許光映，胡曉軍，李 群，高忠東，王 振

（山西省農業(yè)科學院農產(chǎn)品加工研究所，山西太原030031）

亞麻木酚素檢測精密度的影響因素分析及改進措施

許光映，胡曉軍，李 群，高忠東，王 振

（山西省農業(yè)科學院農產(chǎn)品加工研究所，山西太原030031）

采用高效液相色譜-二極管陣列檢測（HPLC-DAD）法檢測亞麻木酚素（SDG）含量時發(fā)現(xiàn)，木酚素檢測的峰面積相對標準偏差在9.7%左右。為了提高木酚素檢測的精密度，運用逐項排除法對影響木酚素檢測精密度的因素進行了分析。結果表明，影響木酚素檢測精密度的主要因素有堿水解后的蒸餾方式、甲醇溶解樣品時的掛壁現(xiàn)象、針式過濾器的使用方法等；并針對性提出了相應的改進措施，使木酚素檢測的峰面積相對標準偏差由9.7%左右降到0.95%左右。

亞麻木酚素；檢測；精密度

亞麻屬亞麻科（Linaceae）亞麻屬（Linum），俗稱胡麻[1]。亞麻粕是亞麻榨油后的副產(chǎn)物，含有亞麻蛋白、亞麻膠、木酚素、膳食纖維等多種營養(yǎng)成分[2-5]。亞麻木酚素又叫開環(huán)異落葉松酚二葡萄糖苷（SDG），是與人體雌激素十分相似的植物雌激素[6-10]。亞麻粕木酚素含量的分析檢測主要應用高效液相色譜法（HPLC）。HPLC具有分離效能高、分析速度快、選擇性高和檢測靈敏度高等優(yōu)點[11-19]。張文斌等[11-13]均對木酚素檢測方法進行了研究，并對檢測方法的精密度進行了試驗，相對標準偏差（RSD）分別為1.36%，1.13%，3.47%。徐海娥等[13]研究指出，樣品的前處理對木酚素（SDG）檢測精密度的影響很大。

采用高效液相色譜-二極管陣列檢測法（HPLC-DAD）檢測亞麻木酚素含量時發(fā)現(xiàn)，其檢測精密度較差，峰面積相對標準偏差在9.7%左右。如此低的檢測精密度對亞麻木酚素的研究會得出誤導性的結果。為了提高木酚素的檢測精密度，本研究運用逐項排除法對影響木酚素檢測精密度的相關因素進行了分析，并提出了對應的改進措施。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

儀器：P230高效液相色譜儀（大連依利特公司）；RE-52A型旋轉蒸發(fā)器（上海申勝公司）；SHB-3型循環(huán)水多用真空泵（鄭州杜甫儀器廠）；KS型康氏振蕩器（江蘇金城國勝儀器廠）；PHS-25型數(shù)顯酸度計（杭州雷磁儀器廠）；EX223ZH分析天平（奧豪斯公司）；KQ-5200DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器公司）；WondaDisc針式過濾器（島津技邇公司）等。

試劑：70%乙醇、氫氧化鈉、甲醇、乙腈、冰乙酸、乙醇、鹽酸、去離子水等，甲醇、乙腈為色譜純；其他均為分析純。

1.2 材料

亞麻粕由菏澤中禾健元生物科技有限公司提供；亞麻木酚素（SDG）對照品，購于上海純優(yōu)生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 亞麻粕木酚素含量檢測精密度的試驗方法

精確稱量8 g亞麻粕，加入200 mL 70%乙醇，在常溫下攪拌提取24 h。分離提取液與殘渣，把提取液平均分成8份，分別依次濃縮；濃縮物加入10倍的去離子水，用氫氧化鈉調pH值至12，常溫下堿解12 h；堿解后的提取液調pH值至中性，然后用旋轉蒸發(fā)器濃縮；用甲醇溶解濃縮物并定容，用針式過濾器過濾（為節(jié)約成本，過濾器用甲醇清洗后重復使用），上液相色譜儀檢測樣品中木酚素（SDG）含量。試驗重復3次，并分別計算相對標準偏差。

木酚素（SDG）標準儲備液：準確稱取木酚素標準品15.0mg，用甲醇溶解并轉移至25mL容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，得到質量濃度為0.6 mg/mL的木酚素標準儲備液。

液相色譜儀檢測條件：色譜柱為Hypersil BDS C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相為乙腈∶1%冰醋酸＝40∶60；紫外檢測波長為280 nm；柱溫為35℃；流速為0.8mL/min；進樣量為15μL。

1.3.2 影響精密度的因素分析及液相色譜儀精密度試驗方法 影響木酚素檢測精密度的因素有：液相色譜儀檢測的精密度、亞麻粕提取木酚素的工藝（料液比、提取液pH值、提取時間、提取溫度、乙醇濃度）、提取液的堿水解工藝（堿液pH值、堿解時間、堿解溫度）、堿水解后的蒸餾方式、甲醇溶解樣品時出現(xiàn)掛壁現(xiàn)象、針式過濾器的使用方法等。

