張運(yùn)彩，趙　錦，李勝澤

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·臨床醫(yī)學(xué)·

宮頸鱗癌中RECK與MMP-9的表達(dá)及意義

張運(yùn)彩1，趙錦1，李勝澤2

目的：探討宮頸鱗癌中逆轉(zhuǎn)錄富含半胱氨酸蛋白(RECK)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9的表達(dá)及意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)法，檢測20例正常子宮頸組織及70例子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中RECK和MMP-9的表達(dá)。結(jié)果：RECK蛋白在正常宮頸組織、子宮頸鱗癌組織中表達(dá)的陽性率分別為95.00%和31.43%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；有淋巴轉(zhuǎn)移組的陽性率較無淋巴轉(zhuǎn)移組明顯降低(P<0.01)。MMP-9在正常宮頸組織、子宮頸鱗癌組織中表達(dá)的陽性率分別為25.00%和80.00%，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；MMP-9表達(dá)在宮頸鱗癌有淋巴轉(zhuǎn)移組的陽性率較無淋巴轉(zhuǎn)移組明顯升高(P<0.01)。RECK及MMP-9在宮頸鱗癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。結(jié)論：RECK在宮頸鱗癌中表達(dá)減少或缺失可能是通過上調(diào)MMP-9的表達(dá)從而促進(jìn)宮頸鱗癌的侵襲與轉(zhuǎn)移,RECK和MMP-9與宮頸鱗癌的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

宮頸腫瘤；逆轉(zhuǎn)錄富含半胱氨酸蛋白；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

在世界范圍內(nèi)，宮頸癌是女性第4位常見的惡性腫瘤。2012年，全球全年發(fā)生宮頸癌528 000例，年死亡數(shù)為266 000例。85%宮頸癌發(fā)生于發(fā)展中國家，并且在這些國家宮頸癌居癌癥死因的首位[1]。逆轉(zhuǎn)錄富含半胱氨酸蛋白(RECK)是一種可以調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶和抑制血管生成的膜固定糖蛋白，它可以在轉(zhuǎn)錄水平抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)與活性，RECK基因的表達(dá)量降低或者缺失與腫瘤的浸潤及血管生成相關(guān)性十分密切。研究[2]表明，多種惡性腫瘤組織侵襲轉(zhuǎn)移與RECK基因瘤表達(dá)缺失或者其表達(dá)含量與呈負(fù)相關(guān)。經(jīng)典分子基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是細(xì)胞外基質(zhì)的一類水解酶，是具有二價鋅離子的內(nèi)源性肽酶，可降解膠原蛋白、彈性蛋白、糖蛋白以及蛋白多糖等，MMP-9可以降低和摧毀惡性腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)和基膜，使腫瘤細(xì)胞向周圍組織浸潤時通過基膜的缺損處。本研究通過EliVision plus免疫組織化學(xué)(免疫組化)技術(shù)檢測RECK及MMP-9在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步研究其與宮頸鱗癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為宮頸鱗癌患者臨床診斷及治療提供新的方向。

1　資料與方法

1.1標(biāo)本來源收集2012年5月至2015年8月蚌埠市第一人民醫(yī)院、蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院宮頸鱗癌術(shù)后組織存檔蠟塊標(biāo)本70例，正常宮頸組織標(biāo)本20例。宮頸鱗癌均經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)，年齡35～57歲?；颊咝g(shù)前均未行放療及化療。按組織學(xué)分級：高分化20例，中分化 20例，低分化30例。臨床分期按FIGO2009年標(biāo)準(zhǔn)其中Ⅰ期46例，Ⅱ期24例。對照組20例為同期因子宮肌瘤或子宮脫垂行全子宮切除術(shù)的正常宮頸組織，年齡46～74歲。

