王 藝，彭國慶，陳 迪，韓 超，苗春潤，蘇 超，盧保金，馮善龍

·實(shí)驗(yàn)論著·

PSP對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠眼保護(hù)作用的臨床動(dòng)態(tài)觀察

王 藝1，彭國慶2，陳 迪1，韓 超1，苗春潤3，蘇 超4，盧保金3，馮善龍4

1DepartmentofOphthalmology；3DepartmentofEmergency；4Department of General Surgery，Affiliated Hospital of Taishan MedicalUniversity，Tai'an271000，ShandongProvince，China；2Department of Orthopedics，Tai'an City Central Hospital，Tai'an 271000，Shandong Province，China

Correspondence to:Yi Wang.Department of Ophthalmology，Affiliated Hospital of Taishan Medical University，Tai'an 271000，Shandong Province，China.346048368@qq.com

·AIM:Toapplydifferentdosesofpolygonapolysaccharose（PSP）todiabeticratsmodelby gastrogavagethatwereinducedbystreptozotocin（STZ），then check the rats about anterior segment，F(xiàn)VEP，ERG，fundus fluorescein angiography（FFA）and measurefastingbloodglucose（glucoseoxidase method）by inner canthus vein blood to observe the eye disease process at different time points and to discuss the protective effect of PSP on ocular lesions in DM rats and the treatment effect，to provide the experimental basis and theoretical basis for PSP treating diabetic ocular disease.

·METHODS:One hundred male SD rats were randomly divided into 2 groups:diabetic model group（80 rats induced by STZ）and blank control group（20 rats）. Then the diabetic model group was randomly divided into 4 subgroups.The group DM（diabetic group）had 20 rats with normal diet and 2mL physiological saline for dailygavage.PSPgavagedgroupsincludedthree subgroups and with 20 rats in each group，group L（low dose ofPSPgavagegroup，200mg/kg），groupM（medium dose of PSP gavage group，400mg/kg），group H（high dose of PSP gavage group，800mg/kg）.Every group was gavaged with 2mL PSP.Twenty rats in group BC（blank control group），and they were gavaged saline of equal dose as control.After the success of modeling，5 groups were under the same conditions of feeding，and gavaged every day.At 2，4，6，8，10 and 12wk，anterior segment examination and FFA were given.At 4，8 and 12wk，F(xiàn)-VEP and ERG were given.Fasting blood glucose（by glucose oxidase method）was measured through inner canthus vein blood.

·RESULTS:Compared to BC group，fasting blood glucose levels were significantly higher in group DM，L，M and H（P＜0.05）.Compared to DM group，fasting blood glucose level decreased in L，M，H group（P＜0.05）.The fasting blood glucose levels of L，M and H groups showed a time and dose dependent relationship. After anterior segment examination，there were 6 rates in DM group，3 in L group，1 in M group with different degrees ofcataractsymptomswhichbecamemore serious with time.The BC group was not found any abnormal in the anterior segment.Examined by F-VEP，the rats in group DM showed extension of the P100 peak latency.Compared to the group DM，PSP gavaged group showed a shortened of the extension of the P100 peak latency，while the group BC had no obvious change.In the ERG examination，the rats in group DM showed that amplitude of Max-R a，b wave decreased by 51.2%，59.8%and amplitude of Cone-R a，b wave decreased by 31.4%，41.2%.The Ops OS value and amplitude of 30Hz FlickerN1-P1decreased，therewasasignificant difference compared to group BC.PSP gavaged group was better than group DM.In the FFA examination，in group DM，we could find the typical manifestations of diabeticretinopathybackgroundfluorescence enhancement，distortion of the blood vessels and blood capillary dilate，retinal vascular leakage of fluorescein and intraretinal hemmorhages compared with the group BC.PSP gavaged group was better than group DM.

·CONCLUSION:PSP can effectively reduce the blood glucose levels of diabetic rats，and also can delay the process of ocular complications in diabetic rats，which have an obvious therapeutic effect on ocular lesions.The mechanism islikelytoimprovethemetabolismof glucose and lipid metabolism，increase the amount of glucose tolerance，and play a protective role in diabetic lens metabolism and retinal microvascular disease.

目的：應(yīng)用不同劑量黃精多糖（polygona-polysaccharose，PSP）灌胃由鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型，在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)大鼠行前節(jié)檢查、F-VEP、ERG、眼底熒光血管造影檢查（FFA）觀察眼部病變過程，眼內(nèi)眥靜脈采血葡萄糖氧化酶法（強(qiáng)生血糖儀）測空腹血糖值。探討PSP對(duì)DM大鼠眼部病變的保護(hù)作用機(jī)制與治療效果，為黃精多糖治療糖尿病眼部病變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論基礎(chǔ)。

