張鵬

（青海大學(xué)附屬醫(yī)院介入科，青海 西寧 810000）

論著

氬氦刀治療對(duì)肝癌患者癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響

張鵬

（青海大學(xué)附屬醫(yī)院介入科，青海 西寧 810000）

目的分析氬氦刀治療對(duì)肝癌患者癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響。方法選取2013年7月-2014年7月于該院接受治療的肝癌患者88例作為研究對(duì)象。按照隨機(jī)數(shù)字表法將所有入組患者分為觀察組及對(duì)照組各44例，對(duì)照組患者接受單純肝動(dòng)脈化療栓塞（TACE）治療，觀察組患者接受TACE聯(lián)合氬氦刀治療。比較兩組患者的治療后血清血管新生相關(guān)指標(biāo)、侵襲相關(guān)指標(biāo)、腫瘤預(yù)后相關(guān)指標(biāo)等水平差異。結(jié)果觀察組患者的治療后血清內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、缺氧誘導(dǎo)因子-α（HIF-1α）、層黏連蛋白（Lam）水平值低于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組患者接受治療后的血清細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）、內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1（ESM-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（MMP-13）、尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）水平均低于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組患者的治療后甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、a-L-巖藻糖苷酶（AFU）、可溶性B7-H3（sB7-H3）水平低于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論肝癌患者接受氬氦刀治療，可以降低腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，有助于治療效果的實(shí)現(xiàn)以治療預(yù)后的改善，具有積極的臨床意義。

肝癌；氬氦刀；惡性生物學(xué)行為

原發(fā)性肝癌是臨床最常見(jiàn)、惡性程度最高的腫瘤之一，對(duì)于無(wú)法接受手術(shù)治療的患者肝動(dòng)脈化療栓塞（transarterial chemoembolization，TACE）是首選方式。隨著TACE的應(yīng)用增多，逐漸發(fā)現(xiàn)其無(wú)法阻斷

所有腫瘤血供、腫瘤細(xì)胞壞死不完全，術(shù)后早期的復(fù)發(fā)率較高，多需要進(jìn)行反復(fù)手術(shù)治療，對(duì)患者免疫功能及肝功能均造成沖擊[1]。氬氦刀靶向冷凍消融治療在近年獲得迅速發(fā)展，主要通過(guò)理化效應(yīng)破壞肝癌細(xì)胞及供血血管，進(jìn)一步引起相應(yīng)組織細(xì)胞的壞死，達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞的目的。氬氦刀創(chuàng)傷小、療效肯定，據(jù)目前研究顯示治療有效率達(dá)90%以上，是腫瘤又一有效的輔助治療手段[2]。目前，有較多學(xué)者推薦將TACE與氬氦刀靶向冷凍消融治療組合成新的肝癌治療方案，擴(kuò)大腫瘤殺滅效果、優(yōu)化肝癌的治療有效性。本次研究主要分析氬氦刀治療對(duì)肝癌患者癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年7月-2014年7月于青海大學(xué)附屬醫(yī)院接受治療的肝癌患者88例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)細(xì)胞學(xué)或者病理確診為肝癌；②因腫瘤侵犯肺血管無(wú)法切除、患者拒絕手術(shù)治療、年齡較大等不適宜進(jìn)行手術(shù)的患者；③治療前1周未接受放化療及分子靶向治療；④預(yù)計(jì)生存時(shí)間不短于3個(gè)月；⑤不伴妊娠、哺乳，急慢性感染性疾?。虎薏话橛芯癞惓?、無(wú)精神病史。

按照隨機(jī)數(shù)表法將所有入組患者分為觀察組及對(duì)照組各44例，兩組患者的性別、年齡、腫瘤直徑等基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組肝癌患者的基線資料比較（n=44，±s）

表1 兩組肝癌患者的基線資料比較（n=44，±s）

組別男/女/例年齡/歲腫瘤直徑/cm觀察組24/2062.18±7.053.81±0.41對(duì)照組23/2161.76±7.223.76±0.37 t/χ2值0.310.290.16 P值0.3710.4280.572

