王銳，曲炳楠，楊婧（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040）

載siRNA的納米制劑研究進(jìn)展Δ

王銳＊，曲炳楠，楊婧#（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040）

目的：為小干擾RNA（siRNA）納米制劑遞送的研究提供參考。方法：以“基因治療”“RNA干擾”“小干擾RNA”“載體系統(tǒng)”“siRNA”“Gene therapy”“RNA interference”“Protamine”等為關(guān)鍵詞，組合查詢1996－2016年在PubMed、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、維普等數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)載siRNA的納米制劑的導(dǎo)入方法、載體類型及影響遞送過程的主要因素進(jìn)行綜述。結(jié)果：共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)500余篇，其中有效文獻(xiàn)40篇。載siRNA的納米制劑導(dǎo)入方法主要分為物理化學(xué)法和載體介導(dǎo)法。在載體介導(dǎo)法中的非病毒載體，不僅克服了siRNA半衰期短、生物利用度低等缺點(diǎn)，而且在一定程度上提高了siRNA的遞送效率，是現(xiàn)代藥劑學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。常用非病毒載體包括陽(yáng)離子脂質(zhì)體、二元復(fù)合物納米載體、三元復(fù)合物納米載體。載體靶向性修飾、粒徑與表面電荷是遞送siRNA納米載體主要影響因素。siRNA的高效遞送依賴于新的高效、低免疫原性載體的開發(fā)以及納米制劑遞送系統(tǒng)的優(yōu)化。因此，可載siRNA的高效、低免疫原性納米制劑的研究任重而道遠(yuǎn)。

基因治療；RNA干擾；小干擾RNA；載體系統(tǒng)

基因治療（Gene therapy）是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，從而達(dá)到治療目的[1]?；蛑委熇蒙锘蚍巧锏姆椒?，將特定基因封閉抑制或者激活來達(dá)到治療目的，可以從根源上修正引起疾病的異?；?，使治療手段從傳統(tǒng)的手術(shù)、放療以及化療擴(kuò)大到分子水平。基因治療可以選擇性地治療多種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，尤其在遺傳病、惡性腫瘤以及心血管疾病等方面取得了可喜的治療效果。其中，運(yùn)用RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術(shù)所研發(fā)的制劑更是受到醫(yī)藥專業(yè)研究人員的高度重視，被公認(rèn)為在基因治療中具有巨大的研究潛力。而小干擾RNA（Small interfering RNA，siRNA）在RNAi技術(shù)中起到核心作用，但如何將siRNA運(yùn)送到靶細(xì)胞則是研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)。筆者以“基因治療”“RNA干擾”“小干擾RNA”“載體系統(tǒng)”“siRNA”“Gene therapy”“RNA interference”“Protamine”等為關(guān)鍵詞，組合查詢1996－2016年在PubMed、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方、維普等數(shù)據(jù)庫(kù)中的相關(guān)文獻(xiàn)。結(jié)果，共檢索到相關(guān)文獻(xiàn)500余篇，其中有效文獻(xiàn)40篇?，F(xiàn)對(duì)載siRNA的納米制劑的導(dǎo)入方法、載體類型及影響遞送過程的主要因素進(jìn)行綜述，以期為siRNA納米制劑遞送的研究提供參考。

1 siRNA的定義與作用機(jī)制

基因沉默（Gene silencing）是指生物體中特定基因由于種種原因不表達(dá)或者是表達(dá)減少的現(xiàn)象。在生物體內(nèi)，正?；蚧顒?dòng)幾乎不產(chǎn)生雙鏈RNA（Double-stranded RNA，dsRNA），而異?；蚧顒?dòng)常常伴有dsRNA的出現(xiàn)。近年來，研究表明真核生物利用遺產(chǎn)基因活動(dòng)產(chǎn)生的dsRNA為模版，抑制與異常基因dsRNA有同源性的基因表達(dá)，產(chǎn)生特異性的基因沉默，這種由dsRNA誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性基因沉默稱為dsRNA介導(dǎo)的基因干擾，簡(jiǎn)稱RNAi。而siRNA則以專一性的方式，通過介導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的RNAi過程來沉默特定連接的靶基因的表達(dá)。