方法：雄性SD大鼠100只隨機(jī)被分為兩組:糖尿病模型組80只（由STZ誘導(dǎo)造模）和空白對(duì)照組20只。再將糖尿病模型組隨機(jī)分為4組，其中DM組（糖尿病對(duì)照組）20只，正常飼養(yǎng)，每日灌胃2mL生理鹽水。PSP灌胃組三組，每組各20只，包括L組（低劑量PSP灌胃組，200mg/kg）、M組（中劑量PSP灌胃組，400mg/kg）、H組（高劑量PSP灌胃組，800mg/kg），每次灌胃劑量2mL；BC組（空白對(duì)照組）20只，灌胃等劑量生理鹽水作為對(duì)照。造模成功后5組在相同條件下飼養(yǎng)，每天灌胃，并在第2、4、6、8、10、12wk行前節(jié)照相、眼底熒光血管造影檢查（FFA），4、8、12wk行F-VEP、ERG檢查。眼內(nèi)眥靜脈采血葡萄糖氧化酶法（強(qiáng)生血糖儀）測空腹血糖值。

結(jié)果：DM、L、M、H組與BC組相比:空腹血糖水平明顯增高（P＜0.05）。L、M、H組與DM組相比:空腹血糖水平增高（P＜0.05）。L、M、H三組之間呈時(shí)間與劑量依賴關(guān)系。眼前節(jié)檢查可觀察到有6只DM組、3只L組、1只M組大鼠出現(xiàn)了不同程度的白內(nèi)障癥狀，并隨著時(shí)間推移愈發(fā)加重，而BC組眼前節(jié)照相并未發(fā)現(xiàn)異常。DM組大鼠在F-VEP檢查表現(xiàn)為P100峰潛時(shí)延長，PSP灌胃組與DM組相比P100峰潛時(shí)延長時(shí)間縮短，BC組無明顯改變。在ERG中表現(xiàn)為DM組大鼠Max-R a和b波振幅下降51.2%和59.8%，Cone-R a和b波振幅下降31.4%和41.2%，Ops-OS值、30Hz Flicker N1-P1振幅下降，與BC組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，PSP灌胃組情況好于DM組。在FFA檢查中可發(fā)現(xiàn)DM組眼底與BC組相比出現(xiàn)背景熒光增強(qiáng)、大血管扭曲和毛細(xì)血管擴(kuò)張、視網(wǎng)膜血管熒光素滲漏、視網(wǎng)膜內(nèi)出血等典型糖尿病視網(wǎng)膜病變的表現(xiàn)，PSP灌胃組情況好于DM組。

結(jié)論：PSP既能有效降低糖尿病大鼠的血糖水平，又能延緩糖尿病大鼠眼部并發(fā)癥的進(jìn)程，減緩白內(nèi)障和糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展，可以對(duì)眼部病變起到明顯的治療作用。其機(jī)制有可能為通過抑制糖基化終產(chǎn)物，改善糖脂質(zhì)代謝，提高糖耐量，而對(duì)糖尿病晶狀體代謝和視網(wǎng)膜微小血管病變發(fā)揮保護(hù)作用。

黃精多糖:鏈脲佐菌素:糖尿病大鼠:糖尿病視網(wǎng)膜病變:眼

0　引言

糖尿病是一組以高血糖為特征的代謝性疾病，其特點(diǎn)為并發(fā)癥多，且呈進(jìn)行性加重。由于人類生活水平的顯著提高，現(xiàn)在糖尿病已經(jīng)成為全世界最為常見的全身代謝性疾病之一。糖尿病由于胰島素分泌不足或其生物活性低下可導(dǎo)致全身各器官和組織血管代謝紊亂，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，糖尿病人群中幾近半數(shù)合并糖尿病眼部病變，其中1/4有明顯視力障礙，糖尿病性白內(nèi)障首當(dāng)其沖，其次糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy，DR）作為糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，已然成為世界公認(rèn)的中老年人致盲眼病，直接影響了患者及患者家庭的生活品質(zhì)。糖尿病病程5a以下者DR的發(fā)病率約為38%～39%，病程5～10a者約為50%～56.7%，病程10a以上者則高達(dá)69%～90%。其致盲率為8%～12%［1］。在發(fā)現(xiàn)DR改變之前或出現(xiàn)DR改變?cè)缙冢行У乜刂蒲呛透纳埔暰W(wǎng)膜微循環(huán)可以防止DR的發(fā)生或減慢其進(jìn)展的速度［2］。目前糖尿病的治療多依賴于西藥，但西藥治療效果還遠(yuǎn)沒達(dá)到理想水平，且藥物治療僅為輔助治療。西藥存在低血糖、胃腸道反應(yīng)等缺點(diǎn)，中藥具有藥物作用緩和、持久、毒副作用小，可以從整體水平上治療和防治慢性進(jìn)展性疾病。所以，開發(fā)高效低毒的抗糖尿病中藥將是一個(gè)具有發(fā)展前景的研究領(lǐng)域。