1.2 治療方法

對(duì)照組患者接受TACE治療，具體如下：改良Seldinger法經(jīng)股動(dòng)脈穿刺，經(jīng)腹腔動(dòng)脈及腸系膜上動(dòng)脈造影、了解腫瘤血供，采用微導(dǎo)管超選到腫瘤供血?jiǎng)用}。經(jīng)導(dǎo)管緩慢注入化療混合藥物（FUDR750～1 000 mg，奧沙利鉑100～150 mg，吡柔比星10～20 mg），其后采用吡柔比星及超液態(tài)碘化油、在DSA透視下對(duì)供血?jiǎng)用}進(jìn)行栓塞（吡柔比星10～20 mg+超液態(tài)碘化油10～20 ml充分乳化），對(duì)于血供豐富難以栓塞者可以加用350～560μm明膠海綿栓塞，間隔4～6周后進(jìn)行再次TACE術(shù)治療。

觀察組患者接受TACE聯(lián)合氬氦刀治療，先T ACE治療，后氬氦刀冷凍消融治療，TACE方法同對(duì)照組，氬氦刀治療方法如下：所有患者均經(jīng)計(jì)算機(jī)體層攝影（computed tomography，CT）引導(dǎo)下治療，采用利多卡因局部浸潤(rùn)麻醉后，按照手術(shù)需要擺放患者體位。根據(jù)患者腫瘤大小選擇不同規(guī)格的冷凍消融刀，術(shù)前CT掃描以確定進(jìn)針點(diǎn)、進(jìn)針?lè)较?。常?guī)消毒鋪巾后切開(kāi)預(yù)定穿刺點(diǎn)的皮膚，冷凍消融刀穿刺至預(yù)定的腫瘤部位，開(kāi)啟冷凍主機(jī)并引入氬氣冷媒，刀尖區(qū)域降溫至-140℃以下，持續(xù)時(shí)間10～15 min（根據(jù)腫瘤大小合理調(diào)整冷凍消融的持續(xù)時(shí)間）。冷凍消融期間持續(xù)進(jìn)行CT掃描監(jiān)測(cè)，理想的冰球范圍為超過(guò)腫瘤邊緣。關(guān)閉氬氣后引入氦氣熱媒，復(fù)溫至20℃～30℃，重復(fù)冷熱循環(huán)，最后拔除氬氦刀并布局包扎。術(shù)后注意進(jìn)行心電圖、血壓、血氧飽和度等基本生命體征監(jiān)護(hù)。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 血管新生相關(guān)指標(biāo)治療后3周，抽取患者空腹外周靜脈血5 ml，高速離心后取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定其中血管新生相關(guān)指標(biāo)水平，包括內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及缺氧誘導(dǎo)因子-α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）、Ⅳ型膠原纖維（collagenⅣ，CollⅣ）、層黏連蛋白（Laminin，Lam）。

1.3.2 侵襲相關(guān)指標(biāo)治療后3周，抽取患者空腹外周靜脈血5 ml，高速離心后取血清，采用ELISA測(cè)定其中侵襲相關(guān)指標(biāo)水平，包括細(xì)胞間黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）、內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1（endothelialcellspecific molecule-1，ESM-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）、尿激酶型纖溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator，uPA）。

1.3.3 腫瘤預(yù)后相關(guān)指標(biāo)治療后3周，采用ELISA法測(cè)定患者血清中腫瘤活性相關(guān)指標(biāo)，具體包括甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、癌胚抗原（Carcinoembryonicantigen，CEA）、a-L-巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）、可溶性B7-H3（soluble B7-3 molecule，sB7-H3）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

選用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血管新生相關(guān)指標(biāo)

治療前兩組患者的血清血管新生相關(guān)指標(biāo)水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），觀察組患者的治療后血清VEGF、HIF-1α、Lam水平值低于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

