梁海海, 李天宇, 解 巖，單宏麗

(1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，省部共建生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，心血管藥物研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150081；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，黑龍江 大慶 163319)

Lin28B/let-7d環(huán)路調(diào)控成纖維細(xì)胞功能參與肺纖維化發(fā)生

梁海海1, 李天宇1, 解 巖2，單宏麗1

(1.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，省部共建生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，心血管藥物研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150081；2.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，黑龍江 大慶 163319)

目的 研究Lin28B/let-7d環(huán)路誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞增殖、分化的作用及分子機(jī)制，為臨床肺纖維化的治療提供新的策略。方法 氣管注射博來(lái)霉素(bleomycin，BLM)造成小鼠肺纖維化模型；血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor, TGF)-β1誘導(dǎo)人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5)纖維性變；qRT-PCR檢測(cè)組織及細(xì)胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1變化；Western blot檢測(cè)Lin28B蛋白表達(dá)；MTT、Edu染色和免疫熒光實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞活力、增殖及成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)變。結(jié)果 Lin28B在肺纖維化小鼠和細(xì)胞中表達(dá)明顯升高。Lin28B可誘導(dǎo)MRC-5細(xì)胞膠原合成增加，而過(guò)表達(dá)let-7d則減輕Lin28B的這一作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Lin28B可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞增殖，并促進(jìn)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變，這一作用是通過(guò)抑制let-7d來(lái)實(shí)現(xiàn)的。結(jié)論 Lin-28B通過(guò)抑制let-7d進(jìn)而促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖、分化，最終增加成纖維細(xì)胞膠原合成，誘發(fā)肺纖維化的發(fā)生，Lin28B可能作為肺纖維化的治療新靶點(diǎn)。

肺纖維化；Lin28B；let-7d；MRC-5細(xì)胞；肌成纖維細(xì)胞；細(xì)胞增殖

特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF) 是一種病因不明、發(fā)病機(jī)制不清的致死性彌漫性肺間質(zhì)疾病，IPF是間質(zhì)性肺炎中發(fā)病率最高、最常見(jiàn)、預(yù)后最差的疾病，其5年生存率不超過(guò)50%，嚴(yán)重危害著人類健康[1]。因此，探索其發(fā)病機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)是目前本領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)難點(diǎn)問(wèn)題。

微小核苷酸(microRNAs, miRNAs)是一類長(zhǎng)度約19～22個(gè)堿基的非編碼RNA分子，其可通過(guò)作用于目的基因的3′-非編碼區(qū)(3′-untranslated region，3′-UTR)進(jìn)而抑制目的基因翻譯或直接使其降解[2]。已有研究證實(shí)，多個(gè)miRNAs參與肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。Let-7d是第一個(gè)被證實(shí)參與肺纖維化發(fā)生的miRNA[3]，研究表明，let-7d可通過(guò)調(diào)控肺泡上皮細(xì)胞和肺成纖維細(xì)胞，進(jìn)而抑制肺纖維化的發(fā)生，但是其上游調(diào)控機(jī)制尚不清楚。

RNA結(jié)合蛋白Lin28B可通過(guò)抑制let-7進(jìn)而發(fā)揮促腫瘤作用[4]。本課題組以往研究發(fā)現(xiàn)，Lin28B可通過(guò)抑制let-7d，誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞，進(jìn)而增加細(xì)胞膠原合成，誘發(fā)肺纖維化的發(fā)生[5]。但其對(duì)成纖維細(xì)胞的作用尚未闡明。本研究旨在研究Lin28B/let-7d對(duì)成纖維細(xì)胞的作用，并探討其分子機(jī)制，以期為肺纖維化的治療及藥物研發(fā)提供新靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞株 人胚肺成纖維細(xì)胞(MRC-5細(xì)胞)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2 試劑 博來(lái)霉素(bleomycin, BLM)購(gòu)自Merck Millipore公司；血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、噻唑藍(lán)(MTT)購(gòu)自Sigma公司；Lin28B-TAT購(gòu)自Pepro Tech公司；實(shí)驗(yàn)所用抗體(Lin28B、α-SMA)均購(gòu)自Abcam公司；DMEM、胎牛血清(FBS)、0.25%胰酶購(gòu)自Gibco公司；let-7d及陰性對(duì)照序列(NC)購(gòu)自上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司；Lipofectamine 2000購(gòu)自Invitrogen公司；蛋白提取及免疫印跡試劑購(gòu)自北京碧云天生物技術(shù)研究所；RNA提取及定量PCR所需試劑購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司；Edu細(xì)胞增殖試劑盒購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公司。