中藥黃精為百合科植物，其中泰山黃精味甘性平，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾潤肺益腎之功效。黃精主要含有多糖、甾體皂苷、蒽醌類化合物、生物堿、強(qiáng)心苷、木質(zhì)素、維生素和多種氨基酸等化合物，其中黃精多糖是其主要藥效活性物質(zhì)。研究黃精多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠眼部病變的影響可以進(jìn)一步探索黃精多糖對(duì)糖尿病并發(fā)癥的治療作用，并發(fā)現(xiàn)治療糖尿病的新途徑。

1　材料和方法

1.1材料 雄性SD（清潔級(jí)）大鼠100只，兩月齡，體質(zhì)量200±20g，購于斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK（京）2011-0004。藥品、試劑和儀器:黃精多糖粉劑:泰安市中薈植物生化有限公司，含量≥90%；鏈脲佐菌素:Sigma公司（批號(hào):WXBB2432V）；復(fù)方托吡卡胺滴眼液:參天制藥株式會(huì)社（批號(hào): M412271）；血糖測定試劑盒:上海橋杜生物科技有限公司；熒光素鈉注射液:廣州白云山明興制藥有限公司（批號(hào):LotIM1314A2015-03）；7%水合氯醛:泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制（批號(hào):20140715）。灌胃針（規(guī)格:16號(hào)，8cm，北京中昊萬通科技有限公司）。pH值測定儀（Thermo奧立龍ORION3-STARPH/ORP測量儀）。美國強(qiáng)生穩(wěn)豪倍優(yōu)型血糖儀（One Touch UltraVue）及配套血糖試紙。目測尿糖試紙:廣州市花都高爾寶生物技術(shù)有限公司，產(chǎn)品編號(hào):YY/T0478。眼前節(jié)照相儀:上海新眼光醫(yī)療器械有限公司；裂隙燈檢查儀:上海新眼光醫(yī)療器械有限公司；眼電生理診斷系統(tǒng):德國羅蘭，產(chǎn)品型號(hào):RETI-Port 21 Compact；同步共焦激光眼底熒光造影儀:德國海德堡，產(chǎn)品型號(hào):SPECTRALIS HRA+OCT。

1.2方法

1.2.1大鼠的分組及造模 大鼠100只分為兩組:（1）糖尿病組:大鼠自由飲水但禁食12h后，30min內(nèi)快速腹腔注射STZ（60mg/kg，用2%檸檬酸鈉緩沖液溶解，pH= 4.44）造模，80只。造模3d后用葡萄糖氧化酶法測空腹血糖（FBG）≥11.1mmol/L、尿糖試紙檢測≥（+++）者視為成功糖尿病大鼠，＜11.1mmol/L的大鼠淘汰出糖尿病組，造模成功68只；（2）正常對(duì)照組（BC）:腹腔注射等劑量的2%檸檬酸鈉緩沖溶液，20只（造模成功后每天上午8∶00～10∶00灌胃生理鹽水2mL）。糖尿病組68只大鼠采用隨機(jī)配伍方法分為4組（每組17只，造模后3d開始每天上午8∶00～10∶00灌胃）:（1）糖尿病模型組（DM）:正常飼養(yǎng)，灌胃2mL生理鹽水。（2）低劑量PSP灌胃組（L）:灌胃2mL PSP（200mg/kg，無菌生理鹽水溶解）。（3）中劑量PSP灌胃組（M）:灌胃2mL PSP（400mg/kg，無菌生理鹽水溶解）。（4）高劑量PSP灌胃組（H）:灌胃2mL PSP（800mg/kg，無菌生理鹽水溶解）。

1.2.2空腹血糖檢測 造模前3d及造模后3d應(yīng)用葡萄糖氧化酶法（強(qiáng)生穩(wěn)豪倍優(yōu)型血糖儀配備配套血糖試紙）測量空腹血糖（FBG）值以確定造模成功率，以后每2wk測量1次。

