王 浩， 陳 浩， 張海波， 周春霞

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心心臟外科，上海 200127

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·論 著·

成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞體外分化潛能的實(shí)驗(yàn)研究

王 浩， 陳 浩， 張海波， 周春霞*

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心心臟外科，上海 200127

目的： 研究成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化的潛能。方法： 利用免疫磁珠分選法分離成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞，通過BMP-2/FGF-4，TGF-β1及VEGF165等三種不同的體外誘導(dǎo)方法使其向心臟“三系”分化，并從細(xì)胞形態(tài)的變化、RT-PCR和免疫熒光染色等方面鑒定其分化潛能。結(jié)果： 經(jīng)BMP-2/FGF-4誘導(dǎo)，小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變，上調(diào)心肌細(xì)胞特征基因α-MHC、β-MHC、MLC-2a和MLC-2v的mRNA表達(dá)，同時(shí)表達(dá)心肌特征性蛋白cTNT和cMHC。經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)，小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞亦發(fā)生形態(tài)改變，上調(diào)平滑肌特征基因α-SMA和Calponin的mRNA表達(dá)，同時(shí)表達(dá)平滑肌特征性蛋白SMA、sMHC和Calponin的表達(dá)。經(jīng)VEGF165誘導(dǎo)，小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞同樣發(fā)生了形態(tài)改變，上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞特征基因CD31、vWF和VE-Cadherin的mRNA表達(dá)，同時(shí)表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特征性抗原CD31。結(jié)論： 成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞在體外多種因素的分別作用下，能向心肌樣細(xì)胞、平滑肌樣細(xì)胞和內(nèi)皮樣細(xì)胞分化，具有心臟干細(xì)胞特性的多向分化潛能。

Sca-1；心臟；干細(xì)胞；誘導(dǎo)分化

成體心臟干細(xì)胞(cardiac stem cells，CSCs)或心肌前體細(xì)胞(cardiomyocytes progenitor cells，CMPCs)的發(fā)現(xiàn)，拉開了人類心臟組織再生或修復(fù)的新序幕。利用自體或同種異體CSCs來修復(fù)缺血壞死心肌組織成為近年來研究的熱點(diǎn)[1-3]，也無疑為先天性心臟病患兒構(gòu)建所需的組織工程心臟補(bǔ)片提供良好的種子細(xì)胞[4]。研究發(fā)現(xiàn)，作為CSCs家族的重要成員， Sca-1+CSCs是成體心臟組織中居于優(yōu)勢(shì)地位的干細(xì)胞，其含量是c-kit+CSCs的100～700倍[5-6]。然另有文獻(xiàn)表明，心臟組織中的Sca-1+細(xì)胞多數(shù)是內(nèi)皮細(xì)胞[7]，而非CSCs。前期研究中，我們通過免疫磁珠分選法從小鼠心臟組織中成功分離出較高純度的Sca-1+細(xì)胞[8]，然而，該群Sca-1+細(xì)胞是否就是真正意義上的CSCs或CMPCs呢？我們將通過系列體外誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)來探討其分化潛能，從而判定其細(xì)胞學(xué)特性，為后期組織工程心臟補(bǔ)片的研究提供理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)野生型ICR小鼠，3～4周齡，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。

1.1.2 儀器與試劑 MiniMACS磁珠分選器(Miltenyi Biotech)，MiniMACS磁珠分選柱(Miltenyi Biotech)，熒光倒置顯微鏡(Leica)，PCR儀(BioRad)。小鼠抗Sca-1-FITC 單克隆磁珠抗體(Miltenyi Biotech)；重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP2)，重組人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-4(FGF4)，重組人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)，重組小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-165(VEGF165)均購(gòu)自PeproTech；小鼠抗心肌MHC單克隆一抗，兔抗小鼠平滑肌MHC多克隆一抗，兔抗小鼠Calponin-1單克隆一抗均購(gòu)自Abcam；大鼠抗小鼠CD31-生物素，鏈霉親和素-PE購(gòu)自eBioscience；山羊抗小鼠心肌Troponin T多克隆一抗(Santa Cruz)；兔抗小鼠平滑肌α-Actin單克隆一抗(Epitomics)；TRIzol(Invitrogen)；PrimeScript RT reagent Kit，TaKaRaTaq試劑盒購(gòu)自TaKaRa。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞的分離提取和原代培養(yǎng) 利用膠原酶A消化小鼠心臟組織成單細(xì)胞懸液，再用免疫磁珠分選法篩選提取其中的Sca-1+細(xì)胞，按1×104/cm2將Sca-1+細(xì)胞接種于0.1%明膠包被的24孔培養(yǎng)板，加入生長(zhǎng)培養(yǎng)液[9]，37℃、5%CO2中靜置培養(yǎng)3 d。此后每3 d換培養(yǎng)液一次，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%～90%匯合時(shí)消化傳代。

