果以苯甲酸鈉報出時應(yīng)乘以1.18。

（2）

所以換算為山梨酸鉀的換算系數(shù)是1.34。

（3）試樣制備時，要充分混合均勻，以防止樣品不均勻造成檢測結(jié)果偏差。

（4）樣品中苯甲酸、山梨酸提取環(huán)節(jié)，若樣品丟失，或者提取液遺漏，會導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低。

（5）提取樣品中苯甲酸、山梨酸所用有機(jī)溶劑乙醚極易揮發(fā)，實(shí)驗(yàn)室溫度要控制在20 ℃，在通風(fēng)柜中操作，提取操作要熟練、準(zhǔn)確、連貫。