亞麻粕提取木酚素的工藝和提取液的堿水解工藝已實現(xiàn)了同一性，不影響檢測精密度。試驗所使用的高效液相色譜儀是新購置的國產(chǎn)設備，為分析液相色譜儀的檢測精密度，在1.3.1試驗結果中取峰面積高、中、低3個樣品，隔1 d檢測一次，重復6次，計算高效液相色譜儀檢測的相對標準偏差。

1.3.3 蒸餾方式和掛壁現(xiàn)象的改進措施 堿水解后蒸餾使用旋轉蒸發(fā)器，每個樣品須依次蒸餾濃縮，無法實現(xiàn)蒸餾條件的同一性。另外，最小的蒸發(fā)物料瓶是250 mL，因為物料瓶體積較大，在濃縮的最后環(huán)節(jié)，控制不好易出現(xiàn)物料掛壁現(xiàn)象，造成甲醇溶解樣品不充分，進而影響檢測結果的精密度。

為克服現(xiàn)有技術的缺陷，山西省農業(yè)科學院農產(chǎn)品加工研究所亞麻課題組發(fā)明了一種水浴蒸發(fā)裝置，該裝置可同時在同一條件下濃縮多個樣品，既減少了工作量，又實現(xiàn)了堿水解后蒸餾條件的同一性。針對甲醇溶解樣品時的掛壁現(xiàn)象，使用50mL的試管替代250 mL物料瓶，減少了濃縮物掛壁的概率。即使有微量的掛壁，也可利用超聲波充分溶解。

使用水浴蒸發(fā)裝置再次按照1.3.1的方法進行亞麻粕木酚素含量檢測精密度的試驗，試驗重復3次，并分別計算每一次的相對標準偏差。

水浴蒸發(fā)裝置如圖1所示。

1.3.4 針式過濾器使用方法的改進措施 因為針式過濾器前的處理條件均實現(xiàn)了同一性，懷疑重復使用針式過濾器會造成木酚素的累積殘留，進而影響檢測結果。不重復使用針式過濾器，對1.3.3試驗的樣品再次上液相色譜儀進行檢測。

2 結果與分析

2.1 木酚素含量檢測精密度的試驗結果

木酚素含量檢測精密度的試驗結果如表1所示。

表1 木酚素含量檢測精密度的試驗結果 mAU·s

從表1可以看出，木酚素含量檢測的峰面積相對標準偏差在9.7%左右，說明木酚素含量檢測重復性誤差太大。

2.2 高效液相色譜儀檢測精密度的試驗結果

高效液相色譜儀檢測精密度的試驗結果列于表2。

表2 高效液相色譜儀檢測精密度的試驗結果 mAU·s

由表2可知，高效液相色譜儀檢測的相對標準偏差在0.65%左右。

2.3 使用水浴蒸發(fā)裝置的檢測精密度試驗結果

使用水浴蒸發(fā)裝置的檢測精密度試驗結果列于表3。

從表3可以看出，相對標準偏差在5.3%左右，峰面積逐漸增大。

表3 使用水浴蒸發(fā)裝置的檢測精密度試驗結果 mAU·s

2.4 不重復使用針式過濾器的檢測精密度試驗結果

不重復使用針式過濾器的檢測精密度試驗結果如表4所示。

從表4可以看出，應用改進措施后，亞麻木酚素檢測的峰面積相對標準偏差在0.95%左右。

表4 不重復使用針式過濾器的檢測精密度試驗結果 mAU·s

3 結論

本研究結果表明，影響亞麻木酚素檢測精密度的因素主要有堿水解后的蒸餾方式、甲醇溶解樣品時掛壁的現(xiàn)象、針式過濾器的使用方法等。堿水解后的蒸餾方式和甲醇溶解樣品時的掛壁現(xiàn)象屬于儀器誤差，采用改進措施即可解決；針式過濾器的使用方法則屬于操作不當。

做食品微量成分檢測時，隨機性因素對于檢測精密度影響較大。為提高食品微量成分檢測的精密度，建議完善食品微量成分檢測的國家標準。

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Analysis of Influencing Factors of Flaxseed Lignans Detection Precision and Im provements

XU Guangying，HU Xiaojun，LI Qun，GAO Zhongdong，WANG Zhen
（InstituteofAgricultural ProductsProcessing，Shanxi Academy ofAgricultural Sciences，Taiyuan 030031，China）

The experimentofcontentdetection of flaxseed lignansusing high performance liquid chromatograph HPLC-DAD found that the peak area relative standard deviation of lignans detection reached to about 9.7%.To improve the precision degree of lignans detection,the itemized exclusivemethod was applied to analyze influencing factors of the flaxseed lignans detection precision.The result showed that,themain factorswhich affected the detection precision of flaxseed lignanswere:the distillationmethod afterbasic hydrolysis, hanging wall phenomenon of methanol dissolved samples,the application method of pin-type filter,etc.The corresponding improvement measures were proposed aimed at the influencing factors above,which reduced the peak area relative standard deviation of flaxseed lignans contentdetection from 9.7%to0.95%.

flaxseed lignans;detection;precision degree

Q946

A

1002-2481（2016）07-0938-04

10.3969/j.issn.1002-2481.2016.07.11

2016-03-09

山西省科技攻關項目（20140311024-3）

許光映（1967-），男，山西平遙人，副研究員，主要從事亞麻精深加工研究工作。