1.2.2 小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化 經(jīng)傳代擴(kuò)增的P4代Sca-1+細(xì)胞按1×104/cm2接種于6孔培養(yǎng)板中，37℃，5% CO2中靜置培養(yǎng)，達(dá)70%～80%融合時(shí)開始誘導(dǎo)分化。

向心肌樣細(xì)胞分化：棄原培養(yǎng)液，加入BMP2/FGF4(濃度100 ng/mL)誘導(dǎo)分化液， 37℃，5%CO2中避光培養(yǎng)；設(shè)立對(duì)照組(僅不含BMP-2/FGF-4)。誘導(dǎo)24 h，更換為普通培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，每3 d換液一次，培養(yǎng)2周。

向平滑肌樣細(xì)胞分化：棄原培養(yǎng)液，加入TGF-β1(濃度10 ng/mL)誘導(dǎo)分化液，37℃，5% CO2中培養(yǎng)；設(shè)立對(duì)照組(僅不含TGF-β1)。誘導(dǎo)組每3 d更換誘導(dǎo)液1次，對(duì)照組每3 d更換培養(yǎng)液1次，培養(yǎng)10 d。

向內(nèi)皮樣細(xì)胞分化：棄原培養(yǎng)液，加入VEGF165(濃度20 ng/mL)誘導(dǎo)分化液，37℃，5% CO2中培養(yǎng)；設(shè)立對(duì)照組(僅不含VEGF165)。誘導(dǎo)組每3 d更換誘導(dǎo)液1次，對(duì)照組每3 d更換培養(yǎng)液1次，培養(yǎng)2周。

表1 PCR引物序列

1.2.3 誘導(dǎo)分化后鑒定 細(xì)胞免疫熒光染色：誘導(dǎo)后，誘導(dǎo)組和對(duì)照組細(xì)胞予以PBS漂洗5 min×3次，4%多聚甲醛固定20 min，PBS漂洗5 min×3次，0.3%TritonX-100透壁處理20 min(CD31染色除外)，血清封閉30 min，去封閉血清，添加一抗，4℃孵育過夜，PBS漂洗5 min×3次，添加二抗，室溫避光孵育60 min，PBS漂洗5 min×3次，1∶1 000的DAPI染核1～2 min，PBS漂洗5 min×3次，鏡下觀察拍照。

RT-PCT檢測(cè)：誘導(dǎo)后，用TRIzol法抽提總RNA，同型小鼠的心肌組織設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照。利用PrimeScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；利用Takara Taq PCR試劑盒行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min，退火40 s，72℃延伸50 s，30～32 cycles，72℃終末延伸7 min。使用2%的瓊脂糖凝膠電泳30～35 min后，凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)拍照。GAPDH為內(nèi)參。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞體外向心肌樣細(xì)胞分化 鏡下顯示，P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞在BMP-2/FGF-4作用24 h后雖然細(xì)胞大小形態(tài)相仿，但折光性增強(qiáng)，并開始呈一定趨向性排列(圖1B)。誘導(dǎo)1周后，大部分細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，折光性強(qiáng)，明顯的趨向性排列(圖1C)。誘導(dǎo)2周后，細(xì)胞生長(zhǎng)甚密，仍表現(xiàn)出較強(qiáng)折光性，但未見自發(fā)跳動(dòng)的細(xì)胞(圖1D)。而同期對(duì)照組細(xì)胞，形態(tài)梭形改變，無趨向性排列，折光性較弱(圖1E-G)。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，經(jīng)誘導(dǎo)后部分Sca-1+細(xì)胞表達(dá)心肌特征性結(jié)構(gòu)蛋白cTNT和cMHC，而對(duì)照組沒有表達(dá)(圖2)。RT-PCR結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，經(jīng)誘導(dǎo)的Sca-1+細(xì)胞明顯上調(diào)α-MHC、β-MHC、MLC-2a和MLC-2v等成熟心肌特異基因的mRNA表達(dá)(圖3)。雖然在誘導(dǎo)分化2周后仍然沒有發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞發(fā)生自發(fā)的有節(jié)律搏動(dòng)或者是簡(jiǎn)單的搏動(dòng)，但上述結(jié)果仍然提示我們，BMP-2/FGF-4能誘導(dǎo)成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化，反過來也說明成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞具有向心肌細(xì)胞分化的潛能。