1.2方法所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛液固定，常規(guī)脫水。EliVision plus法染色步驟：收集標(biāo)本—標(biāo)本固定—玻片處理—脫蠟—熱修復(fù)—自然冷卻—過氧化氫室溫避光—滴加山羊血清—滴加兔抗人RECK單克隆抗體—滴加Ⅱ抗、Ⅲ抗—DAB顯色—中性樹膠固定。MMP-9同法。

1.3結(jié)果2組均由2位病理學(xué)專家采用雙盲法對染色結(jié)果進(jìn)行評定，結(jié)果不一致時協(xié)商統(tǒng)一判定最終結(jié)果。結(jié)果判斷[3]：細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。RECK正常染色部位位于細(xì)胞相鄰的側(cè)面即細(xì)胞與細(xì)胞的連接處；MMP-9抗原陽性為棕黃色顆粒，主要位于正常復(fù)層鱗狀上皮及腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)上。對切片上腫瘤細(xì)胞進(jìn)行評定，隨機(jī)觀察10個高倍鏡視野，選取染色較為集中的區(qū)域進(jìn)行結(jié)果判定，平均每高倍鏡視野的陽性染色細(xì)胞數(shù)按百分比記數(shù)，百分比為0%、<50%、50%～75%、>75%者分別劃歸為-、1+、2+、3+共4組。弱陽性表達(dá)組為-和1+，強(qiáng)陽性表達(dá)組2+和3+。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用χ2檢驗(yàn)和等級相關(guān)分析。

2　結(jié)果

2.1宮頸鱗癌組織中RECK表達(dá)情況比較RECK表達(dá)大部分位于細(xì)胞質(zhì)中，多呈散在片狀、灶狀分布，且不均勻分布，為淡黃色至棕褐色不等顆粒(見圖1)，其在正常宮頸組織中的表達(dá)率為95.00%，而在宮頸鱗癌中的表達(dá)率為31.43%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(見表1)。RECK表達(dá)在宮頸鱗癌患者的年齡、臨床分期及腫瘤大小間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而腫瘤組織高分化組高于低分化組(P<0.05)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.01)(見表2)。

2.2宮頸鱗癌組織中MMP-9表達(dá)情況比較MMP-9表達(dá)也主要位于細(xì)胞質(zhì)中，多呈散在片狀或灶狀分布，且分布不均勻，為淡黃色至棕褐色不等顆粒(見圖2)，其在宮頸鱗癌中的表達(dá)率為80.00%，而在正常宮頸組織中表達(dá)率為25.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)(見表1)。宮頸鱗癌組織中MMP-9表達(dá)在患者年齡、臨床分期及腫瘤大小間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的MMP-9陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移期組(P<0.01)，腫瘤高分化組的MMP-9陽性表達(dá)率明顯低于低分化組(P<0.01)(見表3)。

3　討論

RECK基因是一種MMPs抑制劑，能在轉(zhuǎn)錄后水平抑制至少3種MMPs，即MMP-2、MMP-9及MTI-MMP。其中MMP-9是在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生作用的主要蛋白水解酶，MMPs降解細(xì)胞外基質(zhì)通過周圍血管、調(diào)節(jié)和釋放血管活性因子，能促進(jìn)腫瘤血管生成。研究[4-5]發(fā)現(xiàn)，RECK在癌組織中表達(dá)較非癌組織顯著降低，MMP-9表達(dá)則相反，提示RECK基因通過抑制MMP-9發(fā)揮抑癌作用[6-9]。本研究結(jié)果顯示，RECK在正常宮頸表達(dá)明顯高于宮頸鱗癌組織中表達(dá)，MMP-9在宮頸鱗癌組織中表達(dá)明顯高于正常宮頸組織(P<0.01)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),宮頸鱗癌組織分化越差，RECK表達(dá)也越低，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組RECK明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。上述提示RECK表達(dá)降低或缺失可能促進(jìn)宮頸鱗癌的發(fā)展、浸潤,與以往研究[6-9]一致。

表1宮頸鱗癌及正常宮頸組織中RECK、MMP-9陽性表達(dá)率比較

表2宮頸鱗癌患者不同臨床病理特征間RECK表達(dá)情況比較(n)