1.1.3 儀器 熒光顯微鏡購(gòu)自O(shè)lympus公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自Tecan公司；電泳儀/轉(zhuǎn)膜儀購(gòu)自Bio-Rad公司；Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)購(gòu)自LICOR公司；qRT-PCR儀購(gòu)自Applied Biosystems公司。

1.2 方法

1.2.1 肺纖維化小鼠模型構(gòu)建 健康8周齡C57BL/6小鼠(購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司)，用1%戊巴比妥鈉(40 mg·kg-1)腹腔注射麻醉，將小鼠仰位固定于鼠板，75%酒精消毒后，暴露氣管。將小鼠隨機(jī)分為2組：注射生理鹽水組(Saline)及注射博來(lái)霉素組(BLM)，將BLM或Saline注射于小鼠氣管內(nèi)，按5 mg·kg-1體質(zhì)量或50 μL·30 g-1體質(zhì)量。28 d后形成肺纖維化模型。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng) MRC-5細(xì)胞于含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液中，置于5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)時(shí)，接種細(xì)胞密度為2.0×108·L-1，細(xì)胞于培養(yǎng)板內(nèi)貼壁后，給予1 μmol·L-1Ang Ⅱ或20 μg·L-1的Lin28B-TAT處理，同時(shí)，按照Lipo2000說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染let-7d及NC，48 h后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 Western blot 將組織或細(xì)胞加入裂解液裂解，超聲破碎，離心，取上清， BCA 法進(jìn)行蛋白定量。將60 μg蛋白與5×上樣緩沖液混合均勻，100℃樣品變性5 min，快速置冰上1 min。電泳后70 V恒壓轉(zhuǎn)膜110 min。室溫封閉2 h，PBS 洗去封閉液，一抗4 ℃過(guò)夜，然后用紅外熒光標(biāo)記二抗避光孵育1 h，以上過(guò)程均需避光。

1.2.4 qRT-PCR 使用TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，并用隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，根據(jù)Applied Biosystems的擴(kuò)增試劑盒進(jìn)行定量PCR檢測(cè)，目的基因量=2-△△CT計(jì)算目的基因相對(duì)含量。

1.2.5 細(xì)胞增殖活力檢測(cè) 將MRC-5細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，體系為180 μL，加入不同處理因素，培養(yǎng)48 h后，每孔加入20 μL 5 g·L-1的MTT溶液,充分混勻后繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去上清，每孔加入150 μL DMSO，震蕩使沉淀充分溶解，酶標(biāo)儀測(cè)各孔吸光度值。

1.2.6 EdU染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖 將MRC-5細(xì)胞接種于蓋玻片上，于12孔板內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)不同因素處理48 h后，棄去培養(yǎng)液，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，最后于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

1.2.7 細(xì)胞免疫熒光化學(xué) 將MRC-5細(xì)胞接種于蓋玻片上，于12孔板內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)不同因素處理48 h后，棄去培養(yǎng)液，用PBS輕輕沖洗3遍，加500 μL 4%多聚甲醛，37℃、10 min固定細(xì)胞，棄去多聚甲醛，用0.1 mol·L-1PBS輕輕沖洗細(xì)胞3次；加入500 μL穿透液(1 mL PBS+4 μL Triton+0.01 g BSA)，室溫孵育1 h，棄去穿透液，用PBS沖洗細(xì)胞3次，加入1 mL封閉用山羊血清，37 ℃，封閉1 h，回收山羊血清，用PBS洗細(xì)胞3次，加入α-SMA一抗，4 ℃過(guò)夜，次日用PBS洗細(xì)胞3次；加入熒光標(biāo)記的二抗，室溫孵育1 h，回收二抗，用PBS洗細(xì)胞3次；加入DAPI染色細(xì)胞核，室溫染色5 min，PBS洗3次，于熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