2.2 小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞體外向平滑肌樣細(xì)胞分化 鏡下發(fā)現(xiàn)，P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞在TGF-β1作用24 h后發(fā)生了形態(tài)學(xué)的改變，細(xì)胞變長(zhǎng)呈梭形，折光性明顯增強(qiáng)，且具明顯的趨向性排列，類似于“波峰-波谷”樣特征(圖4A)。誘導(dǎo)10 d后，細(xì)胞重疊生長(zhǎng)，仍呈梭形改變，折光性強(qiáng)，但排列不規(guī)律(圖4B)。而同期對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)上沒有明顯改變(圖4C、4D)。免疫熒光染色同樣發(fā)現(xiàn)，經(jīng)誘導(dǎo)的Sca-1+細(xì)胞表達(dá)平滑肌細(xì)胞特征性蛋白SMA、sMHC和Calponin較對(duì)照組明顯增強(qiáng)(圖5)。RT-PCR結(jié)果亦顯示，與對(duì)照組相比，經(jīng)誘導(dǎo)的Sca-1+細(xì)胞明顯上調(diào)平滑肌特異基因α-SMA和Calponin的mRNA表達(dá)(圖6)。上述結(jié)果提示，TGF-β1能有效誘導(dǎo)成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞向平滑肌樣細(xì)胞分化。換言之，成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞具有向平滑肌細(xì)胞分化的潛能。

圖1 BMP-2/FGF-4誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+ 細(xì)胞成心肌細(xì)胞分化的光鏡下形態(tài)

A: 誘導(dǎo)前Sca-1+細(xì)胞的形態(tài)；B-D: BMP-2/FGF-4誘導(dǎo)后細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)特征；E-G: 對(duì)照組在上述不同時(shí)間點(diǎn)同期的細(xì)胞形態(tài)。放大倍率 ×100

圖2 BMP-2/FGF-4誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+ 細(xì)胞成心肌細(xì)胞分化的免疫熒光染色鑒定

A: cTNT熒光染色結(jié)果(cTNT，綠色；DAPI，藍(lán)色)；B: cMHC熒光染色結(jié)果(cMHC，綠色；DAPI，藍(lán)色). 白色箭頭所指為特異的陽(yáng)性染色，放大倍率 ×400

圖3 BMP-2/FGF-4誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+

RT-PCR檢測(cè)心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA4、Nkx2.5和MEF2C，心肌細(xì)胞特征基因α-MHC、β-MHC、MLC-2a和MLC-2v的mRNA表達(dá). GAPDH為內(nèi)參

2.3 小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞體外向內(nèi)皮樣細(xì)胞分化 鏡下觀察，P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞在VEGF165誘導(dǎo)24 h后亦發(fā)生了改變，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，大部分伸出偽足，但胞體大小形態(tài)沒有明顯改變，折光性有增強(qiáng)(圖7B)。誘導(dǎo)1周后，細(xì)胞生長(zhǎng)密集，偽足漸退，形態(tài)以梭形為主，折光性強(qiáng)(圖7C)。誘導(dǎo)2周后，細(xì)胞生長(zhǎng)甚密，仍表現(xiàn)出較強(qiáng)折光性，偽足消失，形態(tài)以卵圓形為主(圖7D)。而對(duì)照組細(xì)胞無明顯改變，無偽足形成(圖7E-G)。免疫熒光染色顯示，經(jīng)誘導(dǎo)后部分Sca-1+細(xì)胞能夠表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特征性抗原CD31，而對(duì)照組沒有表達(dá)(圖8)。RT-PCR結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，經(jīng)誘導(dǎo)的Sca-1+細(xì)胞能明顯上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞特異性基因CD31、vWF和VE-Cadherin的mRNA表達(dá)(圖9)。上述結(jié)果提示，成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞在VEGF165的誘導(dǎo)下具有向內(nèi)皮細(xì)胞分化的潛能。

圖4 TGF-β1誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞成平滑肌細(xì)胞分化的光鏡下形態(tài)

A-B: TGF-β1誘導(dǎo)后細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)特征；C-D: 對(duì)照組在上述不同時(shí)間點(diǎn)同期的細(xì)胞形態(tài). 放大倍率 ×100

圖5 TGF-β1誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+ 細(xì)胞成平滑肌細(xì)胞分化的免疫熒光染色鑒定

A: SMA熒光染色結(jié)果(SMA，綠色；DAPI，藍(lán)色)；B: sMHC熒光染色結(jié)果(sMHC，綠色；DAPI，藍(lán)色)；C: Calponin熒光染色結(jié)果(Calponin，綠色；DAPI，藍(lán)色). 放大倍率 ×100

