張　洋，張　艷，刁鳳聲，王仁和

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 中醫(yī)理療科，遼寧 大連 116027；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 心內(nèi)科，遼寧 沈陽(yáng) 110032；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 研究生學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

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生血寶合劑對(duì)心梗后心衰大鼠心功能及心肌結(jié)構(gòu)的影響

張洋1,3，張艷2，刁鳳聲1，王仁和3

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 中醫(yī)理療科，遼寧 大連 116027；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 心內(nèi)科，遼寧 沈陽(yáng) 110032；3.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 研究生學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032)

目的觀察生血寶合劑對(duì)心梗后心衰大鼠心功能及心肌結(jié)構(gòu)的影響。方法以冠脈結(jié)扎配合力竭式游泳制作心梗后大鼠心衰模型，將造模成功存活的大鼠隨機(jī)分為模型組、賴諾普利組、生血寶合劑組，每組10只；未行冠脈結(jié)扎術(shù)的大鼠10只為對(duì)照組。各組均通過灌胃給藥或蒸餾水，給藥6周后超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室收縮末期容積(ESV)、左室舒張末期容積(EDV)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)和左室每搏輸出量(SV)，后處死全部大鼠，取心肌組織HE染色觀察心肌組織結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果與對(duì)照組比較，模型組、生血寶合劑組及賴諾普利組ESV、EDV明顯升高，LVEF、SV顯著下降，差異均有顯著性意義，P<0.05。與模型組比較，生血寶合劑組及賴諾普利組ESV、EDV顯著下降，LVEF、SV明顯升高，差異均有顯著性意義，P<0.05。生血寶合劑組與賴諾普利組比較，ESV、EDV、LVEF及SV數(shù)值，差異均無顯著性意義，P>0.05。HE染色顯示，對(duì)照組心肌細(xì)胞排列整齊、致密、結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞外間質(zhì)較少，可見少量成纖維細(xì)胞。模型組心肌細(xì)胞淡染，排列紊亂，細(xì)胞間隙增大、形態(tài)模糊，成纖維細(xì)胞增多，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。生血寶合劑組及賴諾普利組心肌細(xì)胞形態(tài)較清晰，成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞少見。結(jié)論生血寶合劑可改善心梗后心衰大鼠心功能，修復(fù)受損的心肌組織，起到治療心衰的作用。

生血寶合劑；心梗后心衰；心功能；心肌結(jié)構(gòu)

[引用本文]張洋，張艷，刁鳳聲，等.生血寶合劑對(duì)心梗后心衰大鼠心功能及心肌結(jié)構(gòu)的影響[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016,38(5)：436-439.

心力衰竭(簡(jiǎn)稱心衰)是各種心血管疾病發(fā)展的終末階段，其發(fā)病率、致殘率以及病死率較高。心室重構(gòu)引起的心肌結(jié)構(gòu)改變和心功能下降是心衰發(fā)生發(fā)展的病理生理基礎(chǔ)。賴諾普利為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，是目前治療心衰的基石性藥物，具有抑制心室重構(gòu)及改善心功能等作用。生血寶合劑據(jù)中醫(yī)“精血相生”理論組方，已有研究證實(shí)具有調(diào)節(jié)免疫、抗血栓、調(diào)血脂，抗氧化、促進(jìn)紅細(xì)胞生成及調(diào)節(jié)細(xì)胞分布紊亂等多重作用[1-2]。目前尚鮮見生血寶合劑對(duì)心衰相關(guān)影響的研究報(bào)道。本研究擬通過與賴諾普利療效進(jìn)行比較，觀察生血寶合劑對(duì)心梗后心衰大鼠心功能及心肌結(jié)構(gòu)的影響，研究其作用機(jī)制及靶點(diǎn)，為中醫(yī)藥防治心衰提供新策略。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用普通級(jí)，12周齡，健康雄性SD大鼠100只，體重220～260 g。由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供[SCXK(遼)2010-0001]。