siRNA是由內(nèi)源性或者外源性dsRNA進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞質(zhì)中被Dicer酶加工而成的由21～23個(gè)核苷酸組成的短鏈RNA[2]。siRNA與細(xì)胞內(nèi)特定的蛋白質(zhì)形成RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物（RNA-induced silencing complex，RISC），繼而siRNA解旋，并以RISC上的siRNA序列為向?qū)?，結(jié)合特定序列的mRNA，對(duì)mRNA進(jìn)行酶切。酶切后的mRNA片段通過細(xì)胞質(zhì)內(nèi)核酸酶的非特異性降解，使特定的基因片段無法表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)基因沉默[3]。因?yàn)椴煌膊〉闹虏』蛐蛄胁煌?，所以siRNA針對(duì)不同疾病起治療作用時(shí)的基因序列也不同。

2 siRNA的研究現(xiàn)狀

siRNA的發(fā)現(xiàn)使分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等在研究方法上有了突破，與此同時(shí)，發(fā)展和完善藥物制劑、藥物吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制以及給藥系統(tǒng)等研究成為最熱門的研究點(diǎn)。但是由于裸siRNA生物半衰期短、細(xì)胞靶向性差，且在血液、組織或者細(xì)胞質(zhì)中存在時(shí)容易被酶類所降解，生物利用度低；并且在生理情況下，其是帶有較強(qiáng)負(fù)電性的高度親水的大分子物質(zhì)，若直接導(dǎo)入機(jī)體內(nèi)難以穿透細(xì)胞膜作用于靶細(xì)胞[4-5]，所以還需特定的方法將治療基因有效地導(dǎo)入靶細(xì)胞中。因此，尋找可載siRNA的高效、低免疫原性的納米制劑載體，成為研究的前提和基礎(chǔ)，是一個(gè)亟待突破的研究領(lǐng)域。

3 載siRNA的納米制劑的導(dǎo)入方法

目前，基因?qū)胫饕譃槲锢砘瘜W(xué)導(dǎo)入法和載體介導(dǎo)導(dǎo)入法。

3.1 物理化學(xué)法

物理化學(xué)導(dǎo)入法包括DNA直接注射法、基因槍法、電穿孔法、顆粒轟擊法等，這些方法都各存在其優(yōu)勢(shì)和局限性。例如，DNA直接注射法雖然操作簡(jiǎn)單，但注入數(shù)量有限，且腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化率低，一般需局部多點(diǎn)注射給藥；磷酸鈣共沉淀法會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用；顯微注射法每次只能轉(zhuǎn)染一個(gè)細(xì)胞，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，只適用于轉(zhuǎn)染受精卵或早期胚胎細(xì)胞，而不能用于轉(zhuǎn)染大量細(xì)胞。

3.2 載體介導(dǎo)法

載體介導(dǎo)法是將目的基因以病毒或非病毒為載體遞送于靶組織或靶細(xì)胞的方法，按照載體來源可分為病毒載體和非病毒載體兩類[6]。

3.2.1 病毒載體病毒載體常用的載體病毒類型較多，如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、單純皰疹病毒等[7]。病毒載體最大的優(yōu)勢(shì)在于其遞送效率高，但是同時(shí)也面臨著在體內(nèi)容易發(fā)生嚴(yán)重的機(jī)體免疫反應(yīng)的副作用，而且生產(chǎn)成本過高、載體組裝困難、應(yīng)用范圍有限、可控性差等缺點(diǎn)，限制了其應(yīng)用[8]。例如，以腺病毒為載體的p53基因轉(zhuǎn)移治療惡性腫瘤的方案中，只能將腺病毒注射到腫瘤局部；若靜脈注射，病毒顆粒將很快被清除，能到達(dá)腫瘤組織的很少，難以達(dá)到治療效果，甚至?xí)黾痈弊饔肹9]。而且，針對(duì)遺傳性疾病的基因治療方案大多采用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，其插入或整合到染色體的位置是隨機(jī)的，有引起插入突變及細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的潛在危險(xiǎn)[10]。因此，研究一種可操控的、低免疫原性、穩(wěn)定性好、生產(chǎn)方便且高轉(zhuǎn)染率的載體刻不容緩。