2 結(jié)果

2.1 Lin28B在肺纖維化中表達(dá)升高 為了明確Lin28B在肺纖維化中的作用，我們通過(guò)氣管注射BLM構(gòu)建小鼠肺纖維化模型，4周后取材，通過(guò)qRT-PCR及Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與注射生理鹽水組小鼠相比，注射BLM組小鼠肺組織中Lin28B的mRNA和蛋白水平均明顯升高(Fig 1A、1B)。為進(jìn)一步明確Lin28B在肺纖維化中的變化，我們使用血管緊張素Ⅱ(Ang Ⅱ)處理MRC-5細(xì)胞，如Fig 1C和1D所示，Ang Ⅱ處理48 h后，MRC-5細(xì)胞中Lin28B表達(dá)水平明顯增加。同時(shí)，使用TGF-β1處理MRC-5細(xì)胞后，Lin28B表達(dá)亦明顯升高(Fig 1E、1F)。以上結(jié)果提示，Lin28B可能參與肺纖維化的發(fā)生。

2.2 Lin28B通過(guò)抑制let-7d增加肺成纖維細(xì)胞膠原生成 為進(jìn)一步明確Lin28B對(duì)肺纖維化的作用，我們使用Lin28B-TAT 處理MRC-5細(xì)胞，并轉(zhuǎn)染let-7d。如Fig 2所示，Lin28B能明顯增加MRC-5細(xì)胞中膠原合成，而過(guò)表達(dá)let-7d則可減輕Lin28B所誘導(dǎo)的膠原合成。Lin28B可能通過(guò)抑制let-7d，進(jìn)而調(diào)控成纖維細(xì)胞功能，最終參與肺纖維化的發(fā)生。

2.3 Lin28B/let-7d環(huán)路促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖 在肺纖維化的發(fā)生過(guò)程中，成纖維細(xì)胞的增殖和肌成纖維細(xì)胞的生成是造成細(xì)胞外基質(zhì)異常沉積的直接原因。為了探究Lin28B/let-7d環(huán)路參與肺纖維化的細(xì)胞機(jī)制，我們首先檢測(cè)Lin28B/let-7d環(huán)路對(duì)肺成纖維細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果如Fig 3所示，Lin28B可促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，而過(guò)表達(dá)let-7d則明顯抑制Lin28B誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，表明Lin28B/let-7d環(huán)路可通過(guò)促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖，進(jìn)而參與肺纖維化的發(fā)生。

2.4 Lin28B/let-7d環(huán)路誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞生成 α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha smooth muscle actin, α-SMA)被認(rèn)為是肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白，我們通過(guò)α-SMA染色證實(shí)，Lin28B/let-7d環(huán)路可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)換，進(jìn)而促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞生成，誘導(dǎo)肺纖維化(Fig 4)。

3 討論

IPF的病理改變以肺泡上皮損傷、炎性細(xì)胞蓄積、成纖維細(xì)胞增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積為主要特征，這個(gè)過(guò)程最終引起肺彈性和肺泡表面積的喪失，進(jìn)而導(dǎo)致氣體交換和肺功能的損害。肌成纖維細(xì)胞是誘發(fā)IPF的主要效應(yīng)細(xì)胞，肌成纖維細(xì)胞同時(shí)具有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的特點(diǎn)，并且大量合成、分泌細(xì)胞外基質(zhì)[6]。肺部肌成纖維細(xì)胞有多種來(lái)源，包括成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、骨髓源性循環(huán)成纖維細(xì)胞等，其中上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞被認(rèn)為是肌成纖維細(xì)胞的主要來(lái)源[7]。因此，通過(guò)調(diào)控上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞，干擾肌成纖維細(xì)胞的生成是治療IPF的重要方向

Fig 1 Lin28B incerased in lung fibrosis(n=5) qRT-PCR(A) and Western blot(B) detected the alteration of Lin28B in the lung of mice after treatment with BLM; C-D: Lin28B was up-regulated in MRC-5 cells treated by Ang Ⅱ; E-F: Lin28B was increased in MRC-5 cells treated by TGF-β1.*P<0.05,**P<0.01vssaline or control