1.2造模與分組

選取90只大鼠經(jīng)1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后采用2%戊巴比妥鈉溶液，按48 mg/kg劑量行腹腔注射麻醉。胸部備皮，于左側(cè)第4肋間開胸，分離胸部肌肉，暴露肋骨，分離肋骨間組織，剝離心包膜，于冠狀動(dòng)脈前降支起點(diǎn)處結(jié)扎前降支[3]；心臟表面給予利多卡因注射液約0.1 mL，以預(yù)防室性心律失常，分層縫合胸壁[4-5]，術(shù)后記錄心電圖。心電圖ST段上抬0.05 mV以上或出現(xiàn)病理性Q波為判定心梗造模成功標(biāo)準(zhǔn)。術(shù)后連續(xù)注射青霉素鈉3 d，預(yù)防感染。常規(guī)喂養(yǎng)1周后，于第2周行力竭式游泳(把大鼠置于長(zhǎng)2 m寬1.5 m水池中，水深約1 m，以大鼠頭部完全沉入水中，肢體無明顯擺動(dòng)判斷為力竭)，1次/d，共4周[6-7]。后行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)，以左室射血分?jǐn)?shù)(EF)≤60%或計(jì)算心臟指數(shù)(CI)≤180 mL/(min/kg)為心衰造模成功標(biāo)準(zhǔn)[8-9]。造模過程中，大鼠存活41只，死亡49只。將存活的大鼠隨機(jī)分為模型組、賴諾普利組、生血寶合劑組，每組10只；未行冠脈結(jié)扎術(shù)的大鼠10只為對(duì)照組。

1.3藥物與給藥劑量

生血寶合劑(每瓶100 mL)，由清華德人西安幸福制藥生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字：Z20050770。賴諾普利片(每片10 mg)，由信誼萬象藥業(yè)股份提供，國(guó)藥準(zhǔn)字：H1096026。對(duì)照組與模型組灌胃蒸餾水1.5 mL/次，2次/d。給藥組按人鼠劑量換算，給藥劑量(g/kg)=給出的人的劑量(g)×系數(shù)(0.018)/所求動(dòng)物體重(kg)[10]，灌胃給藥。生血寶合劑組，給藥為9.2 g生藥/kg，2次/d；賴諾普利組，1.5 mg生藥/kg，2次/d。各組均灌胃6周。

1.4檢測(cè)方法

給藥6周后，各組大鼠行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)左室收縮末期容積(ESV)、左室舒張末期容積(EDV)、左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)和左室每搏輸出量(SV)。后處死全部大鼠，取心肌組織1.5 cm3，10%福爾馬林溶液固定，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察并攝片。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠心功能情況

與對(duì)照組比較，模型組、生血寶合劑組及賴諾普利組ESV、EDV明顯升高，LVEF、SV顯著下降，差異均有顯著性意義，P<0.05。與模型組比較，生血寶合劑組及賴諾普利組ESV、EDV顯著下降，LVEF、SV明顯升高，差異均有顯著性意義，P<0.05。生血寶合劑組與賴諾普利組比較，ESV、EDV、LVEF及SV數(shù)值差異均無顯著性意義，P>0.05。見表1。

表1　各組大鼠心功能變化情況

1)與對(duì)照組比較，P<0.05；2)與模型組比較，P<0.05

2.2各組大鼠心肌組織HE染色結(jié)果

對(duì)照組：心肌細(xì)胞排列整齊、致密、結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞外間質(zhì)較少，可見少量成纖維細(xì)胞。

模型組：心肌細(xì)胞淡染，排列紊亂，細(xì)胞間隙增大、形態(tài)模糊，成纖維細(xì)胞增多，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

生血寶合劑組及賴諾普利組：心肌細(xì)胞形態(tài)較清晰，成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞少見。見圖1。

圖1　各組大鼠心肌組織HE染色Fig 1 The rats myocardial tissue HE staining results(HE ×40)A:對(duì)照組；B:模型組；C:賴諾普利組；D:生血寶合劑組