1.2.3相關(guān)眼科臨床檢查方法 造模成功后在第2、4、6、8、10、12wk行前節(jié)照相、眼底熒光血管造影（FFA）檢查，4、8、12wk行F-VEP和ERG檢查。（1）眼前節(jié)照相:將大鼠用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳，然后以7%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉（0.5mL/100g），麻醉效果滿意后一人手持大鼠放于裂隙燈顯微鏡物鏡前方，用拇指示指分開大鼠右眼瞼使眼球充分暴露，并使大鼠右眼瞳孔正對(duì)裂隙燈顯微鏡物鏡鏡頭。另一人操作裂隙燈顯微鏡以彌散光照明法進(jìn)行檢查，出現(xiàn)最佳清晰圖像后按下相機(jī)快門拍照3～5張保存?zhèn)溆?。左眼同法檢查。（2）視網(wǎng)膜電圖（ERG）:將大鼠用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳后置于暗室中暗適應(yīng)30min，然后在暗室環(huán)境下用7%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，麻醉效果滿意后將大鼠置于特制的固定架上，將固定架放于Ganzfeld全視野刺激器窗口邊緣行ERG檢查。弱紅光下安置電極，參考電極夾置雙耳，地電極夾置后囟處（此兩處使用導(dǎo)電糊提高電極接觸率及導(dǎo)電性能），作用電極懸掛于雙眼下瞼，并確認(rèn)其與角鞏膜緣密切接觸。微調(diào)各電極接觸部位，待操作顯示器上電阻數(shù)值顯示≤10kohm后啟動(dòng)檢查程序。記錄程序參考2008年國際臨床視覺電生理學(xué)會(huì)建議的新標(biāo)準(zhǔn)六項(xiàng)［3］。（3）閃光視覺誘發(fā)電位（F-VEP）:本操作順延ERG檢查，調(diào)整支架使大鼠右眼正對(duì)Ganzfeld全視野刺激器窗口，左眼遮蓋。作用電極夾置后囟處，參考電極夾置兩眼連線中點(diǎn)處；接地電極夾置在右耳（此三處使用導(dǎo)電糊提高電極接觸率及導(dǎo)電性能）。微調(diào)各電極接觸部位，待操作顯示器上電阻數(shù)值顯示≤10kohm后啟動(dòng)檢查程序。記錄:1.4Hz下N1-3、P1-3的峰時(shí)及N1-P1、N2-P2、N3-P3的振幅；11Hz下 N1、P1的峰值及N1-P1的振幅。左眼同法檢查。（4）眼底熒光血管造影（FFA）:本操作順延F-VEP檢查，白內(nèi)障大鼠放棄此檢查。F-VEP檢查完成后一人手持大鼠將其右眼放于同步共焦激光眼底熒光造影儀鏡頭前方，用拇指示指分開大鼠右眼眼瞼確保瞳孔充分暴露。另一人操作同步共焦激光眼底熒光造影儀，微調(diào)操縱桿調(diào)整鏡頭方位直至看到眼底調(diào)整焦距使眼底組織結(jié)構(gòu)清晰顯示，按下相機(jī)快門拍3～5張眼底像保存?zhèn)溆谩Ｍz查左眼。拍完眼底像后將大鼠平放于操作臺(tái)經(jīng)尾靜脈注射100g/L的熒光素鈉注射液（注射劑量0.05mL/100g），即刻轉(zhuǎn)換FFA模式行FFA檢查，方法同前所述。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，各組計(jì)量數(shù)據(jù)均以±s表示，多組間樣本均數(shù)的比較采用重復(fù)測量的雙因素方差分析，組間進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t法，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠空腹血糖值的比較（±s，mmol/L）

表1　不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠空腹血糖值的比較（±s，mmol/L）

注:aP＜0.05 vs同時(shí)間BC組；cP＜0.05 vs同時(shí)間DM組。

分組n（只）0wk2wk4wk6wk8wk10wk12wk BC組204.14±0.865.17±0.685.45±1.355.45±0.815.36±0.624.88±0.665.14±0.91 DM組174.52±0.796.30±2.00a9.58±1.52a16.19±4.49a22.15±1.78a25.65±2.11a29.17±2.00aL組174.11±0.735.88±0.83a，c9.13±0.97a，c14.17±3.15a，c19.58±1.04a，c21.84±1.89a，c27.13±2.39a，cM組174.05±0.825.74±0.74a，c8.97±0.72a，c13.45±2.66a，c16.73±1.84a，c20.87±1.81a，c23.85±2.23a，cH組174.55±0.835.51±0.83a，c8.67±0.92a，c10.83±2.02a，c13.78±2.77a，c18.29±1.83a，c20.59±2.50a，c

2　結(jié)果

2.1一般情況觀察 BC組大鼠活潑好動(dòng)，反應(yīng)敏捷，形體勻稱，毛發(fā)健康有光澤，角膜透明，屈光質(zhì)清晰無異常。DM組大鼠造模成功3d后可見典型的多食、多飲、多尿和體重減輕的“三多一少”癥狀；隨著高血糖狀態(tài)的持續(xù)穩(wěn)定，DM組大鼠消瘦癥狀逐漸明顯，并且毛色漸枯、發(fā)黃、精神萎靡。