3.2.2 非病毒載體以脂質(zhì)體和陽(yáng)離子聚合物為代表的新型非病毒載體，因其在體內(nèi)的穩(wěn)定性得到改善，且具有較好的靶向性和包封效果，降低了免疫刺激等優(yōu)點(diǎn)，得到廣泛的認(rèn)可和深入的研究。現(xiàn)就幾種常用非病毒載體進(jìn)行介紹。

（1）陽(yáng)離子脂質(zhì)體。陽(yáng)離子脂質(zhì)體是典型的非病毒載體[11]，具有可重復(fù)轉(zhuǎn)染、無免疫原性、可自然降解、制備方法較成熟等[12]優(yōu)點(diǎn)，是目前研究者關(guān)注的熱點(diǎn)[13]。將siRNA遞送到靶細(xì)胞中誘導(dǎo)基因沉默，雖然裸siRNA不能通過細(xì)胞膜進(jìn)入靶細(xì)胞，但可以通過陽(yáng)離子脂質(zhì)體的遞送來實(shí)現(xiàn)[14-16]。臧新龍等[17]制備可裝載逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥功能的siRNA陽(yáng)離子脂質(zhì)體，通過載體的有效傳遞，抑制腫瘤耐藥性，增強(qiáng)腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性，且包封率高，具有良好的陰離子抵御能力，實(shí)現(xiàn)了最佳治療效果。

脂質(zhì)體是一種人工合成的磷脂載體[18]，根據(jù)磷脂的不同將脂質(zhì)體分成中性脂質(zhì)體、正電性脂質(zhì)體和負(fù)電性脂質(zhì)體。正電荷磷脂主要有N-[1-（2，3-二油酰氯）丙基]-N，N，N-氯化三甲銨、（2，3-二油氧基丙基）三甲基氯化銨、十八烷基二甲基溴化銨等[19]。陽(yáng)離子脂質(zhì)體由1個(gè)陽(yáng)離子兩親化合物（又稱作細(xì)胞轉(zhuǎn)染素）和1個(gè)輔助脂質(zhì)構(gòu)成的。陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染率與輔助脂質(zhì)成分的組合密切相關(guān)。由于單獨(dú)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染素形成的脂質(zhì)體的穩(wěn)定性、膜融合性、轉(zhuǎn)染率均較差，所以需要添加中性或者兼性的輔助脂質(zhì)與之結(jié)合。其中，使用二油酰基磷脂酰乙醇胺比使用二油?；字Ｄ憠A、膽固醇所制得的脂質(zhì)融合性和轉(zhuǎn)染率更高。但研究發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)染過程中陽(yáng)離子脂質(zhì)體仍然含有一定的細(xì)胞毒性[20]，且陽(yáng)離子脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性主要與陽(yáng)離子磷脂的性質(zhì)有關(guān)。Zhao Y等[21]通過合理的化學(xué)修飾，用肽頭部取代季銨鹽頭部，不僅增強(qiáng)了生物相容性，更降低了細(xì)胞毒性。陽(yáng)離子脂質(zhì)體頭部結(jié)構(gòu)的修飾，不僅使其能運(yùn)載不同種類的藥物或基因，而且已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了其在診斷和診療學(xué)中的應(yīng)用。

在轉(zhuǎn)染過程中，陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染復(fù)合物表面帶有正電荷，細(xì)胞表面帶有負(fù)電荷，二者通過靜電作用而相互附著，通過內(nèi)涵體內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。在內(nèi)涵體中，陽(yáng)離子脂質(zhì)體與帶有負(fù)電荷的膜脂質(zhì)發(fā)生靜電作用，帶有負(fù)電荷的膜脂質(zhì)由內(nèi)涵體的腔外翻轉(zhuǎn)，與正電荷脂質(zhì)形成中性離子對(duì)，基因治療藥物脫離陽(yáng)離子脂質(zhì)體后進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)行轉(zhuǎn)錄翻譯表達(dá)成蛋白質(zhì)[22]。

