張晴　杜守穎　白潔　陸洋　鄭夢成　李鵬躍　武慧超

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HPLC法同時測定復(fù)方金思維中3種有效成分的含量

張晴杜守穎白潔陸洋鄭夢成李鵬躍武慧超

目的建立復(fù)方金思維中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法對制劑中的松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽沁M(jìn)行定量測定。結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽欠謩e在2.5～50.0 μg/mL、1.3～25.9 μg/mL、2.0～40.7 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，3種成分樣品回收率分別為101.37%、99.86%和98.44%，RSD均在3.00%以內(nèi)。結(jié)論所建立的方法簡便，重復(fù)性良好，可用于金思維復(fù)方中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽堑暮繙y定。

復(fù)方金思維；高效液相色譜法；含量測定

復(fù)方金思維是由肉蓯蓉、熟地黃、遠(yuǎn)志、茯苓等藥物組合而成，具有補(bǔ)氣益腎、化痰活血之功效，可用于老年性癡呆的治療[1-4]。肉蓯蓉、熟地黃和遠(yuǎn)志為方中主要藥物，為保證臨床療效，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對肉蓯蓉和熟地黃中松果菊苷和毛蕊花糖苷、遠(yuǎn)志中3,6′-二芥子酰基蔗糖進(jìn)行定量測定，以控制本品的內(nèi)在質(zhì)量,此方法測定結(jié)果準(zhǔn)確靈敏、簡便可靠。

1　材料

1.1藥品與試劑

乙腈(邁瑞達(dá)，色譜純)，磷酸(邁瑞達(dá)，色譜純)，娃哈哈純凈水，其他試劑為分析純；松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌?均為中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111670-201505、111530-201310、111848-201303)；肉蓯蓉、熟地黃、遠(yuǎn)志等飲片(北京本草方源藥業(yè)有限公司)；金思維為實(shí)驗(yàn)室自制(肉蓯蓉16 g、熟地黃16 g、遠(yuǎn)志12 g、茯苓6 g、人參3 g、石菖蒲6 g等，加水煎煮2次，濾液濃縮至近干，50℃減壓干燥，干膏粉碎，混勻)。

1.2儀器

LC-20AD高效液相色譜儀(日本島津公司，SPD-M20A，PDA檢測器，LC Solution色譜工作站)；CX-100型超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備廠)；電熱恒溫水浴箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠)；賽多利斯BT 25S型電子分析天平(北京賽多利斯公司)；賽多利斯BSA 224S型電子分析天平(北京賽多利斯公司)。

2　方法

2.1色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK-C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流動相乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～12分鐘，87%～83%B；12～25分鐘，83%B；25～45分鐘，83%～73%B；45～50分鐘，73%～10%B；50～55分鐘，10%B)；柱溫30 ℃；檢測波長330 nm；流速1.0 mL/min。對照品溶液及溶出供試品溶液的色譜圖見圖1。

A. 對照品溶液；B. 溶出供試品溶液；C.空白溶出液；

2.2對照品溶液的制備

精密稱取對照品松果菊苷25 mg、毛蕊花糖苷12.5 mg、3,6′-二芥子酰基蔗糖20 mg，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，即得。

2.3供試品溶液的制備

精密稱取樣品約0.1 g置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇適量，超聲15分鐘，放冷，定容至刻線，取上清液，0.45 μm微孔濾膜濾過，得供試品溶液。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1線性關(guān)系考察精密吸取對照品儲備液，依次稀釋得到6個不同濃度的對照品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，濃度為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸，松果菊苷回歸方程為Y=12729X-4090.2，r=0.9999；毛蕊花糖苷回歸方程為Y=13842X-2892.8，r=0.9999；3,6′-二芥子?；崽腔貧w方程為Y=25091X+821.1，r=0.9999。松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖分別在2.5～50.0、1.3～25.9、2.0～40.7 μg/mL與峰面積線性關(guān)系良好。

2.4.2精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽?次進(jìn)樣的峰面積積分值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative stardard deviation,RSD)分別為0.79%、2.63%、0.51%，表明儀器精密度良好。

2.4.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取上述供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12、24小時進(jìn)樣測定，結(jié)果松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽呛康腞SD分別為0.49%、2.70%、0.74%，表明樣品在24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品，平行制備6份供試品溶液，測得峰面積并計(jì)算3種成分含量，結(jié)果樣品中松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽瞧骄糠謩e為3.22 mg/g、0.77 mg/g、1.27 mg/g，RSD分別為0.8%、2.2%、1.1%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.5加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的同一批樣品0.05 g，分別精密加入一定量的松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌罚凑铡?.3”項(xiàng)下方法制備，平行操作6份，按上述條件進(jìn)行分析測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3　結(jié)果