圖6 TGF-β1誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞成平滑肌細(xì)胞分化的特異基因表達(dá)

RT-PCR檢測(cè)平滑肌細(xì)胞特征基因SMA、Calponin的mRNA表達(dá). Induced：TGF-β1誘導(dǎo)組；Control：非誘導(dǎo)對(duì)照組；GAPDH為內(nèi)參；mH：mouse heart

圖7 VEGF165誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞成內(nèi)皮細(xì)胞分化的光鏡下形態(tài)

A: 誘導(dǎo)前Sca-1+細(xì)胞的形態(tài)；B-D: VEGF165誘導(dǎo)后細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)特征；E-G: 對(duì)照組在上述不同時(shí)間點(diǎn)同期的細(xì)胞形態(tài). 放大倍率 ×100

圖8 VEGF165誘導(dǎo)P4代成體小鼠心臟Sca-1+細(xì)胞成內(nèi)皮細(xì)胞分化的免疫熒光染色鑒定

CD31熒光染色結(jié)果(CD31，紅色；DAPI，藍(lán)色). 放大倍率 ×100

圖9 VEGF165誘導(dǎo)P4代成體小鼠Sca-1+細(xì)胞成內(nèi)皮細(xì)胞分化的基因表達(dá)檢測(cè)

RT-PCR檢測(cè)內(nèi)皮前體標(biāo)志Flk-1，內(nèi)皮細(xì)胞特征基因CD31、vWF和VE-Cadherin的mRNA表達(dá). GAPDH為內(nèi)參

3 討 論

經(jīng)過體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，在BMP-2/FGF-4的聯(lián)合作用下，成體小鼠心臟組織來源的Sca-1+細(xì)胞能夠表達(dá)成熟心肌的特征基因α-MHC、β-MHC、MLC-2a及MLC-2v，而且還表達(dá)心肌特征性結(jié)構(gòu)蛋白cTNT和cMHC。在TGF-β1的作用下，該群細(xì)胞能夠上調(diào)平滑肌特征基因α-SMA和Calponin的表達(dá)，而且還表達(dá)平滑肌特征性蛋白SMA、sMHC和Calponin。同時(shí)，在VEGF165的作用下，內(nèi)皮細(xì)胞特征基因CD31、VE-cadherin、vWF及表面抗原CD31都有明顯表達(dá)。因此，我們可以基本判定從成體小鼠心臟組織中篩選出來的Sca-1+細(xì)胞為CSCs，具有向心肌、平滑肌、內(nèi)皮等心臟“三系”分化的多向分化潛能。這與Wang等人的研究發(fā)現(xiàn)是一致的，他們通過建立小鼠心肌梗死模型發(fā)現(xiàn)，在心梗發(fā)生的早期，梗死周邊區(qū)域的Sca-1+細(xì)胞數(shù)量顯著上升，而骨髓和血液中的Sca-1+細(xì)胞數(shù)量無論在心梗早期還是晚期都沒有明顯變化[10]，這說明在成體心臟組織中可能駐守著自身固有的Sca-1+細(xì)胞。研究還發(fā)現(xiàn)，Sca-1+細(xì)胞可以在心梗的環(huán)境中向內(nèi)皮和心肌細(xì)胞分化，通過促進(jìn)局部血管和心肌的再生來改善心梗后的心臟功能。

實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是可喜的，但也存有遺憾與不足，我們?cè)谛募〉恼T導(dǎo)效率方面還不滿意。Sca-1+CSCs不僅未能分化為有收縮功能的成熟心肌細(xì)胞，而且表達(dá)心肌特征蛋白cMHC或cTNT的細(xì)胞比例也很少。尋找高效的誘導(dǎo)方法一直是干細(xì)胞再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里的熱點(diǎn)之一?？紤]到干細(xì)胞實(shí)際分化成熟過程中的復(fù)雜性，僅依靠某一誘導(dǎo)因子或多個(gè)因子的簡(jiǎn)單聯(lián)合，往往很難實(shí)現(xiàn)向心肌細(xì)胞這類具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)和特殊生理功能的細(xì)胞去成熟分化，即使可能，效率也是極低的[11]。有研究人員為了模擬心肌分化成熟過程中所需的復(fù)雜條件，先在體外分離培養(yǎng)心肌細(xì)胞，再與干細(xì)胞或前體細(xì)胞共培養(yǎng)，利用前者可能分泌的細(xì)胞因子來促使后者向成熟心肌分化。然而，這也不一定能實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞向自發(fā)搏動(dòng)的成熟心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)變[12-14]。也有研究將CMPCs或CSCs直接移植到梗死心肌的缺血區(qū)域，雖然有向成熟心肌分化的可能，但是移植細(xì)胞的留存率低[15-16]，從而使得總體的轉(zhuǎn)化率下降。