2.2 侵襲相關(guān)指標(biāo)

治療前兩組患者的血清侵襲相關(guān)指標(biāo)水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），觀察組患者接受治療后的血清ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA水平均低于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

2.3 腫瘤預(yù)后相關(guān)指標(biāo)

觀察組患者的治療后AFP、CEA、AFU、sB7-H3水平低于對(duì)照組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表2 兩組患者的治療前后血清血管新生相關(guān)指標(biāo)值比較（n=44，±s）

表2 兩組患者的治療前后血清血管新生相關(guān)指標(biāo)值比較（n=44，±s）

組別VEGF/（pg/ml）HIF-1α/（ng/L）CollⅣ/（pg/ml）Lam/（ng/ml）治療前治療前治療前治療前治療后觀察組2194.73±264.92734.56±80.47112.84±16.7247.26±6.33672.18±73.66113.72±10.67316.25±40.3753.18±4.88對(duì)照組2231.64±283.61 1063.27±105.61119.52±19.6266.42±7.47683.62±70.59316.09±34.28309.62±45.17114.67±10.81 t值0.537.380.398.270.428.380.369.63 P值0.4320.0190.4730.0150.4030.0130.4930.011治療后治療后治療后

表3 組患者的治療前后血清侵襲相關(guān)指標(biāo)值比較（n=44，±s）

表3 組患者的治療前后血清侵襲相關(guān)指標(biāo)值比較（n=44，±s）

組別ICAM-1/（ng/ml）ESM-1/（ng/ml）MMP-13/（ng/ml）uPA/（μg/ml）治療前治療前治療前治療前治療后觀察組18.35±2.736.38±0.7421.73±2.647.39±0.85264.36±30.5193.73±9.524.73±0.511.17±0.21對(duì)照組19.17±2.9313.15±2.5317.15±2.5912.76±1.42271.84±34.21173.25±20.184.89±0.621.92±0.26 t值0.266.480.325.890.478.290.175.83 P值0.3920.0230.3510.0320.2630.0170.4630.041治療后治療后治療后

表4 兩組患者的治療后血清腫瘤預(yù)后相關(guān)指標(biāo)值比較（n=44，±s）

表4 兩組患者的治療后血清腫瘤預(yù)后相關(guān)指標(biāo)值比較（n=44，±s）

組別AFP/（μg/L）CEA/（μg/L）觀察組105.33±13.856.33±0.74對(duì)照組245.18±28.3714.27±2.83 t值8.239.16 P值0.0100.007 AFU/（u/L）sB7-H3/（ng/L）57.32±4.9163.92±5.88 92.61±7.88113.71±8.04 7.349.48 0.0150.004

3 討論

原發(fā)性肝癌是臨床腫瘤惡性程度排名前3位的疾病，5年生存率較低，由于肝臟代償能力強(qiáng)、早期不表現(xiàn)出明顯軀體不適，多數(shù)患者至臨床確診時(shí)已經(jīng)到達(dá)中晚期。因此保守治療是治療肝癌的最主要方式，對(duì)于錯(cuò)失腫瘤手術(shù)切除時(shí)機(jī)的患者，目前臨床治療首選TACE。TACE通過(guò)將導(dǎo)管選擇性的插入腫瘤供血?jiǎng)用}中并注入栓塞劑，達(dá)到閉塞腫瘤供血?jiǎng)用}、阻斷腫瘤細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)的作用，最終實(shí)現(xiàn)腫瘤組織缺血壞死的目的。TACE治療后短期內(nèi)可以迅速縮小腫瘤直徑、效果顯著，但是該術(shù)式多難以完全殺滅腫瘤細(xì)胞、完全阻斷腫瘤血供。故TACE治療長(zhǎng)期療效有限，反復(fù)多次TACE治療可以加重患者的肝功能損傷，制約TACE在肝癌中的應(yīng)用。