分別取三批樣品，每批樣品按“2.3”項(xiàng)下方法平行制得3份供試品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表2。

表2　樣品含量測定結(jié)果

4　討論

4.1測定成分的選擇

肉蓯蓉、熟地黃和遠(yuǎn)志為方中主要藥物，肉蓯蓉和熟地黃中主要成分為苯乙醇苷類化合物，其中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量較高，具有保護(hù)腦部和神經(jīng)組織、抗衰老、改善記憶力的作用[5-6]，是其藥理作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。3,6′-二芥子酰基蔗糖為遠(yuǎn)志中的指標(biāo)性成分，具有抗抑郁、神經(jīng)保護(hù)和改善記憶力等作用[7-8]。故對復(fù)方金思維中此三個具有代表性的成分進(jìn)行了含量測定方法的研究，以控制本品的內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床療效。

4.2流動相的選擇

松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽堑臏y定曾使用2015版《中華人民共和國藥典》(一部)肉蓯蓉及熟地黃藥材含量測定項(xiàng)下的甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%醋酸溶液作為流動相，但松果菊苷、毛蕊花糖苷結(jié)構(gòu)中存在多個酚羥基，呈弱酸性，拖尾情況嚴(yán)重，考慮藥典中流動相的酸性不夠，且當(dāng)流動相大比例變化時有基線漂移現(xiàn)象，故調(diào)整為乙腈-0.05%磷酸溶液作為流動相進(jìn)行洗脫，結(jié)果所測定的三個成分分離度、對稱因子均符合要求。

4.3檢測波長的選擇

分別取松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌愤m量，加甲醇適量制成每1 mL含0.10 mg的溶液，在200～400 nm波長進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果三者對照品均在330 nm處有最大吸收，故選擇330 nm作為檢測波長[9-12]。

4.4供試品溶液的制備

提取方式的選擇考慮到檢驗(yàn)的便捷性，采用超聲(100 kHz)提取進(jìn)行試驗(yàn)。提取溶劑的選擇參考2015版《中華人民共和國藥典》(一部)肉蓯蓉、熟地黃、遠(yuǎn)志藥材含量測定，分別選用50%、80%和100%甲醇作為提取溶劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明三者沒有顯著性差異，故選擇50%甲醇作為松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子酰基蔗糖的提取溶劑。提取時間分別采用15分鐘、30分鐘和45分鐘進(jìn)行考察，結(jié)果顯示15分鐘松果菊苷、毛蕊花糖苷、3,6′-二芥子?；崽蔷湍芡耆艹?，因此最終選擇加入50%甲醇超聲(100 kHz)15分鐘作為供試品提取條件。

本研究采用超聲法提取，樣品處理方法簡單，使用有機(jī)試劑量較小，且HPLC梯度洗脫可以同時分離3種成分，雜質(zhì)峰無干擾，靈敏度高，結(jié)果可靠，該方法可以作為復(fù)方金思維的質(zhì)量控制方法。

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(本文編輯： 董歷華)

Simulatneous determination of three active components in compound JSW prescription by HPLC

ZHANGQing，DUShou-ying，BAIJie，etal.

BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China

DUShou-ying，E-mail：dushouying@263.net

ObjectiveTo establish a method for determination of 3 effective components in Compound JSW prescription. MethodsThe contents of Echinacoside, Acteoside, 3,6′-Disinapoyl sucrose in Compound JSW prescription were determined by HPLC. ResultsEchinacoside, acteoside, 3,6′ -Disinapoyl sucrose showed good linear correlation within 2.5～50.0 μg/ml, 1.3～25.9 μg·ml-1and 2.0～40.7 μg/ml(r≥0.9999)，respectively. The average recoveries were within 101.37%, 99.86% and 98.44%, respectively. And RSD were less than 3.00%. ConclusionThe quantitative method for determining the components of Compound JSW prescription is simple, feasible and repeatable.

Compound JSW prescription；HPLC；Content determination

國家科技重大專項(xiàng)(2014ZX09301306-009)；北京市科技新星計(jì)劃(xx2015A048)

100102北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院[張晴(碩士研究生)、杜守穎、白潔、陸洋、鄭夢成、李鵬躍、武慧超]

張晴(1991- )，女，2015級在讀碩士研究生。研究方向：中藥新劑型與新技術(shù)研究。E-mail:zhangqing811@163.com

杜守穎(1960- )，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥新劑型與制劑關(guān)鍵技術(shù)研究。E-mail: dushouying@263.net

R285.5

Adoi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.10.008

2016-03-01)