侯冬巖，刁全平，李鐵純，回瑞華，袁華芳

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

?

生普洱茶與熟普洱茶中咖啡因含量的HPLC分析

侯冬巖，刁全平，李鐵純，回瑞華，袁華芳

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

采用高效液相色譜法對(duì)生普洱與熟普洱茶中咖啡因的含量進(jìn)行測(cè)定.色譜柱為Kromasil C18；流動(dòng)相：水-甲醇-乙酸-二甲基酰胺(70∶30∶0.05∶0.25，V/V)；色譜柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；掃描波長：210～400 nm；檢測(cè)波長：274 nm.方法變異系數(shù)小于3.96%，回收率為90.62%～103.8%.生普洱茶和熟普洱茶咖啡因含量分別為19.92 mg/g 和28.58 mg/g.

生普洱茶；熟普洱茶；咖啡因

普洱茶，又名滇青茶，因原運(yùn)銷集散地在普洱市，故名普洱茶.普洱茶以云南大葉種曬青茶為原料，由發(fā)酵不同分為生普洱茶和熟普洱茶兩種.生普洱茶是指用云南大葉種曬青毛茶為原料，以自然的方式陳放，不經(jīng)過人工“發(fā)酵”“渥堆”處理.熟普洱茶是曬青毛茶經(jīng)人工快速后熟發(fā)酵，“灑水”“渥堆”工序處理.

研究表明，飲用普洱茶具有降脂、改善胰島素抗拒及預(yù)防心血管疾病，可預(yù)防動(dòng)脈粥狀硬化及心血管疾病的發(fā)生.普洱茶具有明顯的抗氧化活性、清除自由基、殺死癌細(xì)胞作用，普洱茶還具有多種豐富的維生素，如胡蘿卜素、維生素B1、維生素B2、 維生素C、維生素E等[1,2].實(shí)驗(yàn)表明，普洱茶含有對(duì)人體有很多積極作用的咖啡堿，而對(duì)普洱茶中咖啡堿的研究少見報(bào)道.本文采用高效液相色譜法對(duì)生普洱與熟普洱茶中咖啡因的含量進(jìn)行測(cè)定，為進(jìn)一步開發(fā)利用普洱茶提供科學(xué)參考.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Waters 1525-2996-tcm 液相色譜儀(美國Waters公司)；KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)；色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)(迪馬公司).

咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品檢定所.

甲醇、乙酸、二甲基甲酰胺(均為色譜純)；氧化鎂(分析純)；二次蒸餾水.

1.2 實(shí)驗(yàn)樣品

樣品：生普洱茶和熟普洱茶，均產(chǎn)于云南.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理 將樣品用粉碎機(jī)粉碎，過0.45 mm的篩子.精確稱取樣品1.0 g于50 mL的燒杯中，加入0.5 g氧化鎂，再加入30 mL二次水，在沸水浴中浸提20 min，每隔5 min振蕩一次，然后立即減壓過濾，濾液冷卻至室溫后移入50 mL的容量瓶中，用二次蒸餾水定容到50 mL.從其中移取10 mL，超聲脫氣5 min后，再通過0.45 μm的混纖維孔濾膜過濾，棄去最初的5 mL，保留后5 mL[3,4]，待測(cè).

1.3.2 咖啡因標(biāo)樣溶液的配制 精密稱取20 mg咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品于50 mL的小燒杯中，用少量甲醇-水(70∶30，V/V) 溶解后，置于50 mL容量瓶中，加甲醇-水(70∶30，V/V) 稀釋至刻度.1.3.3 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18；流動(dòng)相：水-甲醇-乙酸-二甲基酰胺[5,6](70∶30∶0.05∶0.25，V/V)；色譜柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；掃描波長：210～400 nm；檢測(cè)波長：274 nm.

1.3.4 測(cè)定方法 將茶樣分別按1.3.1處理，按1.3.3色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品測(cè)定3次.

2 結(jié)果與分析

2.1 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品和樣品色譜圖

采用1.3.3 高壓液相色譜條件測(cè)得咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品與樣品的色譜圖如圖1～3所示.

圖1 咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC色譜圖

圖2 生普洱茶的HPLC色譜圖

圖3 熟普洱茶的HPLC色譜圖

由圖1～3可知，可以采用HPLC法對(duì)生普洱茶和熟普洱茶中咖啡因進(jìn)行定量分析.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精確移取1.3.2中的咖啡因標(biāo)樣溶液0.5，0.9，1.3，1.7，2.1，2.5 mL于10 mL的容量瓶中，用甲醇∶水(70∶30，V/V) 定容到10 mL.分別超聲脫氣5 min后，再通過0.45 μm的混纖維孔濾膜過濾.進(jìn)樣量為5 μL，以積分峰面積為橫坐標(biāo)，咖啡因濃度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：

Y=6×10-8X+0.004 4，r =0.999 7.