氬氦刀是氬氦冷凍消融技術(shù)的簡(jiǎn)稱，是一種微創(chuàng)超低溫冷凍消融腫瘤的先進(jìn)醫(yī)療技術(shù)，于上世紀(jì)90年代興起，是微創(chuàng)腫瘤治療技術(shù)發(fā)展的新成果，目前在臨床中也有所應(yīng)用[3]。氬氦刀治療的機(jī)制是冷凍后腫瘤細(xì)胞內(nèi)冰晶的物理?yè)p傷，不可逆性使腫瘤細(xì)胞壞死。氬氦刀技術(shù)純屬物理治療，具有徹底摧毀腫瘤的作用，治療中不會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散，且治療過(guò)程痛苦小、患者術(shù)后恢復(fù)快，還可以有效地調(diào)控細(xì)胞因子和抗體的分泌。在TACE治療基礎(chǔ)上加入氬氦刀進(jìn)行聯(lián)合治療是一種最新的肝癌治療模式，有望彌補(bǔ)單純TACE治療的不足，擴(kuò)大整體治療效果。本次研究中觀察組患者接受TACE聯(lián)合氬氦刀治療，在先行TACE治療后對(duì)碘油缺失區(qū)域進(jìn)行氬氦刀治療，對(duì)照組患者接受單純TACE治療，從肝癌相關(guān)惡性生物學(xué)行為指標(biāo)的血清表達(dá)上判斷治療效果的差異[4]。

肝臟腫瘤細(xì)胞的活性有賴于動(dòng)脈血液提供氧需及營(yíng)養(yǎng)，TACE治療也是基于該原理阻斷腫瘤血供。血管新生因子的存在可以促進(jìn)腫瘤新血管生成，為殘留的腫瘤細(xì)胞供氧、促使腫瘤增殖形成新病灶，甚至可以發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，是TACE治療效果不佳、術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要原因之一[5]。肝癌患者的血清血管新生因子的表達(dá)可以一定程度上反映臨床治療的有效性，也直接關(guān)系到治療后患者的腫瘤復(fù)發(fā)可能性。VEGF、HIF-1α、CollⅣ、Lam均是臨床多見(jiàn)的血管新生相關(guān)指標(biāo)。VEGF是最主要的促血管生成因子，HIF-1α在缺氧條件下穩(wěn)定表達(dá)，與靶基因結(jié)合后可加速腫瘤生長(zhǎng)，CollⅣ、Lam是血管基膜及腫瘤包膜的主要成分之一。本次研究中觀察組患者的治療后血清VEGF、HIF-1α、Lam水平均較低，提示加入氬氦刀治療后可以更為徹底的阻斷腫瘤細(xì)胞血供、進(jìn)一步抑制腫瘤血管新生的能力，有助于臨床效果的實(shí)現(xiàn)及維持。

惡性腫瘤細(xì)胞與良性腫瘤區(qū)別的關(guān)鍵之處在于前者具有侵襲能力，TACE及氬氦刀治療的最終目的均是殺滅腫瘤細(xì)胞、最大程度的解除其侵襲轉(zhuǎn)移能力。TACE聯(lián)合氬氦刀可以取長(zhǎng)補(bǔ)短，TACE治療減少腫瘤血供并閉塞多處小血管后，大幅減少腫瘤內(nèi)部的熱池效應(yīng)、提升氬氦刀冷凍區(qū)域的冷凍效應(yīng)，靶區(qū)穩(wěn)定降低更為徹底、腫瘤細(xì)胞完全壞死[6]。ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA均為侵襲相關(guān)因子，ICAM-1可以介導(dǎo)細(xì)胞間機(jī)制的相互作用，參與細(xì)胞黏附轉(zhuǎn)移過(guò)程；MMP-13可以降解多種細(xì)胞外基質(zhì)成分，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的游走、轉(zhuǎn)移；uPA是一種絲氨酸蛋白水解酶，在病理?xiàng)l件下參與細(xì)胞遷移、細(xì)胞周圍基質(zhì)降解過(guò)程[7]。上述研究中觀察組患者的血清ICAM-1、ESM-1、MMP-13、uPA表達(dá)水平較低，提示在TACE治療基礎(chǔ)上進(jìn)行氬氦刀冷凍消融治療，可以更為徹底的殺滅腫瘤細(xì)胞活性、大幅降低其侵襲轉(zhuǎn)移能力。這與氬氦刀毀損范圍超過(guò)腫瘤邊緣，冷凍時(shí)刀尖區(qū)域降溫至-140℃以下且進(jìn)行冷熱循環(huán)操作、徹底殺滅腫瘤關(guān)系密切。