（2）二元復(fù)合物納米載體。將陽(yáng)離子脂質(zhì)體與DNA構(gòu)建在一起，組成陽(yáng)離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物（Cationic liposome-DNA complexes，CLDC）。與單獨(dú)使用陽(yáng)離子脂質(zhì)體比較，CLDC除具有陽(yáng)離子脂質(zhì)體的優(yōu)點(diǎn)外，還可以運(yùn)載大小不同的重組基因，提高了基因的運(yùn)載量，具有良好的生物相容性，有效地克服了體內(nèi)核酸酶的降解，從而達(dá)到延緩基因降解的效果[23]。在CLDC中，核酸或短的單鏈寡核苷酸被囊泡覆蓋。由于DNA是高度帶電分子，故可附著在帶正電荷的脂質(zhì)體表面或被脂質(zhì)體囊泡包封形成復(fù)合物。陽(yáng)離子脂質(zhì)體與DNA的自組裝可以產(chǎn)生多種納米結(jié)構(gòu)和形態(tài)，多層復(fù)合物由相對(duì)脂雙層之間的DNA插層制成。因此，準(zhǔn)確地掌握復(fù)合物的結(jié)構(gòu)和形態(tài)在生物學(xué)的研究過程中（例如基因遞送）是非常重要的[24]。另一種使DNA與脂質(zhì)體融合的方法是在帶負(fù)電荷的含水的脂質(zhì)體內(nèi)捕捉DNA，這在低溫時(shí)偶爾可使脂質(zhì)體膜不穩(wěn)定。據(jù)此，脂質(zhì)體可分為兩種類型：①帶正電荷的陽(yáng)離子脂質(zhì)體；②帶負(fù)電荷的陽(yáng)離子脂質(zhì)體。當(dāng)脂質(zhì)帶正電荷時(shí)，容易與帶負(fù)電荷的細(xì)胞表面結(jié)合，具有較高的轉(zhuǎn)染率。

CLDC納米載體轉(zhuǎn)染機(jī)制主要分為三步：首先，在脂質(zhì)與細(xì)胞融合時(shí)，帶正電的陽(yáng)離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電荷的DNA或RNA通過靜電作用相互結(jié)合，形成脂質(zhì)-基因復(fù)合物。其次，表面過剩的正電荷與帶負(fù)電的細(xì)胞膜通過靜電作用而相互吸附[25]，由于脂質(zhì)體本身具有親脂性，使得脂質(zhì)-基因復(fù)合物可通過細(xì)胞內(nèi)吞或細(xì)胞膜融合作用進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)形成內(nèi)涵體。最后，脂質(zhì)-基因復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞后，在細(xì)胞質(zhì)中或進(jìn)一步傳遞到細(xì)胞核內(nèi)釋放基因，完成細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯，脂質(zhì)體被降解為磷脂，其降解產(chǎn)物可被細(xì)胞生物膜再利用[26]。