率的兩兩比較：與高分化比較*P<0.05

MMP-9屬于鋅離子依賴的基質(zhì)金屬蛋白酶家族能夠降解基膜及細(xì)胞基Ⅳ型膠原和明膠，導(dǎo)致基膜破壞，促使腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移。MMP-9表達(dá)異常升高可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，MMP-9在宮頸鱗癌中較宮頸正常組織中明顯升高。MMP-9在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中陽性率較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯升高，且不同組織學(xué)分化程度間陽性率差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。提示MMP-9異常升高是宮頸鱗癌預(yù)后不良關(guān)鍵因素，與其他學(xué)者[6-9]報道一致。

通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),宮頸鱗癌鱗狀組織中RECK和MMP-9的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，即隨著RECK陽性率降低，MMP-9陽性率顯著升高,從而促進(jìn)宮頸鱗癌的侵襲與轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)使用免疫組化技術(shù)檢測RECK、MMP-9在正常宮頸、宮頸鱗癌組織中的表達(dá)情況，提示RECK、MMP-9有可能成為判斷宮頸鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的一項(xiàng)重要的參考指標(biāo)；但是RECK和MMP-9在宮頸鱗癌患者的臨床分期中的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義，考慮樣本選擇主要是宮頸鱗癌Ⅰ、Ⅱa期，引起差異不明顯，導(dǎo)致與其他研究不同。

表3宮頸鱗癌患者不同臨床病理特征間MMP-9表達(dá)情況比較(n)

(衷心感謝蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科承澤農(nóng)老師及馮振中老師在本次實(shí)驗(yàn)中給予的幫助！)

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(本文編輯劉璐)

Expression and significance of RECK and MMP-9 in cervical squamous cell carcinoma

ZHANG Yun-cai1,ZHAO Jin1,LI Sheng-ze2

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,TheFirstPeople′sHospitalofBengbu,BengbuAnhui233000；2.DepartmentofGynecologicalTumor,TheFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,BengbuAnhui233004,China)

Objective:To investigate the expressions and significance of RECK and matrixmetalloproteinase-9(MMP-9)in the cervical squamous cell carcinoma.Methods:The expressions of RECK and MMP-9 in 20 cases of normal cervical tissue and 70 cases of cervical squamous cell carcinoma were detected using immune histochemical staining method.Results:The positive rates of RECK protein expression in normal cervical tissue and cervical squamous cell carcinoma tissue were 95.00% and 31.43%,respectively,the difference of which was statistically significant(P<0.01).Compared with the cervical squamous cell carcinoma patients without lymph node metastasis,the positive rate of RECK in patients with lymph node metastasis significantly decreased(P<0.01).The positive rates of MMP-9 protein expression in normal cervical tissue and cervical squamous cell carcinoma tissue were 25.00% and 80.00%,respectively,the difference of which was statistically significant(P<0.01).Compared with the cervical squamous cell carcinoma patients without lymph node metastasis,the positive rate of MMP-9 in patients with lymph node metastasis significantly increased(P<0.01).The expression of RECK in cervical squamous carcinoma was negative correlation with the expression of MMP-9(P<0.01).Conclusions:The decreasing or absent of the RECK expression in cervical squamous carcinoma maybe though upregulate the expression of MMP-9 to promote the infiltration and metastasis of cervical squamous carcinoma.The RECK and MMP-9 are closely related to the infiltration and metastasis.

cervical neoplasms;reversion-inducing-cyste-ine-rich protein with kazal motifs;matrixmetalloproteinase-9

2015-10-31

單位] 1.安徽省蚌埠市第一人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科，233000；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 腫瘤婦科，安徽 蚌埠 233004

[作者簡介] 張運(yùn)彩(1974-)，女，碩士，主治醫(yī)師.

1000-2200(2016)09-1201-04

R 737.33

ADOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.09.026