2.2各組大鼠血糖變化 造模后隨著時(shí)間延長，BC組血糖穩(wěn)定，DM組、L組、M組與H組血糖呈上升趨勢，但隨著用藥劑量的加大，L組、M組和H組與DM組相比血糖上升趨勢逐漸減緩（表1）。雙因素分析結(jié)果顯示:不同處理組之間比較F=5.764，P=0.001，不同時(shí)間比較F= 156.792，P=0.000。不同時(shí)間及不同處理組間FBG值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3各組大鼠眼前節(jié)檢查情況 造模成功后第2、4、6、8、10、12wk行眼前節(jié)照相檢查可發(fā)現(xiàn):BC組大鼠未出現(xiàn)白內(nèi)障。DM組大鼠第6wk出現(xiàn)1只大鼠雙眼白內(nèi)障；第8wk新發(fā)2只大鼠雙眼白內(nèi)障，第10～12wk新發(fā)2只大鼠雙眼白內(nèi)障。L組大鼠第8wk出現(xiàn)2只大鼠單眼白內(nèi)障，第8～12wk出現(xiàn)1只大鼠雙眼白內(nèi)障。M組大鼠第10wk出現(xiàn)1只大鼠雙眼白內(nèi)障。H組大鼠第12wk出現(xiàn)2只大鼠單眼白內(nèi)障。根據(jù)發(fā)病時(shí)間點(diǎn)及發(fā)病率分析，DM組最先出現(xiàn)并發(fā)性白內(nèi)障，且發(fā)病率最高，隨著用藥劑量的增加，發(fā)病時(shí)間及發(fā)病率呈現(xiàn)延后及降低趨勢?；鞚釓浬⒂诤思捌べ|(zhì)，由部分混濁發(fā)展為完全混濁，開始時(shí)在前后囊下出現(xiàn)典型的白點(diǎn)狀或雪片狀混濁，迅速擴(kuò)展為完全性白內(nèi)障，以后囊下極部多見（圖1）。

圖1　不同組大鼠前節(jié)照相檢查結(jié)果 ①:BC組；②:DM組；③:L組；④:M組；⑤:H組；A:2wk；B:4wk；C:6wk；D:8wk；E:10wk；F:12wk。

2.4各組大鼠視網(wǎng)膜電圖檢查結(jié)果 五組間a波波幅差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而DM組b波波幅顯著降低，與BC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），H組與BC組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而與DM組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；M組和L組情況介于DM組與H組之間。DM組a波、b波潛時(shí)明顯延長，與BC組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），H組a波、b波潛時(shí)略有延長，與BC組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），而與DM組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；M組和L組情況介于DM組與H組之間（表2）。

b值雙因素分析結(jié)果顯示:不同處理組之間比較F= 1.734，P=0.158，不同時(shí)間比較F=6.719，P=0.004。不同時(shí)間b值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。b-w值雙因素分析結(jié)果顯示:不同處理組之間比較F=5.518，P=0.001，不同時(shí)間比較F=3.359，P=0.040，不同處理組和不同時(shí)間b-w值的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P2值雙因素分析結(jié)果顯示:不同處理組之間比較F=0.617，P=0.653，不同時(shí)間比較F=0.033，P=0.967，不同處理組和不同時(shí)間P2值的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。OS2值雙因素分析結(jié)果顯示:不同處理組之間比較F=3.042，P=0.025，不同時(shí)間比較F=14. 782，P=0.000。不同處理組和不同時(shí)間OS2值的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.5各組大鼠視覺誘發(fā)電位檢查情況 DM組VEP峰值期為134.80±7.54ms，與BC組VEP峰值期（105.70± 20.40ms）比較明顯延長（P＜0.05）。H組VEP峰值期為120.80±16.31ms，與BC組VEP峰值期（105.70± 20.40ms）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），M、L組情況介于DM組與H組之間。DM組波幅為3.22±0.51μV，與BC組（4.01±0.96μV）比較明顯降低（P＜0.05）。H組波幅為3.66±1.26μV，與BC組（4.01±0.96μV）比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），M、L組情況介于DM組與H組之間（表3）。

P2雙因素分析結(jié)果顯示:不同處理組之間比較F= 5.918，P=0.001，不同時(shí)間比較F=11.647，P=0.000，不同處理組和不同時(shí)間P2值的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。雙因素分析結(jié)果顯示:N2-P2不同處理組之間比較F=3.185，P=0.024，不同時(shí)間比較F=1.370，P=0.258，不同處理組間N2-P2值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.6各組大鼠眼底熒光血管造影檢查情況 BC組大鼠彩色眼底像顯示，視盤位于眼球后部中央，沿著視盤發(fā)出6～8只細(xì)且直的動(dòng)脈，伴行6～8只較粗的視網(wǎng)膜靜脈，未見黃斑樣結(jié)構(gòu)，無滲出和出血。經(jīng)尾靜脈注射熒光素鈉后可見視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈，稀疏的小動(dòng)脈分支形成的淺層毛細(xì)血管網(wǎng)，小靜脈匯集成的視網(wǎng)膜靜脈，與動(dòng)脈相間排列，視網(wǎng)膜小血管最小到4級(jí)血管均可顯像。DM組大鼠檢查結(jié)果顯示，彌散性毛細(xì)血管紆曲擴(kuò)張，熒光滲漏，視網(wǎng)膜血管1～3級(jí)病變表現(xiàn)均存在。L、M、H組大鼠檢查結(jié)果與DM組相似，但病變程度逐漸減輕（圖2）。