Fig 2 Lin28B promoted collagen synthesis in MRC-5 cells(n=4)

A: Lin28B increased the expression of collagen 1α1 at mRNA level; B: Lin28B increased the expression of collagen 3α1 at mRNA level.*P<0.05,**P<0.01vscontrol;#P<0.05vsLin28B

。

Let-7d是第一個(gè)被證實(shí)在IPF中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的miRNA。Pandit等[3]利用miRNA芯片技術(shù)分析了IPF患者和正常肺組織，發(fā)現(xiàn)IPF患者肺組織中包括let-7d在內(nèi)的18個(gè)miRNAs表達(dá)明顯下調(diào)。在體外實(shí)驗(yàn)中，肺泡上皮細(xì)胞A549經(jīng)TGF-β1刺激后，let-7d表達(dá)量減少，而HMGA2表達(dá)量增加，進(jìn)一步研究證實(shí)TGF-β1通過(guò)Smad3與let-7d啟動(dòng)子結(jié)合，抑制let-7d表達(dá)。同時(shí)，特異性抑制小鼠肺組織中l(wèi)et-7d可誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，使肺泡壁增厚，最終導(dǎo)致肺纖維化。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，let-7d可以通過(guò)影響肺成纖維細(xì)胞的形態(tài)及功能，進(jìn)而調(diào)控肺纖維化的發(fā)生[8]。然而，關(guān)于let-7d的上游調(diào)控機(jī)制尚不清楚。

Lin28是一種高度保守的RNA結(jié)合蛋白，其包括2個(gè)同源基因，Lin28A和Lin28B。研究顯示，Lin28可以抑制let-7的成熟過(guò)程，而let-7亦可以通過(guò)結(jié)合在Lin28的3′-非編碼區(qū)，進(jìn)而抑制Lin28表達(dá)[9]。已有研究證實(shí)，Lin28/let-7d反饋環(huán)路參與多種病理生理學(xué)過(guò)程，包括胚胎發(fā)育、干細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及腫瘤的發(fā)生[4,10-12]。Zhang等[10]研究表明，過(guò)表達(dá)Lin28A或者Lin28B可以增強(qiáng)NANOG、OCT4及SOX2誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的重編程效率。Albino等[4]研究發(fā)現(xiàn)，Lin28通過(guò)下調(diào)let-7進(jìn)而促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的生成及前列腺癌的發(fā)生。

Fig 3 Lin28B/let-7d axis induced fibrogenesis in MRC-5 cells (n=6)

A: Lin28B/let-7d axis increased cell viability in MRC-5 cells; B: Lin28B /let-7d axis promoted proliferation of MRC-5 cells.*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsLin28B

然而，Lin28B/let-7d環(huán)路是否參與肺纖維化的發(fā)生？Lin28是否可以通過(guò)調(diào)控let-7d進(jìn)而誘導(dǎo)肺纖維化？Lin28B是否可以作為肺纖維化的治療新靶點(diǎn)？目前均不清楚。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，Lin28B在肺纖維化小鼠和IPF肺組織中表達(dá)明顯升高，同時(shí)，Lin28B通過(guò)抑制let-7d表達(dá)進(jìn)而誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和細(xì)胞纖維性變；反之，特異性敲除Lin28B可以減輕TGF-β1誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及肺纖維化[5]。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-26a可通過(guò)轉(zhuǎn)錄后抑制HMGA2，從而抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及EMT的發(fā)生[13]。此外，miR-21、miR-9等多個(gè)miRNAs均被證實(shí)參與肺纖維化的病理進(jìn)程[14-15]，且多個(gè)miRNAs參與肺泡上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞功能的調(diào)控[16]。那么，這些miRNAs之間有何內(nèi)在聯(lián)系？在近期的一項(xiàng)研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)miR-26a可以通過(guò)靶向Lin28B增加let-7d表達(dá)水平，提示miR-26a與let-7d具有協(xié)同治療肺纖維化的作用[5]。在此基礎(chǔ)上，我們構(gòu)建了肺纖維化中miRNAs-TF-miRNAs調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，揭示了肺纖維化中miRNAs之間直接的相互調(diào)控關(guān)系。然而，不同miRNAs之間的確切調(diào)控關(guān)系，還有待我們進(jìn)一步的探究和驗(yàn)證。

