劉　霞，李　偉，鄧春芳，范小娜

(贛南醫(yī)學(xué)院，江西　贛州　341000)

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廣棗提取物對(duì)大鼠酒精性肝病的保護(hù)作用*

劉霞，李偉，鄧春芳，范小娜

(贛南醫(yī)學(xué)院，江西贛州341000)

目的:探討廣棗提取物對(duì)酒精性肝病大鼠的作用。方法：將大鼠隨機(jī)分為模型組、廣棗提取物低劑量組、中劑量組、高劑量組、陽性對(duì)照組(益肝靈)和正常對(duì)照組。采用梯度濃度酒精、分次少量灌胃的方法建立大鼠慢性酒精性肝病模型，同時(shí)給予廣棗提取物保護(hù)。8周末處死大鼠，測(cè)定有關(guān)指標(biāo)。結(jié)果：經(jīng)廣棗提取物干預(yù)的大鼠血清ALT、AST、TG、CHO水平和肝組織中MDA含量明顯低于模型組(P< 0.05或P< 0.01)，同時(shí)肝組織中SOD、GSH-Px活性明顯升高，與模型組相比差異顯著(P<0.05或P< 0.01)。結(jié)論：廣棗提取物對(duì)酒精性肝病具有一定的保護(hù)作用。

廣棗提取物；酒精性肝?。淮笫?/p>

酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)是由于長期大量飲酒導(dǎo)致的中毒性肝損傷，包括輕癥酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化5種類型[1]，其中以酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化是其最常見的三種肝損傷，它們往往同時(shí)并存并相互轉(zhuǎn)化。隨著人民生活水平的提高，ALD的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，已成為僅次于病毒性肝病的第二大肝病病種[2]。目前對(duì)于ALD尚缺乏有效的治療手段，藥物治療總體效果差，毒副作用大，而且費(fèi)用高。本研究以酒精性肝病大鼠模型為考察對(duì)象，探討廣棗提取物對(duì)酒精性肝病的治療作用，為臨床治療酒精性肝病藥物的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物SPF級(jí)雄性 wistar 大鼠60只(由江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)2011-130)，體重180～200 g。

1.2主要試劑廣棗藥材(毫州市中藥飲片廠，批號(hào)130426)；益肝靈片(湖南省株洲市制藥三廠，批號(hào)：20020808)；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯 (TG)、膽固醇(CHO) 試劑盒 (北京利德曼生化技術(shù)有限公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)、丙二醛(MDA ) 試劑盒(南京建成生物工程研究所)；無水乙醇(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.3廣棗提取物的超聲提取[3]將廣棗50 ℃恒溫烘干后粉碎過40目篩，按液料比35∶1(v∶m)加入62%乙醇溶液浸泡15 min后，在70 ℃下超聲55 min，抽濾。待樣品冷卻到室溫后再重復(fù)處理1次。合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑，濃縮后產(chǎn)物真空冷凍干燥即得。

1.4動(dòng)物分組與處理60只大鼠正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為模型組(A組)、低劑量組(B組)、中劑量組(C組)、高劑量組(D組)、陽性對(duì)照組(E組)和正常組(F組)，每組10只。實(shí)驗(yàn)組大鼠隨意飲用5%酒精3天， 第4天換成10%， 后每隔1周增加2%， 直至18%， 然后在每周增加1%直至 22%。從飲用22%酒精開始，以54%酒精1.2 mL每日分3次灌胃，連續(xù)8周。A組單純酒精灌胃，B、C、D組酒精灌胃同時(shí)，從飲用54%酒精的第一天起，每天分別以0.3、0.6、1.2 g·kg-1體重劑量予廣棗提取物灌胃，每天1次，共8周。E組將益肝靈研磨之后溶于蒸餾水中按100 mg·kg-1的標(biāo)準(zhǔn)給予灌胃，灌胃方法及時(shí)間同實(shí)驗(yàn)組。F組飲用自來水，灌胃時(shí)采用生理鹽水，灌胃方法及時(shí)間同上。