表2　各組大鼠全視野閃光ERG b波的峰時(shí)及振幅和OPs2峰時(shí)及振幅變化±s

表2　各組大鼠全視野閃光ERG b波的峰時(shí)及振幅和OPs2峰時(shí)及振幅變化±s

注:aP＜0.05 vs同時(shí)間BC組；cP＜0.05 vs同時(shí)間DM組。

時(shí)間點(diǎn)分組眼數(shù)b（ms）nb-w（μV）眼數(shù)P2（ms）眼數(shù)OS2（μV）4wkBC組1276.67±6.881271.95±5.101224.83±2.251226.55±4.30 DM組1280.91±4.441267.04±6.851225.00±2.301223.99±3.60 L組1180.64±3.721263.53±5.18a1224.08±1.981224.37±3.65 M組1277.67±5.661268.33±7.661224.25±1.861224.80±4.50 H組1179.90±5.131267.33±8.421224.33±3.021125.20±4.52 8wkBC組1276.25±5.191171.38±9.42c1220.00±2.221226.39±6.25 DM組1079.20±4.61957.64±7.83a1224.16±2.411122.20±5.19 L組1178.00±4.901161.20±8.72a1224.08±1.981222.26±6.75 M組1277.67±5.661064.33±8.301224.75±2.381224.15±8.86 H組1177.18±3.371164.12±6.58a，c1224.33±2.391225.47±4.46 12wkBC組1273.83±9.711066.77±7.80a，c1224.58±2.111125.05±3.47 DM組1078.90±7.49961.41±11.90a，c1124.91±1.701015.74±4.19aL組1274.25±6.861258.28±9.05a1224.00±1.811218.71±5.02a，cM組1275.50±6.491062.82±8.04a，c1224.75±1.711221.64±6.43a，cH組1275.42±7.621170.57±10.89a，c1224.83±1.531220.63±5.85a，cF 0.5940.0390.7400.002 0.7032.7490.4954.763 P

表3　各組大鼠閃光VEP P2波的峰時(shí)及振幅變化±s

表3　各組大鼠閃光VEP P2波的峰時(shí)及振幅變化±s

aP＜0.05 vs同時(shí)間BC組比較；cP＜0.05 vs同時(shí)間DM組。

分組4wk P2（ms）N2-P2（μV）8wk P2（ms）N2-P2（μV）12wk P2（ms）N2-P2（μV）BC組103.41±3.404.51±0.63a101.25±11.064.25±0.79c105.70±20.40a4.01±0.96 DM組109.00±10.823.75±0.52c117.44±16.083.36±0.60a，c134.80±7.54c3.22±0.51 L組110.00±12.463.98±0.76a，c117.75±18.903.14±0.69a133.33±7.10c3.70±1.08 M組109.18±9.793.65±0.65c116.90±12.403.39±0.91a，c121.00±21.69a，c3.77±2.14 H組109.36±12.314.05±0.34a，c117.91±15.274.21±0.88c120.80±16.31a，c3.66±1.26 F P 0.6280.0170.10.0050.0030.734 0.6523.3212.0764.3344.6850.502

3　討論

糖尿病病情控制不好甚至完全失控時(shí)會(huì)引起微血管（失明、腎部病變和神經(jīng)病變）和大血管（心血管病變和中風(fēng)）的并發(fā)癥［4］。由白內(nèi)障引起的失明是糖尿病的一種重要的長期并發(fā)癥。白內(nèi)障，以云狀或混濁的晶狀體為特征，是糖尿病的一個(gè)早期并發(fā)癥，并且是全世界首要的致盲原因，而且在發(fā)展中國家更是如此［5］，其多為雙眼發(fā)病，而且發(fā)展迅速，可于數(shù)月、數(shù)周甚至數(shù)天內(nèi)發(fā)展為完全混濁。

糖尿病性視網(wǎng)膜病變也是糖尿病最重要的致盲的并發(fā)癥之一，臨床上根據(jù)是否出現(xiàn)視網(wǎng)膜新生血管為標(biāo)志，將沒有視網(wǎng)膜新生血管形成的糖尿病性視網(wǎng)膜病變稱為非增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變（NPDR），而將有視網(wǎng)膜新生血管形成的糖尿病性視網(wǎng)膜病變稱為增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變［6］。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，DR發(fā)病的危險(xiǎn)因素包括遺傳因素、高血壓因素、高血脂因素、眼部因素，且和糖尿病病程長短有著密切的關(guān)系［7］，關(guān)于DR的發(fā)病機(jī)制的研究有多元醇通路、炎癥-免疫機(jī)制、基因多態(tài)性、氧化應(yīng)激和蛋白激酶C的活化等，目前認(rèn)為該病很有可能是多種因素交叉反應(yīng)的結(jié)果［8］。而在DR的治療研究當(dāng)中，中醫(yī)中藥療法是一個(gè)重要的發(fā)展方向。中藥黃精多糖性溫、價(jià)格便宜、藥效顯著、不良反應(yīng)少，具有較大潛在應(yīng)用市場。黃精多糖具有多種藥理作用，可降脂、降血糖、抗病毒、抗感染、增強(qiáng)記憶力和免疫力等［9］；另外還具有抗氧化、抗自由基損傷的作用。有研究證實(shí)PSP可以提高血C肽和胰島素水平，改善SOD和MDA水平，通過調(diào)節(jié)糖代謝并且抑制微血管新生而達(dá)到保護(hù)作用［10］。