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精確稱取1.0 g熟普洱茶作為樣品，按照1.3.1的方法處理，配制6個(gè)系列濃度的溶液，每個(gè)濃度溶液測(cè)定9次，計(jì)算該方法的精密度，結(jié)果如表1所示.

表1 方法精密度

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取1.0 g熟普洱茶作為樣品，按照1.3.1的方法處理，配成3個(gè)系列濃度的溶液，分別精確加入咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品的溶液1.0 mL，混合均勻后，超聲脫氣，通過混合纖維膜處理，進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)定該方法的回收率為90.62%～103.8%.

2.5 樣品中咖啡因含量的測(cè)定

按照1.3.1節(jié)的方法處理各樣品，在1.3.3節(jié)的色譜條件下每個(gè)樣品進(jìn)樣3次，求出3次的積分峰面積的平均值，計(jì)算各樣品的咖啡因含量，結(jié)果見表2.

表2 樣品中茶多酚的含量

3 結(jié)論

采用高效液相色譜法測(cè)定了生普洱茶和熟普洱茶樣品的咖啡因含量.該方法的變異系數(shù)小于3.96%，回收率為90.62%～103.8%.

分析結(jié)果表明，生普洱茶和熟普洱茶咖啡因含量分別為19.92 mg/g 和28.58 mg/g.由于生普洱茶和熟普洱茶發(fā)酵處理不同，生普洱茶的原料以自然的方式陳放，不經(jīng)過人工“發(fā)酵”“渥堆”處理，而熟普洱茶的原料由人工快速后熟發(fā)酵，“灑水”“渥堆”工序處理.可見經(jīng)人工“發(fā)酵”“渥堆”處理后，咖啡因的含量增加.

本實(shí)驗(yàn)選用高效液相色譜法測(cè)定普洱茶中咖啡因的含量，該法準(zhǔn)確、靈敏、快速、簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)，可作為普洱茶中咖啡因含量的定量測(cè)定方法.

[1] 易超然,衛(wèi)中慶.咖啡因的藥理作用和應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào),2005,18(3):270-272.

[2] 侯冬巖,回瑞華,李鐵純.黑茶揮發(fā)性化學(xué)成分的研究[J].食品科學(xué),2008,29(8):550-552.

[3] 陳忠平,陳君華,黎少君,等.茶葉中提取咖啡因方法的改進(jìn)[J].安徽技術(shù)師范學(xué)院學(xué)報(bào),2005(1):46-48.

[4] 胡媛,周艷明,劉笑.反相高效液相色譜法測(cè)定茶葉和速溶咖啡中咖啡因的含量[J].福建茶葉生產(chǎn)技術(shù),2006(1):25-26.

[5] 關(guān)崇新,回瑞華,侯冬巖,等.茶葉中咖啡含量的測(cè)定[J].鞍山師范學(xué)院學(xué)報(bào),2001,3(3):45-47.

[6] 胡媛,周艷明,牛森,等.反相高效液相色譜法測(cè)定茶葉和速溶咖啡中咖啡因的含量[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2006(9):52.Analysis of caffeine content in raw puer tea and cooked puer tea by HPLC

(責(zé)任編輯：陳 欣)

HOU Dongyan，DIAO Quanping，LI Tiechun，HUI Ruihua，YUAN Huafang

(School of Chemistry and Life Science,Anshan Normal University,Anshan Liaoning 114007,China)

The content of caffeine in raw and cooked puer tea were determined by HPLC,with Kromasil C18as Column,methanol-water-acetic acid-dimethyl amide (70∶30∶0.05∶0.05,V/V) as mobile phase,25 ℃ as column temperature,274 nm as the detection wavelength,and 5μL as the injection volume.The coefficient of variation in this paper is less than 3.96%,and the recovery is 90.62%～90.62%.The content of caffeine in raw and cooked puer tea were 19.92 mg/g and 28.58 mg/g respectively.

raw puer tea;cooked puer tea;caffeine

2016-05-16

遼寧省教育廳科學(xué)技術(shù)基金資助課題(20331079).

侯冬巖(1962-)，男，吉林省吉林市人，鞍山師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院教授，主要從事天然功能食品科學(xué)研究.

O657．3

A

1008-2441(2016)04-0021-03