1.5樣品采集與處理各組大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，稱重。10%麻醉劑3 mL·kg-1進(jìn)行腹腔注射麻醉，取血液離心待用；取出肝臟，稱重后，迅速切下二部分，其中一部分肝組織以4% 甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片；另一部分肝組織用于制成10%肝勻漿。

1.6檢測(cè)指標(biāo)及方法血清CHO(膽固醇)、TG(甘油三酯)、ALT(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)、AST(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)使用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。肝勻漿SOD(超氧化物歧化酶)采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定；GSH-Px(谷胱甘肽過氧化物酶)采用還原法測(cè)定；MDA(丙二醛)采用硫代巴比妥酸(TBA)法測(cè)定。

1.7統(tǒng)計(jì)分析采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 11.5進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，不同組間參數(shù)比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1一般狀況正常對(duì)照組大鼠皮毛有光澤，活動(dòng)、飲食正常，體重持續(xù)增長，無死亡現(xiàn)象；模型組大鼠酒精灌胃10 w后有不同程度的精神萎靡，行動(dòng)不穩(wěn)，進(jìn)食量降低，鼠毛凌亂，體質(zhì)質(zhì)量下降等表現(xiàn)；各干預(yù)組較乙醇模型組有不同程度的改善。7只大鼠死亡，正常對(duì)照組未見異常，無死亡。

2.2CAE對(duì)ALD大鼠血清指標(biāo)的影響與正常組比較，乙醇模型組血清中ALT、AST 水平增高，差異極顯著(P<0.01 )；與乙醇模型組比，各CAE干預(yù)組ALT、AST水平有不同程度降低，其中低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中、高劑量組及陽性對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)；高劑量組ALT、AST與正常組大鼠比較無顯著性差異(表1)。

表1　各組大鼠血清ALT、AST檢測(cè)情況

注:與正常組比較,○P<0.05,*P<0.01;與乙醇模型組比較,■P<0.05,△P<0.01。

2.3CAE對(duì)ALD大鼠血清脂質(zhì)水平的影響與正常對(duì)照組比較，乙醇模型組大鼠血清TG、CHO水平升高，差異極顯著(P<0.01)。給藥10周后，與模型組比較，陽性對(duì)照組及各CAE組TG、CHO水平有不同程度降低，其中CAE低劑量組CHO水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其它各組TG、CHO水平差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表2)。

表2　各組大鼠血清TG、CHO 檢測(cè)情況

注:與正常組比較,○P<0.05,*P<0.01;與乙醇模型組比較,■P<0.05,△P<0.01。

2.4CAE對(duì)ALD大鼠肝組織SOD、GSH-Px和MDA的影響由表3可見，與正常組比較, 乙醇模型組SOD、GSH-Px水平降低、MDA水平升高，差異極顯著(P<0.01)。各CAE干預(yù)組SOD水平均有提高，與模型組比較，差異極顯著(P<0.01)；各CAE干預(yù)組GSH-Px水平均有提高，與模型組比較，低劑量組差異顯著(P<0.05)，中、高劑量組差異極顯著(P<0.01)；各CAE干預(yù)組MDA水平均有下降，與模型組比較，差異極顯著(P<0.01,表3)。

表 3　各組大鼠SOD、GSH-Px、MDA檢測(cè)情況

注: 與正常組比較,○P<0.05,*P<0.01;與乙醇模型組比較,■P<0.05,△P<0.01。

3　討　論

近年來我國酒精性肝病的發(fā)病率逐年升高，其發(fā)生機(jī)制較復(fù)雜，各種因素相互作用導(dǎo)致疾病發(fā)生發(fā)展[4]。關(guān)于酒精性肝病發(fā)病機(jī)制的學(xué)說有很多，目前普遍認(rèn)同的可能發(fā)病機(jī)制是：乙醇及其代謝產(chǎn)物的直接毒性作用、氧化應(yīng)激反應(yīng)及脂質(zhì)過氧化、Kupfer細(xì)胞的激活與內(nèi)毒素、細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)、嗜肝病毒、性別與遺傳多態(tài)性、病毒的疊加作用等[5-7]。總之，目前尚未完全闡明一個(gè)具體的機(jī)制[8]。