（3）三元復(fù)合物納米載體。脂質(zhì)體-魚精蛋白-DNA復(fù)合納米粒（Liposome-protamine-DNA nanoparticle，LPD-NP）是近年來在CLDC的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的又一新型非病毒載體。與CLDC比較，LPD-NP的優(yōu)點(diǎn)在于能更有效地縮合DNA，顯著提高細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率，同時(shí)減弱核酸酶對(duì)DNA的酶解作用。經(jīng)典的LPD-NP載體系統(tǒng)的聚陽(yáng)離子是多聚賴氨酸。近年來，魚精蛋白已被美國(guó)FDA認(rèn)證可以作為聚陽(yáng)離子供臨床使用。魚精蛋白是一種高正電荷的肽，充當(dāng)DNA縮合劑，通過增加魚精蛋白濃度，提高制劑的遞送率。但魚精蛋白的濃度過高，會(huì)改變魚精蛋白-DNA復(fù)合物的電荷，干擾其與陽(yáng)離子脂質(zhì)體的相互作用，反而降低所得制劑的遞送效率。Mukherjee S等[27]在對(duì)LPD-NP復(fù)合物納米載體系統(tǒng)進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，質(zhì)粒DNA中含有CpG基因序列，使所得制劑存在高度免疫原性[27]。透明質(zhì)酸（HA）是在脊椎動(dòng)物上皮、神經(jīng)和結(jié)締組織的細(xì)胞外基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的多糖聚陰離子，其不僅提供了多價(jià)電荷，而且不含免疫刺激的CpG基序，可降低免疫毒性和改善納米顆粒的形成[28]。此外，HA是毒性相對(duì)較低的聚合物，并被美國(guó)FAD認(rèn)證用于注射劑，所以脂質(zhì)體-魚精蛋白-透明質(zhì)酸復(fù)合納米粒（Liposome-protamine-hyaluronic acid nanoparticle，LPH-NP）成為新型非病毒載體而備受關(guān)注。Chono S等[29]已經(jīng)開發(fā)了LPH-NP制劑并將siRNA成功輸送至轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞中，靶向性的LPH-NP同非靶向性的LPDNP比較，雖然均表現(xiàn)出相似的特征和基因沉默，但靶向性的LPH-NP治療窗顯著擴(kuò)大至少2.7倍。

在LPH-NP復(fù)合納米載體組裝過程中，HA與siRNA通過化學(xué)連接形成HA-siRNA軛合物[30]。HA-siRNA軛合物整體帶負(fù)電，再與帶正電的魚精蛋白通過電荷作用自組裝原理相連接。調(diào)整魚精蛋白和軛合物的用量，使之形成帶負(fù)電的絡(luò)合物，最后與空白的陽(yáng)離子脂質(zhì)體混合均勻，即完成了LPH-NP載體組裝過程。Park K等[31]分別合成可分解的和不可分解的HA-siRNA納米復(fù)合物（HA-siRNA/LPEI），平均粒徑為250 nm，表面呈負(fù)電性或中性?？煞纸獾腍A-siRNA/LPEI體外基因沉默效果明顯優(yōu)于不可分解的HA-siRNA/LPEI復(fù)合物。同時(shí)制得載有干擾載脂蛋白B（siApoB）的HA-siApoB/LPEI，能靶向遞送于肝，對(duì)載脂蛋白B的mRNA沉默呈劑量依賴性。

4 影響siRNA納米載體遞送的主要因素

4.1 載體靶向性修飾

在正常細(xì)胞與癌細(xì)胞之間，維生素、生長(zhǎng)因子的受體表達(dá)存在差異性。因此，配體可將主動(dòng)靶向的脂質(zhì)體特異性傳遞到相應(yīng)受體過表達(dá)的細(xì)胞、組織或者器官。Sigma受體是一類對(duì)于抗精神病藥具有較高親和力的膜結(jié)合蛋白，在正常組織中有表達(dá)，在黑色素瘤、前列腺癌和非小細(xì)胞肺癌的腫瘤組織中過表達(dá)。通過表面吸附、半抗原捆綁、免疫球蛋白共價(jià)結(jié)合以及聚乙二醇（PEG）接枝等方法將單克隆抗體連接到脂質(zhì)體上，可調(diào)節(jié)藥物在體內(nèi)的分布及細(xì)胞靶向的作用。Banerjee R等[32]首次證明了使用靶向性Sigma配體-茴香酰胺可以有效地介導(dǎo)脂溶性藥物遞送于Sigma受體過表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞。