在本實(shí)驗(yàn)中，通過一次性注射STZ建立糖尿病大鼠模型，并灌胃給予不同劑量的PSP，以期判定藥物降糖和眼保護(hù)作用療效分析。觀察糖尿病眼部病變需進(jìn)行眼部檢查，主要包括裂隙燈前節(jié)檢查、熒光素眼底血管造影、視網(wǎng)膜電圖及視覺誘發(fā)電位等項(xiàng)目，以便及時(shí)了解糖尿病視網(wǎng)膜病變的嚴(yán)重程度及視網(wǎng)膜功能。ERG電生理信號(hào)的解剖學(xué)基礎(chǔ):a波主要針對(duì)光感受器，b波代表雙極細(xì)胞和Müller細(xì)胞的功能［11］；Ops波代表無長突細(xì)胞。通常采用a波和b波變化用于評(píng)定視網(wǎng)膜功能。DR的微循環(huán)改變往往較早影響到此層，因而有學(xué)者報(bào)道當(dāng)F-ERG a、b波尚正常時(shí)已有OPs的缺失或明顯降低［12］。Ops可觀察視網(wǎng)膜供血狀況［13］，OPs總振幅是目前判斷早期DR最敏感的指標(biāo)，它不僅能早期發(fā)現(xiàn)病變，還能反映視網(wǎng)膜的進(jìn)行性損害［14］。Ops總波振幅越低，DR病情越重［15］。其子波OPs2、OPs3的波幅與DR的嚴(yán)重程度有著明顯相關(guān)性，即振幅越小，DR越重。本次實(shí)驗(yàn)以O(shè)Ps2振幅作為檢測指標(biāo)進(jìn)行分析，我們發(fā)現(xiàn)BC組與DM、L組組間有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，DM組與M、H組組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與報(bào)道的其他相關(guān)研究結(jié)果相吻合［16］。VEP主要用于判斷視神經(jīng)功能狀態(tài)和視覺傳導(dǎo)通路功能變化，波幅常反應(yīng)參加反應(yīng)細(xì)胞多少。如果某一水平發(fā)生病變或功能障礙時(shí)，誘發(fā)電位的相應(yīng)部分就會(huì)出現(xiàn)潛伏期、波幅及波形的改變，F(xiàn)VEP異常提示視網(wǎng)膜至視皮層之間的病變，異常程度與視功能障礙程度相一致［17］。FFA評(píng)定眼底病的病理狀態(tài)和治療效果直接而客觀［18］。目前國內(nèi)針對(duì)大鼠FFA檢查多使用Heidelberg眼底血管造影設(shè)備，并通過大鼠尾靜脈注射造影劑達(dá)到實(shí)質(zhì)性效果［19］。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠清晰地觀察到各組大鼠眼底血管改變。

在實(shí)驗(yàn)中我們通過控制動(dòng)物麻醉深度、固定電極放置、調(diào)節(jié)室內(nèi)溫度、環(huán)境照度等一系列措施，使實(shí)驗(yàn)中的各種客觀因素的影響降到最小，而使電生理指標(biāo)最大限度地反映動(dòng)物視神經(jīng)系統(tǒng)的機(jī)能狀態(tài)。雖然經(jīng)證實(shí)將這四種檢查方法用于大鼠檢查是可行的，但實(shí)際操作過程中并不容易，需要注意的細(xì)節(jié)非常多，很多關(guān)鍵環(huán)節(jié)比如電極片的安放、麻醉時(shí)間和程度的把握等都需要控制到比較理想的狀態(tài)操作才能順利進(jìn)行。如何找到可行的辦法將其用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并得出可信的結(jié)果，是我們這次實(shí)驗(yàn)的主要目的。

綜上所述，PSP既能有效降低糖尿病大鼠的血糖水平，又能延緩糖尿病大鼠眼部并發(fā)癥的進(jìn)程，可以對(duì)眼部病變起到明顯的治療作用。其機(jī)制有可能為通過抑制糖基化終產(chǎn)物，改善糖脂質(zhì)代謝，提高糖耐量而對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)揮保護(hù)作用。

圖2　各組大鼠FFA檢查結(jié)果 ①:BC組；②:DM組；③:L組；④:M組；⑤:H組；A:2wk；B:4wk；C:6wk；D:8wk；E:10wk；F:12wk。

1 Santiago JG，Walia S，Sun JK，et al.Influence of diabetes and diabetes type on anatomic and visual outcomes following central rein vein occlusion.Eye（Lond）2014；28（3）:259-268

2 Bamashmus MA，Gunaid AA，Khandekar RB.Diabetic retinopathy，visual impairment and ocular status among patients with diabetes mellitus in Yemen:a hospital-based study.Indian J Ophthalmol 2009；57（4）: 293-298

