戴木根 劉思宇 余璟璐 王永輝 葉斌

胃癌組織中EGFR、Her-2的表達(dá)及相關(guān)性分析

戴木根 劉思宇 余璟璐 王永輝 葉斌

胃癌是全世界范圍內(nèi)發(fā)病率第3位、病死率第2位的惡性腫瘤[1]，同時(shí)也位居我國(guó)惡性腫瘤病死率的前列，而傳統(tǒng)的手術(shù)、化療、放療及綜合治療等措施，病死率高，療效欠佳，不良反應(yīng)大，因此，臨床迫切需要探索更有效的治療方法。分子靶向治療能夠針對(duì)腫瘤特定標(biāo)志物，其治療靶點(diǎn)小，化療不良反應(yīng)小，對(duì)延長(zhǎng)腫瘤患者生存期療效較確定，為惡性腫瘤提供了個(gè)體化治療方案，已經(jīng)成為胃癌綜合治療的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor,EGFR）以及人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2（human epidermal growth factor receptor-2,Her-2）都是受體酪氨酸激酶家族HER/erbB成員，參與介導(dǎo)細(xì)胞分化、生存、遷移、侵襲、黏附、損傷修復(fù)等功能，和胃癌病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后等密切相關(guān)，是胃癌分子靶向治療的重要靶點(diǎn)。本文旨在研究胃癌患者中EGFR、Her-2表達(dá)情況，分析其相關(guān)性和臨床意義，為臨床提供新的治療方向，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 收集2013年1月至2015年12月在本院行胃癌根治術(shù)的214例胃癌患者，術(shù)前均未放療及化療，收集術(shù)后病理標(biāo)本及相應(yīng)癌旁組織，病理標(biāo)本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，HE染色，組織學(xué)檢查確診為腺癌。其中男152例，女62例；年齡31～89歲，中位年齡61歲；病理類型：高分化腺癌11例（5.1%）、中分化腺癌（高-中分化腺癌、中分化腺癌）69例（32.3%）、低分化腺癌（低分化腺癌、黏液腺癌、印戒細(xì)胞癌）134例（62.6%）；TNM分期依據(jù)2013年第2版的《AJCC癌癥分期手冊(cè)》，其中Ⅰa期13例（6.1%）、Ⅰb期29例（13.5%）、Ⅱa期19例（8.9%）、Ⅱb期22例（10.3%）、Ⅲa期27例（12.6%）、Ⅲb期33例（15.4%）、Ⅲc期59例（27.6%）、Ⅳ期12例（5.6%）；HE組織切片檢查見(jiàn)脈管癌栓103例（48.1%），神經(jīng)侵犯58例（27.1%）。

1.2 試劑 鼠抗人單克隆抗體(ZM-0093，克隆號(hào)UMAB96)和兔抗人單克隆抗體（ZA-0023，克隆號(hào)EP3）均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法 采用免疫組織化學(xué)Envision二步法。首先石蠟切片，胃癌組織經(jīng)4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋后，蒸餾水充分沖洗后用PBS溶液浸泡5min；然后再用3%H2O2在室溫下孵育5～10min，用PBS溶液充分沖洗3次，每次2min，滴加一抗工作液，37℃孵育1～2h，用PBS溶液充分沖洗3次，每次2min，滴加試劑Envision通用型二抗50μl，室溫孵育20min，用PBS溶液沖洗3次，每次2min，顯示劑染色（DAB），自來(lái)水充分沖洗，蘇木素復(fù)染1～2min，水洗藍(lán)化、脫水、透明、封片、鏡檢。

1.4 結(jié)果判讀 EGFR：胃癌組織中細(xì)胞無(wú)著色或胃癌組織中著色癌細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性。陽(yáng)性著色一般顯色在胃癌細(xì)胞膜處，呈現(xiàn)棕色或棕褐色。著色細(xì)胞≥10%而細(xì)胞膜非環(huán)狀著色為（+）；10%～50%細(xì)胞膜輕/中度環(huán)狀著色為（++）；＞50%細(xì)胞膜環(huán)狀強(qiáng)著色為（+++）。Her-2：無(wú)反應(yīng)為陰性；＜10%出現(xiàn)細(xì)胞膜著色為（+）；10%～30%著色呈棕黃色或棕褐色為（++）；＞30%強(qiáng)著色為（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，無(wú)序分類資料采用χ2檢驗(yàn)，單向有序分類資料采用趨勢(shì)χ2檢驗(yàn)，偏態(tài)資料采用秩和檢驗(yàn)。EGFR與Her-2在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 EGFR和Her-2在胃癌中的表達(dá)及其相關(guān)性 胃癌組織中EGFR表達(dá)（+++）陽(yáng)性率為36.5%，（++）陽(yáng)性率為16.8%，（+）陽(yáng)性率為22.4%，陰性率為24.3%；Her-2表達(dá)（+++）陽(yáng)性率為17.3%，（++）陽(yáng)性率為14.5%，（+）陽(yáng)性率為32.2%，陰性率為36.0%；EGFR和Her-2兩者共同表達(dá)陽(yáng)性率為61.7%（132/214）。但這些患者中，癌旁組織未見(jiàn)EGFR、Her-2的高表達(dá)。Spearman秩相關(guān)分析顯示EGFR與Her-2在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.416，P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 EGFR和Her-2在胃癌中的表達(dá)（例）