雖然脂質(zhì)體/核酸復(fù)合物表面的配體可以增加對(duì)帶有相應(yīng)受體的細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，但配體阻止復(fù)合物與大多數(shù)非靶細(xì)胞的反應(yīng)，所以將PEG接枝到復(fù)合物表面可形成一個(gè)PEG的立體屏障，可有效地改善陽(yáng)離子脂質(zhì)體與血清蛋白之間的非特異性吸附[33]，能抑制巨噬細(xì)胞的吞飲和賦予復(fù)合物較長(zhǎng)的循環(huán)時(shí)間，提高生物利用度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體復(fù)合物的被動(dòng)靶向性。然而這種方法的局限性在于，PEG立體屏障會(huì)阻礙藥物的傳遞，從而抑制其活性[34]。Li SD等[35-36]將茴香酰胺與PEG2000用化學(xué)方法合成DSPE-PEG2000-茴香酰胺，并用其對(duì)LPD-NP表面進(jìn)行修飾。經(jīng)表面修飾的LPH-NP可將siRNA選擇性遞送至Sigma受體陽(yáng)性細(xì)胞，發(fā)揮顯著誘導(dǎo)RNAi效應(yīng)而產(chǎn)生抗腫瘤作用。經(jīng)過修飾的脂質(zhì)體，既可將目的基因靶向?qū)塍w內(nèi)的預(yù)期位點(diǎn)，也可直接引導(dǎo)藥物遠(yuǎn)離那些對(duì)毒性作用特別敏感的體內(nèi)位點(diǎn)，以增強(qiáng)藥物的療效。

4.2 粒徑與表面電荷

靶向性是脂質(zhì)體作為藥物載體的一個(gè)重要特征，粒徑和表面電荷是影響脂質(zhì)體在體內(nèi)被動(dòng)靶向的重要理化因素。脂質(zhì)體進(jìn)入體內(nèi)血液循環(huán)，通過被動(dòng)靶向作用聚集于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)比較豐富的器官。在體內(nèi)，無論何種給藥過程，納米給藥系統(tǒng)都要經(jīng)歷跨越極性上皮細(xì)胞的過程，上皮細(xì)胞所構(gòu)成的單層細(xì)胞一般是納米載體能否順利到達(dá)靶部位的第一道屏障[37]。研究表明，粒子在100 nm內(nèi)具有高透膜性，在100～200 nm內(nèi)具有較高的透膜性，納米粒的透膜性隨粒徑的增加而減小[38]。Zeta電位是脂質(zhì)體作為藥物載體的另一重要的物理性質(zhì)。隨著Zeta電位的增大，陽(yáng)離子脂質(zhì)體的毒性也可能隨之增加。因此，載體的Zeta電位必須控制在一定的范圍內(nèi)[39-40]。

5 結(jié)語(yǔ)

作為一種新型治療手段，siRNA不僅被廣泛用作功能基因組學(xué)研究的工具，更在引起基因異常表達(dá)或突變疾病的生物醫(yī)學(xué)治療領(lǐng)域表現(xiàn)出極大的潛力，為RNAi在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用帶來了革命性的變化。但在對(duì)siRNA與RNAi的研究過程中，仍有很多問題難以攻克，如在藥物遞送方面如何管理siRNA高效作用于體內(nèi)靶組織或細(xì)胞中，是siRNA廣泛使用的主要障礙。

在臨床應(yīng)用方面，除了考慮藥物的有效性之外，基因治療的安全性也是首要考慮的問題。采用基因治療患者所承擔(dān)的風(fēng)險(xiǎn)性并不比其他試驗(yàn)性治療低，包括藥物工業(yè)化生產(chǎn)難易程度、藥物穩(wěn)定性、質(zhì)檢問題以及臨床應(yīng)用方面藥物的給藥途徑等都是無法回避的問題。因此，siRNA的高效遞送依賴于新的高效、低免疫原性載體的開發(fā)及納米制劑遞送系統(tǒng)的優(yōu)化?？裳b載siRNA的高效、低免疫原性納米制劑的研究任重而道遠(yuǎn)。

[1] 李巖.基因治療中基因權(quán)利的法律保護(hù)[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2013.

[2] Lee DJ，He D，Kessel E，et al.Tumoral gene silencing by receptor-targeted combinatorial siRNA polyplexes[J].J Control Release，2016，244（Part B）：280-291.