3　討　論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的心衰與中醫(yī)文獻(xiàn)記載的心衰存在著一定差異，屬中醫(yī)學(xué)“胸痹、痰飲、不寐、水腫、喘證、心悸”等范疇[11-12]。其病機(jī)之根為陽(yáng)微陰弦本虛標(biāo)實(shí)之證候，本虛以心腎氣虛為主，標(biāo)實(shí)則以心血虧虛為重。故補(bǔ)益心腎，調(diào)和氣血為其有效治則。心室重構(gòu)是心衰發(fā)生發(fā)展的病理生理基礎(chǔ)[13]；心室重構(gòu)發(fā)生后，心室射血功能的下降和心室容量的增加可導(dǎo)致心室肥厚，出現(xiàn)心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列紊亂，進(jìn)而加速了心衰進(jìn)程[14-15]。

生血寶合劑為棕褐色液體，氣微香，味甜、微苦，其主要成分為黃芪、白芍、桑葚、何首烏、女貞子、黑早蓮、狗脊等，具有益氣生血，滋補(bǔ)心腎之功效。賴諾普利為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，具有抑制心室重構(gòu)及改善心功能等作用。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)大鼠行冠脈結(jié)扎術(shù)及配合力竭式游泳的方法，成功制作了大鼠心梗后心衰模型，予生血寶合劑及賴諾普利進(jìn)行干預(yù)觀察。行超聲心動(dòng)圖發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，模型組大鼠心功能明顯下降，生血寶合劑組及賴諾普利組大鼠心功能較模型組有明顯改善。行心肌組織HE染色發(fā)現(xiàn)，模型組心肌細(xì)胞淡染，排列紊亂，細(xì)胞間隙增大、形態(tài)模糊，成纖維細(xì)胞增多，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。生血寶合劑組及賴諾普利組心肌細(xì)胞形態(tài)較清晰，成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞少見。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示生血寶合劑與賴諾普利均可改善心梗后心衰大鼠心功能，可修復(fù)受損心肌組織。其作用機(jī)制可能是通過改善受損心肌纖維的抗?fàn)坷浴椥约疤岣咝氖翼槕?yīng)性，進(jìn)而達(dá)到治療心衰的作用。本研究表明，生血寶合劑中各味中藥配伍后，其功效在治療心衰過程中起到了協(xié)同及促進(jìn)作用，為中醫(yī)“氣能生血，血能養(yǎng)氣”的理論提供了科學(xué)客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，佐證了“補(bǔ)益心腎，調(diào)和氣血”治則在治療心衰中的重要意義。本研究為生血寶合劑防治心衰提供了實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。生血寶合劑價(jià)格較為低廉，具備較好的經(jīng)濟(jì)依從性，可期待其作為防治心衰的新手段。但其防治心衰的療效還有待于進(jìn)一步臨床研究予以證實(shí)。

[1] 易小蘭，楊華，張飛飛，等.生血寶合劑的多成分HPLC指紋圖譜[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22(1):57-60.

[2] 趙崗，惠愛武，楊甫昭，等.生血寶合劑與環(huán)磷酰胺合用治療S180的增效作用和升高白細(xì)胞作用[J].陜西中醫(yī)，2011，32(9):1252-1253.

[3] 李軍，呂雙紅，薛劍，等. 大鼠心肌梗死后心力衰竭模型的建立及評(píng)價(jià)[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2015，22(10):1037-1041.

[4] 禮海.益氣活血復(fù)方對(duì)慢性心衰大鼠心肌MMP-1、TIMP-1影響相關(guān)性及抗心室重構(gòu)機(jī)制的研究[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[5] 馬金.益氣活血復(fù)方聯(lián)合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)慢性心衰大鼠的心功能及左室重構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[6] 張艷，廖佳丹，王彩玲.益氣活血利水不同配伍對(duì)慢性心衰大鼠MMP-9影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(8):1937-1939.

