專家問答

問1: 腦組織取材注意事項?

答：用于組織學實驗時，需經(jīng)心臟灌流預冷的PBS和4%多聚甲醛后取出腦組織，分離待檢測部位并以包埋劑包埋。用于提取蛋白和RNA的實驗，需經(jīng)心臟灌流預冷的PBS后迅速取出腦組織，冰上分離待檢測部位后以液氮速凍，可立即提取也可長期保存于液氮或-80度冰箱中。

問2： 基因敲除小鼠繁殖注意事項？

答：繁殖基因敲除小鼠時需注意以下幾點：(1)對得到的子代小鼠進行序列分析，確定突變位點；(2)選擇來自于同一只F0代得到的雜合子雌性和雄性小鼠進行交配，可得到純合子。但如果一直未能得到純合子，則需考慮該基因純合敲除引起的胚胎致死等問題，并選擇條件性基因敲除小鼠用于實驗；(3)由于基因敲除小鼠可能出現(xiàn)繁殖力弱和母性差等情況，因此需做好繁殖記錄，并密切關(guān)注新生小鼠的狀況，可在母鼠懷孕至小鼠離乳前給予瓜子；(4)不同小鼠品系的遺傳背景可影響其表型，因此需要根據(jù)實驗需要選擇合適的品系；(5)使用雌雄雜合子作為交配籠，通常需大量交配籠，才能得到足夠數(shù)量同周齡的純合子和野生型對照小鼠(或根據(jù)實驗需要，還需得到雜合子)。

(感謝中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗讀完研究生邱彬博士的解答)