研究報(bào)道，廣棗中的總黃酮被多數(shù)學(xué)者認(rèn)為是其有效成分，具有多種生理活性作用。廣棗總黃酮在體外有很強(qiáng)的清除和抑制自由基作用[9]。對(duì)ADR作用后大鼠心肝組織，廣棗總黃酮具有降低MDA水平，提高抗氧化酶(GSH-Px、SOD)活性，說明廣棗總黃酮具有清除自由基、抑制過氧化作用[10]。本研究結(jié)果顯示，對(duì)酒精性肝損傷大鼠，CAE能降低血清ALT、AST水平，減少肝內(nèi)TG、CHO沉積，提示CAE具有減輕酒精性肝損傷的作用；通過檢測(cè)SOD、GSH-Px和MDA活性發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用CAE后肝組織中SOD含量和GSH-Px水平較模型組均升高，MDA含量明顯下降，說明廣棗提取物起到了保護(hù)肝細(xì)胞免受自由基損傷的作用。本研究為廣棗的合理開發(fā)利用提供了一定依據(jù)。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組．酒精性肝病診療指南[J]．中華肝臟病雜志，2006，14：164-166．

[2]殷曉軒，尹常?。凭愿尾≈嗅t(yī)用藥規(guī)律探討[J]．中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(12)：285．

[3]劉霞，李偉，范小娜，等．響應(yīng)面法優(yōu)化廣棗總黃酮的超聲提取工藝研究[J]．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，54(9)：2210-2213．

[4]Schwartz J M，Reinus J F．Prevalence and natural history of alcoholic liver disease[J]．Clin Liver Dis，2012，16(4)：659-66．

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[6]Wu D，Cederbaum A．Alcohol oxidative stress and free radical damage[J]．Alcohol Res Health，2003，27：277-284．

[7]時(shí)靜華，潘桂蘭，陳曉東．酒精氧化應(yīng)激和自由基損傷[J]．包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007(3)：336．

[8]孫麗娜，周俊英．內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在酒精性肝病細(xì)胞凋亡中的作用[J]．世界華人消化雜志，2010，18(1)：70．

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Protective Effect of Choerospondias Axillaries Extracts on Alcoholic Liver Diseases in Rats

LIUXia,LIWei,DENGChun-fang,FANXiao-na

(GannanMedicalUniversity,GanzhouJiangxi341000)

Objective: To study the therapeutic effects of Choerospondias Axillaries extracts(CAE)on rats with alcoholic liver diseases. Methods: The rats were randomly divided in to 6 groups: model group, low-dose group, middle-dose group, high-dose group, positive control group and normal group. The model of rats with alcoholic liver disease was established by intragastric injection with small quantity of gradually increasing concentrations of alcohol into the rats for several times a day, and some of them were treated with CAE. The rats were sacrificed after 8 weeks and some enzyme levels were examined. Results: The levels of serum ALT, AST, TG, CHO and hepatic tissue content of MDA in CAE treated groups were significantly decreased (P<0.05 or 0.01), while the levels of SOD and GSH-Px were significantly increased in comparison with those in the model group (P<0.05 or 0.01). Conclusion: CAE possessed certain protective effect on alcoholic liver diseases.

Choerospondias Axillaries Extracts (CAE); Alcoholic liver disease; Rats

江西省教育廳科技項(xiàng)目(GJJ13681)；贛南醫(yī)學(xué)院科研課題(YB201210)；江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研課題(2013A097)

范小娜，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。E-mail:gylx529@126.com

R285.5

A

1001-5779(2016)03-0355-03

10.3969/j.issn.1001-5779.2016.03.006

2015-10-22)(責(zé)任編輯：劉仰斌)