[7] 張艷，胡曉紅，廖佳丹，等.不同中藥復(fù)方對(duì)慢性心衰大鼠MMP-2、TIMP-2影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2012，39(7):1205-1207.

[8] 廖佳丹，張艷，宮麗鴻，等.益氣活血利水不同配伍對(duì)慢性心衰大鼠AT1、ERK2影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(10):2270-2273.

[9] 宮麗鴻，張艷，高峰.益氣活血復(fù)方對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌組織MMP-1、I型膠原、BNP的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2011，9(2):189-190.

[10] 張艷，廖佳丹，王彩玲.不同中藥復(fù)方對(duì)慢性心衰大鼠MMP-2、TIMP-2的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36(6):409-410.

[11] 羅良濤，付幫澤，郭淑貞，等.中醫(yī)古籍中的“心衰”及其與心力衰竭的關(guān)系[J].中醫(yī)雜志，2014，55(6): 532-534．

[12] 張艷,禮海，王彩玲.慢性心衰氣虛血淤臨床辨證規(guī)律研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21(12): 1-2．

[13] 徐玉平，錢海兵.益母草堿對(duì)梗死后心衰大鼠的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，13(11): 144-145．

[14] 張洋.益氣活血復(fù)對(duì)慢性心衰大鼠Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2011.

[15] 賈政，魏玲，劉茜，等.重組腺病毒介導(dǎo)Klotho基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)大鼠心力衰竭心肌重構(gòu)的影響[J].中華心血管病雜志,2015,43(3):219-220.

Shengxuebao mixture effect on cardiac function and cardiac structure for heart failure after myocardial infarction rats

ZHANG Yang1,3, ZHANG Yan2, DIAO Feng-sheng1, WANG Ren-he3

(1.DepartmentofTraditionalChineseMedicineandPhysicalTherapy,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China; 2.DepartmentofCardioiogy,AffiliatedHospitalofLiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110032,China;3.GraduateSchool,LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110032,China)

Objective To observing Shengxuebao mixture effect on cardiac function and cardiac structure for heart failure after myocardial infarction rats. Methods coronary artery ligation method and swimming exhaustion caused by the rats heart failure model after myocardial infarction，the Survivals were randomly divided into model group，Lisinopril group，Shengxuebao mixture group，no coronary artery ligation in rats as control group，10 rats in each group，by gavage administration or distilled water. After 6 weeks of medication，by doppler echocardiography machine detected between groups in the rats cardiac function；Using HE staining to observe the structure changes of myocardial tissue. Results Compared with control group, model group, Shengxuebao mixture group and lisinopril group ESV and EDV were significantly higher, LVEF and SV dropped significantly,P<0.05. Compared with model group, Shengxuebao mixture group and lisinopril group ESV, EDV dropped significantly, LVEF and SV increased significantly,P<0.05.Shengxuebao mixture group Compared with Lisinopril group，ESV,EDV,LVEF and SV were no significant difference，P>0.05.HE staining results: Control group myocardial cell neatly, compact, the structure was clear, the outer cell mass was less, can be found in a small amount of fibroblasts.Model group myocardial cell light dye, disordered arrangement, intercellular space increases, ambiguous, fibroblasts increased, accompanied by inflammatory cells infiltration. Shengxuebao mixture group and lisinopril group myocardial cell morphology was clear, that can be found small amount of fibroblast cells and inflammatory cells. Conclusion Shengxuebao mixture can improve cardiac function in rats with heart failure after myocardial infarction and repair damaged heart tissue, thus achieve effect for the treatment of heart failure.

Shengxuebao mixture; heart failure after myocardial infarction; cardiac function; cardiac structure

遼寧省科學(xué)事業(yè)公益研究基金項(xiàng)目(2013001002)

張 洋(1983-)，男，遼寧新民人，博士研究生。E-mail:yangzhang44944 @163.com

刁鳳聲，教授。E-mail:Diaofs1964@163.com

??著

10.11724/jdmu.2016.05.05

R289.9

A

1671-7295(2016)05-0436-04

2016-06-04；

2016-09-10)