2.2 EGFR、Her-2蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理因素的關(guān)系 EGFR的表達(dá)與胃癌患者性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度神經(jīng)侵犯和脈管癌栓無(wú)相關(guān)（均P＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期相關(guān)（均P＜0.05）。Her-2的表達(dá)與胃癌患者性別、年齡、腫瘤直徑和TNM分期無(wú)相關(guān)（均P＞0.05），與分化程度、神經(jīng)侵犯、脈管癌栓和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（均P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 EGFR和Her-2陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系[例（%）]

3 討論

胃惡性腫瘤是一個(gè)多因素、多步驟作用的結(jié)果，在這個(gè)過(guò)程中其表達(dá)的許多蛋白及細(xì)胞因子間可能存在相互影響。Her/erbB家族信號(hào)通路參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、遷移、黏附、抗凋亡和細(xì)胞轉(zhuǎn)化[2-4]，EGFR、Her-2在Her/erbB家族的活化和信號(hào)傳導(dǎo)中起重要作用。EGFR通常位于細(xì)胞膜表面，促進(jìn)細(xì)胞增殖，EGFR陽(yáng)性表達(dá)在惡性腫瘤的演進(jìn)中起重要作用，其與腫瘤細(xì)胞的腫瘤侵襲、增殖、血管生成、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制都有關(guān)聯(lián)，它的過(guò)表達(dá)往往預(yù)示惡性腫瘤預(yù)后不良[5-6]。Her-2與EGFR結(jié)構(gòu)相似，正常情況下Her-2處于非激活狀態(tài)，當(dāng)Her-2受到某些致癌因素的作用后，因其結(jié)構(gòu)或表達(dá)失控而被激活表達(dá)Her-2蛋白，從而使胃癌組織具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，可促使細(xì)胞間發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[7]。檢測(cè)胃癌組織中過(guò)度表達(dá)的EGFR、Her-2有助于判斷預(yù)后。

本研究結(jié)果顯示214例胃癌患者中EGFR、Her-2的表達(dá)率較高，而在胃癌旁組織中均未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)果提示EGFR、Her-2表達(dá)是胃黏膜細(xì)胞發(fā)生癌變的重要標(biāo)志，可作為胃癌診斷和預(yù)后的參考指標(biāo)[8]。此外，EGFR、Her-2的表達(dá)和性別、年齡、腫瘤直徑均無(wú)相關(guān)性，即表明胃癌一旦發(fā)生兩種蛋白可以穩(wěn)定地表達(dá)。臨床TNM分期中，Ⅲ、Ⅳ期EGFR、Her-2的陽(yáng)性表達(dá)明顯多于Ⅰ、Ⅱ期，說(shuō)明伴隨著腫瘤的發(fā)展，侵襲、浸潤(rùn)能力的增強(qiáng)，EGFR、Her-2的表達(dá)也隨之增強(qiáng)，從而進(jìn)一步加速了胃癌的惡化。Spearman秩相關(guān)分析顯示EGFR與Her-2在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。EGFR和Her-2有共同的細(xì)胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)區(qū)，伴隨著EGFR的信號(hào)傳導(dǎo)增加可上調(diào)Her-2的信號(hào)傳導(dǎo)，EGFR與Her-2聯(lián)合表達(dá)對(duì)胃癌的進(jìn)展可能有協(xié)同作用[9]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，61.7%的患者EGFR和Her-2同時(shí)表達(dá)，兩者表達(dá)呈正相關(guān)，但具體的機(jī)制尚未闡明，需進(jìn)一步研究。

總之，EGFR與Her-2均具有跨膜酪氨酸及酶活性，可促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。本研究表明，兩個(gè)指標(biāo)相互之間存在復(fù)雜而密切的聯(lián)系，通常在胃惡性腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)。而且表達(dá)水平與胃癌浸潤(rùn)程度、預(yù)后及患者生存率相關(guān)，是預(yù)后不良的重要指標(biāo)[10]。探究其表達(dá)及相互關(guān)系可更清楚地了解胃癌的發(fā)生、發(fā)展及生物學(xué)行為，對(duì)診斷、治療及預(yù)后預(yù)測(cè)有重要的臨床意義，同時(shí)可以為靶向藥物的個(gè)體化治療提供參考和療效預(yù)測(cè)。

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2016-02-28）

（本文編輯：陳麗）

323000 麗水市中心醫(yī)院消化內(nèi)科（戴木根、葉斌），檢驗(yàn)科（劉思宇、余璟璐），腫瘤科（王永輝）

葉斌，E-mail：yebind2016@163.com