當(dāng)然，除了給予的誘導(dǎo)條件和生長(zhǎng)環(huán)境外，干細(xì)胞自身的特性可能也是影響分化效率的重要因素之一。就CMPCs來說，van等人研究發(fā)現(xiàn)，相比胚胎期CMPCs的多向分化能力，成體CMPCs更傾向于定向心肌的分化，而且由后者分化而來的心肌樣細(xì)胞具有更好的電生理功能[17]，說明雖然胚胎期CMPCs具有多向分化的能力，但其成心肌分化的效率可能反不如定向心肌分化的成體CMPCs。另有文獻(xiàn)表明，具有多向分化能力的干細(xì)胞更接近于原始細(xì)胞，從而遠(yuǎn)離分化成熟的細(xì)胞[18]。同樣，我們實(shí)驗(yàn)中的Sca-1+CSCs亦具有多向分化的潛能，可能相比定向心肌分化的成體CMPCs更具原始特性，從而向成熟心肌的分化亦相對(duì)困難。當(dāng)然，對(duì)于心肌梗死的治療或組織工程心臟的構(gòu)建而言，絕不僅僅是成熟心肌細(xì)胞的堆砌，CSCs因其具有向心臟“三系”的多向分化潛能而擁有巨大的臨床應(yīng)用價(jià)值，目前已經(jīng)被全球多個(gè)中心運(yùn)用到Ⅰ期的臨床試驗(yàn)中[1-3]。然而，要真正實(shí)現(xiàn)對(duì)梗死心肌組織結(jié)構(gòu)和功能的生理修復(fù)，最重要的還是要找到合適的體外培養(yǎng)體系和高效的誘導(dǎo)條件，使CSCs或CMPCs能夠朝著具有完全生理功能的成熟心肌或心臟細(xì)胞去分化，這也是我們未來工作中所需探討和深入研究的問題。

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[本文編輯] 葉 婷， 賈澤軍

Experimental study on the differentiation potential of Sca-1-positive cells from adult mouse heart in vitro

WANG Hao, CHEN Hao, ZHANG Hai-bo, ZHOU Chun-xia*

Department of Cardiac Surgery, Shanghai Children’s Medical Center, Shanghai 200127, China

Objective： To study the differentiation potential of Sca-1+cells from adult mouse heart in vitro. Methods： We isolate Sca-1+cells derived from mouse heart by means of immunomagnetic cell sorting. By using three different kinds of differentiation inducing factors, including BMP-2/FGF-4, TGF-β1 and VEGF165, to induce Sca-1+cells to differentiated into the heart "three lines"invitro. The differentiation potential of the cells was identified from the changes of cell morphology, RT-PCR and immunofluorescence staining. Results： After BMP-2/FGF-4 induction, the mouse cardiac Sca-1+cells underwent morphological changes, up regulation of the mRNA expression of α-MHC, β-MHC, MLC-2a and MLC-2v, and the protein expression of cTNT and cMHC, which were the specific markers of cardiomyocytes. After TGF-β1 induction, these Sca-1+cells also had morphological changes, up regulation of mRNA expression of α-SMA and Calponin, and the protein expression of SMA, sMHC, and Calponin, which were the specific markers of smooth muscle cells. After VEGF165induction, the Sca-1+cells also underwent morphological changes, up regulation of endothelial cell specific gene CD31, vWF, and VE-Cadherin expression, and the expression of endothelial cell specific antigen CD31. Conclusions： Adult mouse cardiac Sca-1+cells can differentiate into cardiomyocyte-like cells, smooth muscle-like cells and endothelial-like cells under different inducing factors in vitro，which suggest these cells have multi-lineage differentiation potential as cardiac stem cells.

Sca-1; heart; stem cells; induced differentiation

2016-09-07 [接受日期] 2016-10-15

上海市浦東新區(qū)科技發(fā)展基金創(chuàng)新資金資助項(xiàng)目(PKJ2013-Y64). Supported by Pudong New Area Science and Technology Development Fund Innovative Foundation Projects of Shanghai (PKJ2013-Y64).

王 浩，博士，主治醫(yī)師. E-mail: haowang_nt@163.com

*通信作者(Corresponding author). Tel: 021-38626161, E-mail: zcxaparis@yahoo.com

10.12025/j.issn.1008-6358.2016.20160935

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