對(duì)于無(wú)法接受根治性手術(shù)治療的肝癌患者，治療的最終目的為延長(zhǎng)患者有質(zhì)量的生存時(shí)間，故治療后的復(fù)發(fā)情況是臨床最為關(guān)注的指標(biāo)之一。較多因子與腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)，其水平亦可間接預(yù)測(cè)是否存在腫瘤復(fù)發(fā)[8]。AFP是肝癌的首選檢測(cè)指標(biāo)，與肝癌存在較強(qiáng)的特異性，當(dāng)肝癌存在以及復(fù)發(fā)時(shí)其水平可大幅上升；CEA是人類胚胎抗原特異決定簇的糖類抗原，存在于原發(fā)性肝癌組織中，雖然是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，但是當(dāng)肝癌患者治療后CEA水平大幅上升時(shí)具有一定的腫瘤復(fù)發(fā)指向性；AFU在腫瘤組織中的轉(zhuǎn)換增加，與AFP聯(lián)合檢測(cè)是可以作為肝癌診斷的有效指標(biāo)；sB7-H3是B7家族的免疫調(diào)控分子，在多種腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，當(dāng)腫瘤復(fù)發(fā)時(shí)其水平可大幅上升[9]。上述研究中觀察組患者的血清AFP、CEA、AFU、sB7-H3表達(dá)量均較低，提示TACE聯(lián)合氬氦刀治療殺滅腫瘤細(xì)胞更為徹底，在抑制腫瘤的遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)方面也更有優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，得出以下結(jié)論：肝癌患者接受氬氦刀治療，可以降低腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，有助于治療效果的實(shí)現(xiàn)以治療預(yù)后的改善，值得在日后臨床實(shí)踐中推廣應(yīng)用。

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（張蕾 編輯）

Effect of argon-helium cryoablation on malignant biological behavior of cancer cells in liver cancer patients

Peng Zhang
(Department of Interventional Radiology,the Affiliated Hospital of Qinghai University, Xining,Qinghai 810000,China)

Objective To analyze the effect of argon-helium cryoablation on cancer cell biological behavior in liver cancer patients.Methods A total of 88 cases of liver cancer patients in our hospital between July 2013 and July 2014 were chosen as research subjects and divided into observation group and control group according to random number table method,each group had 44 patients.The patients in the ontrol group received transarterial chemoembolization(TACE)alone,while the patients in the observation group received TACE and argon-helium cryoablation.Serum angiogenesis-related indicators,invasion related indicators and tumor prognostic indicators were compared between the two groups.Results Serum VEGF,HIF-1α and Lam levels in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).Serum ICAM-1,ESM-1,MMP-13 and uPA levels in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).AFP,CEA,AFU and sB7-H3 levels in the observation group were lower than those in the control group,the differences were statistically significant(P＜0.05).Conclusions Argon-helium cryoablation treatment can reduce the malignant behavior of tumor cells in patients with liver cancer,is helpful to achieve a better therapeutic effect and improve the prognosis,and has positive clinical significance.

liver cancer;argon-helium cryoablation;malignant behavior

R735.7

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.22.009

1005-8982（2016）22-0042-04

2016-03-23