[3] 楊飛飛，黃偉，李云飛，等.siRNA非病毒遞送載體的研究現(xiàn)狀[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（12）：1436-1443.

[4] 李鳳燕，歐瑜，李謙.siRNA作為小分子藥物的研究進(jìn)展[J].藥物生物技術(shù)，2014，21（4）：381-384.

[5] 趙云春，張麗，鄭彩虹.siRNA體內(nèi)遞送的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2013，30（12）：1366-1373.

[6] 李澤豪，任小元，王世兵，等.介導(dǎo)siRNA傳遞的非病毒載體及其研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)，2014，26（4）：392-399.

[7] Choudhury SR，Hudry E，Maguire CA，et al.Viral vectors for therapy of neurologic diseases[J].Neuropharmacology，2016，doi：10.1016/j.neuropharm.2016.02.013.

[8] 陳麗紅，賈振宇.精準(zhǔn)醫(yī)療：腫瘤基因治療研究關(guān)注的問題[J].實(shí)用腫瘤雜志，2015，30（6）：501-505.

[9] 王瑜.陽(yáng)離子/非離子表面活性劑自組裝及其與DNA的相互作用[D].廣州：華南理工大學(xué)，2012.

[10] Falsini S，Ristori S.Lipoplexes from non-viral cationic vectors：dotap-dope liposomes and gemini micelles[J].Methods Mol Biol，2016，doi：10.1007/978-1-4939-3718-9_3.

[11] Semple SC，Akinc A，Chen J，et al.Rational design of cationic lipids for siRNA delivery[J].Nat Biotechnol，2010，28（2）：172-176.

[12] 高惠靜，安惠霞，陳蓓，等.與納米脂質(zhì)體制備方法相關(guān)的中國(guó)發(fā)明專利[J].中國(guó)藥房，2016，27（7）：976-978.

[13] 李婉迪，趙振民.非病毒載體在基因治療中的研究進(jìn)展[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，33（8）：731-734.

[14] Safinya CR，Ewert KK，Majzoub RN，et al.Cationic liposome-nucleic acid complexes for gene delivery and gene silencing[J].New J Chem，2014，38（11）：5164-5172.

[15] Peng Z，Wang C，F(xiàn)ang E，et al.Co-delivery of doxorubicin and SATB1 shRNA by thermosensitive magnetic cationic liposomes for gastric cancer therapy[J].PLoS One，2014，9（3）：e92924.

[16] Khatri N，Baradia D，Vhora I，et al.Development and characterization of siRNA lipoplexes：effect of different lipids，in vitro evaluation in cancerous cell lines and in vivo toxicity study[J].AAPS Pharm Sci Tech，2014，15（6）：1630-1643.

[17] 臧新龍，李季，李曉巍，等.載siRNA陽(yáng)離子脂質(zhì)體的制備[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，32（7）：510-514.

[18] 李大偉，武玉敏，劉正平，等.肺部吸入納米制劑治療肺癌的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥房，2016，27（31）：4460-4462.

[19] Cui SH，Zhi DF，Zhao YN，et al.Cationic liposomes with folic acid as targeting ligand for gene delivery[J].Bioorg Med Chem Lett，2016，26（16）：4025-4029.

[20] 林梟，崔韶暉，趙軼男，等.陽(yáng)離子脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性[J].生命的化學(xué)，2016，36（1）：50-56.

[21] Zhao Y，Zhang S，Zhang Y，et al.Tri-peptide cationic lipids for gene delivery[J].J Mater Chem B Mater Biol Med，2015，3（1）：119-126.

[22] Liang Y，Liu Z，Shuai X，et al.Delivery of cationic polymersiRNA nanoparticles for gene therapier in neural regeneration[J].Biochem Biophys Res Commun，2012，421（4）：690-695.

[23] Wang Y，Li Z，Han Y，et al.Nanoparticle-based delivery system for application of siRNA in vivo[J].Current Drug Metabolism，2010，11（2）：182-196.