3 Hood DC，Bach M，Brigell M，et al.ISCEV guidelines for clinical multifocal electroretinography（2007 edition）.Doc Ophthalmol 2008；116（1）:1-11

4 Michael J，F(xiàn)owler MD.Microvascular and macrovascular complications of diabetes.Clin Diabetes 2008；26（3）:77-82

5 Thangaraju P，Chakrabarti A，Banerjee D，et al.Dual blockade of Renin Angiotensin system in reducing the early changes of diabetic retinopathy and nephropathy in a diabetic rat model.N Am J Med Sci 2014；6（12）:625-632

6 Shao Q，Heussen FM，Ouyang Y，et al.Retinal vessel diameter changes in different severities of diabetic retinopathy by SD-OCT.Eur J Ophthalmol 2015［Epub ahead of print］

7 Frozza RL，Bernardi A，Hoppe JB，et al.Neuroprotective effects of resveratrol against Aβ administration in rats are improved by lipid-core nanocapsules.Mol Neurobiol 2013；47（3）:1066-1080

8 Zhong S，Ma S，Hong Z，et al.Antiinflammation effect of danggui shaoyao san on Alzheimer's diseases.China Journal of Chinese Materia Medica 2011；36（22）:3155-3160

9 Yi Y，Wu S，Ye M，et al.Effect of Aβ1-42 injection on hippocampus cells in rats and protective role of polygona-polysaccharosefor Alzheimer's disease.Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban 2014；39（4）:344-348

10 Gong H，Li W，Yin Y，et al.Hypoglycemic activity and mechanism of Polygona-polysaccharide on diabetic rat model.Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 2009；34（9）:1149-1154

11 Ilmarinen T，Hiidenmaa H，K??bi P，et al.Ultrathin Polyimide Membrane as Cell Carrier for Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell Derived Retinal Pigment Epithelium.PLoS One 2015；10（1）:e0143669

12 Park YG，Kang S，Brinkmann R，et al.A Comparative Study of Retinal Function in Rabbits after Panretinal Selective Retina Therapy versus Conventional Panretinal Photocoagulation.J Ophthalmol 2015；2015（2）:247-259

13 Porciatti V.Electrophysiological assessment of retinal ganglion cell function.Porciatti V.Exp Eye Res 2015；141（3）:164-170

14 Carozzo S，Ball SL，Narici L，et al.Interaction of（12）C ions with the mouse retinal response to light.Neurosci Lett 2015；598（3）:36-40

15 Post M，Goslawski W，Modrzejewska M，et al.Electrophysiological function of the retina and optic nerve in patients with atrial fibrillation. Doc Ophthalmol 2015；131（1）:53-62

16 Pardue MT，Barnes CS，Kim MK，et al.Rodent Hyperglycemia-Induced Inner Retinal Deficits are Mirrored in Human Diabetes.Transl Vis Sci Technol 2014；3（3）:6

17 Méndez-Balbuena I，Huidobro N，Silva M，et al.Effect of mechanical tactile noise on amplitude of visual evoked potentials: multisensory stochastic resonance.J Neurophysiol 2015；114（4）:2132-2143

18 Soltanipour A，Sadri S，Rabbani H，et al.Analysis of Fundus Fluorescein Angiogram Based on the Hessian Matrix of Directional Curvelet Sub-bands and Distance Regularized Level Set Evolution.J Med Signals Sens 2015；5（3）:141-155

19 Wigg JP，Zhang H，Yang D.A Quantitative and Standardized Method for the Evaluation of Choroidal Neovascularization Using Micron III Fluorescein Angiograms in Rats.PLoS One 2015；10（5）:e0128418

Observation on the protective effect of polygonatum polysaccharide for eyes in streptozotocin induced diabetic rats

Yi Wang1，Guo-Qing Peng2，Di Chen1，Chao Han1，Chun-Run Miao3，Chao Su4，Bao-Jin Lu3，Shan-Long Feng4

Science and Technology Development Plan Project of Tai'an（No.2015NS1119）

2015-11-28 Accepted:2016-02-24

polygona-polysaccharose；streptozotocin；diabetes rat；diabetic retinopathy；ocular

泰安市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.2015NS1119）

（271000）中國山東省泰安市，泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1眼科；3急診科；4普外科；2（271000）中國山東省泰安市，泰安市中心醫(yī)院骨科

王藝，男，在讀博士研究生，主治醫(yī)師，講師，研究方向:糖尿病視網(wǎng)膜病變。

王藝.346048368@qq.com

2015-11-28

2016-02-24

Wang Y，Peng GQ，Chen D，et al.Observation on the protectiveeffectofpolygonatumpolysaccharideforeyesin streptozotocin induced diabetic rats.Guoji Yanke Zazhi（Int Eye Sci）2016；16（3）:428-434

10.3980/j.issn.1672-5123.2016.3.06引用：王藝，彭國慶，陳迪，等.PSP對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠眼保護(hù)作用的臨床動(dòng)態(tài)觀察.國際眼科雜志2016；16（3）:428-434