那么，作為肺纖維化中肌成纖維細(xì)胞的另外一個(gè)重要來(lái)源，Lin28B是否可以通過(guò)調(diào)控let-7d影響肺成纖維細(xì)胞形態(tài)及功能，進(jìn)而參與肺纖維化發(fā)生？

Fig 4 Lin28B /let-7d axis provoked fibroblasts-to-myofibroblasts transition

在本研究工作中，我們發(fā)現(xiàn)，Lin28B在發(fā)生纖維性變的肺成纖維細(xì)胞中表達(dá)明顯升高，同時(shí)證實(shí)，Lin28B通過(guò)抑制let-7d表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞增殖，并促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變，最終促進(jìn)膠原生成。結(jié)合之前的研究工作[5]，我們推斷，靶向抑制Lin28B可能通過(guò)減輕上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及肺成纖維細(xì)胞形態(tài)改變，進(jìn)而抑制肺纖維化的發(fā)生，Lin28B/let-7d反饋環(huán)路可作為肺纖維化的治療新靶點(diǎn)。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在哈爾濱醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室單宏麗課題組實(shí)驗(yàn)室完成。)

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Lin28B/let-7d axis contributes to pulmonary fibrosis by affecting mesenchymal phenotypic properties of lung fibroblasts

LIANG Hai-hai1, LI Tian-yu1, XIE Yan2, SHAN Hong-li1

(1.DeptofPharmacology,CollegeofPharmacy,HarbinMedicalUniversity,State-ProvinceKeyLaboratoriesofBiomedicine-PharmaceuticsofChina,KeyLaboratoryofCardiovascularResearch,MinistryofEducation,Harbin150081,China; 2.DeptofPhysiology,HarbinMedicalUniversity-Daqing,DaqingHelongjiang163319,China)

Aim To examine the role and uderlying mechanisms of Lin28/let-7d axis in the proliferation of lung fibrobalsts and fibroblasts-into-myfibroblasts transition, and provide novel strategy for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis(IPF). Methods We induced experimental lung fibrosis in mice by intratracheally injection of bleomycin(BLM). Ang Ⅱ and TGF-β1 were used to induce fibrogenesis in cultured MRC-5 cells;qRT-PCR and Western blot were applied to determine the changes of Lin28B, collagen 1α1 and collagen 3α1; MTT assay, Edu satining and immunofluoresence were used to examine the cell viability, proliferation and fibroblasts-into-myofibroblasts transition in MRC-5 cells. Results Lin28B was increased in the lung of mice with experimental lung fibrosis and in MRC-5 cells treated with AngⅡ or TGF-β1. Moreover, Lin28B enhanced collagen deposition via inhibiting expression of let-7d, which maybe contribute to the progression of IPF. In addition, further studies showed that Lin28B promoted proliferation and fibroblasts-into-myofibroblasts in MRC-5 cells. Conclusion Lin28B/let-7d axis contributes to fibrogenesis via promotes fibroblasts-into-myofibroblasts transition, which may provide novel approaches for lung fibrosis treatment.

pulmonary fibrosis; Lin28B; let-7d; MRC-5 cell; myofibroblasts; cell proliferation

時(shí)間：2017-1-13 11:38:00

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170113.1138.014.html

2016-09-15,

2016-10-25

黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究資助項(xiàng)目(No 12541362)

梁海海(1984-)，男，博士，副教授，研究方向：心肺系統(tǒng)藥理學(xué)，E-mail: lianghaihai@ems.hrbmu.edu.cn; 單宏麗(1972-)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：心血管藥理學(xué)，通訊作者，E-mail: shanhongli@ems.hrbmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.02.007

A

1001-1978(2017)02-0175-06

R-332；R322.35；R329.24；R563.1302.2