[24] Amenitsch H，Caracciolo G，F(xiàn)oglia P，et al.Existence of hybrid structures in cationic liposome/DNA complexes revealed by their interaction with plasma proteins[J].Colloid Surface B，2011，82（1）：141-146.

[25] Hoekstra D，Rejman J，Wasungu L，et al.Gene delivery by cationic lipids：in and out of an endosome[J].Biochem Soc Trans，2007，35（1）：68-71.

[26] Caracciolo G，Amenitsch H.Cationic liposome/DNA complexes：from structure to interactions with cellular membranes[J].Eur Biophys J，2012，41（10）：815-829.

[27] Mukherjee S，Siddiqui MA，Dayal S，et al.Epigallocatechin-3-gallate suppresses proinflammatory cytokines and chemokines induced by Toll-like receptor 9 agonists in prostate cancer cells[J].J Inflamm Res，2014，7（1）：89-101.

[28] Sze JH，Brownlie JC，Love CA.Biotechnological production of hyaluronic acid：a mini review[J].Biotech，2016，6（1）：67.

[29] Chono S，Li SD，Conwell CC，et al.An efficient and low immunostimulatory nanoparticle formulation for systemic siRNA delivery to the tumor[J].J Control Release，2008，131（1）：64-69.

[30] 王天琪，張娜.透明質(zhì)酸在腫瘤治療中的應(yīng)用[J].生命的化學(xué)，2014，34（5）：690-695.

[31] Park K，Yang JA，Lee MY，et al.Reducible hyaluronic acidsiRNA conjugate for target specific gene silencing[J].Bioconjug Chem，2013，24（7）：1201-1209.

[32] Banerjee R，Tyagi P，Li S，et al.Anisamide-targeted steal-th liposomes：a potent carrier for targeting doxorubicin to human prostate cancer cells[J].Int J Cancer，2004，112（4）：693-700.

[33] Chan CL，Majzoub RN，Shirazi RS，et al.Endosomal escape and transfection efficiency of PEGylated cationic lipid-DNA complexes prepared with an acid-labile PEG-lipid[J].Biomaterials，2012，33（19）：4928-4935.

[34] Majzoub RN，Chan CL，Ewert KK，et al.Uptake and transfection efficiency of PEGylated cationic liposome-DNA complexes with and without RGD-tagging[J].Biomaterials，2014，35（18）：4996-5005.

[35] Li SD，Chen YC，Hackett MJ，et al.Tumor-targeted delivery of siRNA by self-assembled nanoparticles[J].Mol Ther，2008，16（1）：163-169.

[36] Li SD，Chono S，Huang L.Efficient gene silencing in metastatic tumor by siRNA formulated in surface-modified nanoparticles[J].J Control Release，2008，126（1）：77-84.

[37] Des RA，F(xiàn)ievez V，Théate I，et al.An improved in vitro model of human intestinal follicle-associated epithelium to study nanoparticle transport by M cells[J].Eur J Pharm Sci，2007，30（5）：380-391.

[38] Desai MP，Labhasetwar V，Amidon GL，et al.Gastrointestinal uptake of biodegradable microparticles：effect of particle size[J].Pharm Res，1996，13（12）：1838-1845.

[39] 陳濤，王汝濤，王昭，等.非特異靶向荷正電高分子磷脂脂質(zhì)體的構(gòu)建和體外評(píng)價(jià)[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，45（3）：359-364.

[40] 巨佳.基于膽固醇的陽(yáng)離子脂質(zhì)材料的設(shè)計(jì)合成及其在基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用研究[D].西安：第四軍醫(yī)大學(xué)，2015.

R944.9

A

1001-0408（2017）31-4452-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.34

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（No.81603418）；哈爾濱市應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目（No.2016RAQXJ197）

＊副教授，碩士生導(dǎo)師，博士。研究方向：新藥及新劑型。電話：0451-87266893。E-mail：wrdx@sina.com

#通信作者：副教授，碩士生導(dǎo)師，博士。研究方向：新藥開發(fā)。電話：0451-82195940。E-mail：yangjingdx@sina.com

2017-02-17

2017-04-13）

（編輯：余慶華）