于敏翟穎焦連慶姚蘭

多指標(biāo)綜合加權(quán)評分法優(yōu)選人參五味子水提工藝※

于敏翟穎焦連慶姚蘭

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院植物化學(xué)所，長春130012）

目的通過多指標(biāo)綜合加權(quán)評分法優(yōu)選人參五味子水提工藝，確定最佳提取工藝參數(shù)。方法采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計，以人參總皂苷、五味子醇甲含量及干膏量為指標(biāo)，以加水量、水煎時間及水煎次數(shù)為考察因素，采用分光光度法測定總皂苷含量，HPLC法測定五味子醇甲含量。并以人參總皂苷、五味子醇甲得率和出膏率為指標(biāo)，采用加權(quán)評分法進(jìn)行綜合評判。結(jié)果最佳工藝條件為8倍量水提取3次，每次2 h。結(jié)論該法簡單、易行、重復(fù)性好，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

綜合加權(quán)評分法；正交試驗(yàn)；人參總皂苷；五味子醇甲

本實(shí)驗(yàn)主要優(yōu)化人參五味子混合水提的提取工藝，人參總皂苷為人參中主要有效成分，采用分光光度法測定其含量；五味子醇甲為五味子中主要有效成分，采用高效液相色譜法測定其含量；以人參總皂苷和五味子醇甲的提取率為考察指標(biāo)，結(jié)合出膏率，綜合加權(quán)評分各項指標(biāo)，以確定最佳提取工藝。

1 儀器與材料

島津LC-20A型高效液相色譜儀；紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-2800）；BT25S電子天平，塞多利斯科學(xué)儀器北京有限公司；ZK-82A真空干燥箱，上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州中捷實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司。

人參、五味子藥材均為吉林省道地藥材，購于吉林大藥房，經(jīng)吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院牛志多研究員鑒定分別為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根莖、為木蘭科植物五味子Schisandrachinensis (Turcz.)Baill.的干燥成熟果實(shí)。人參皂苷Re對照品（批號：110754-201525），五味子醇甲對照品（批號：110857-201309），均購自中國食品藥品檢定研究院；所用試劑均為色譜純和分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 總皂苷含量測定[1-2]

2.1.1 人參皂苷Re對照品溶液制備精密稱取人參皂苷Re對照品20 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，搖勻，即每毫升含人參皂甙Re約2.0 mg。精密吸取對照品溶液100 μL放蒸發(fā)皿中，放在水浴揮干（低于60℃），待用。

2.1.2 試樣處理準(zhǔn)確稱定樣品細(xì)粉1.000 g于25 mL容量瓶中，加水20 mL，超聲30 min，再用水定容至刻度，搖勻，放置，精密吸取上清液1.0 mL，進(jìn)行柱層析。

2.1.3 柱層析用10 mL注射器作層析管，內(nèi)裝大孔樹脂，上加1 cm中性氧化鋁。先用25 mL70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25 mL水洗柱，棄去洗脫液，精確加入1.0 mL已處理好的試樣溶液，用水25 mL洗脫，棄去洗脫液，用25 mL70%乙醇洗脫總皂甙，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60℃水浴揮干。

2.1.4 顯色在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入0.2 mL 5%的香草醛冰乙酸溶液，轉(zhuǎn)動蒸發(fā)皿，使殘渣都溶解，再加入0.8 mL高氯酸，混勻后移入具塞比色管中，60℃水浴上加熱10 min，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰乙酸5.0 mL，搖勻后，以1 cm比色池于560 cm波長處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測定。

2.2 五味子醇甲含量測定[3-5]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：C18（150× 4.6 mm）；流動相：甲醇-水(65∶35)；柱溫：25℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長為250 nm；理論板數(shù)按五味子醇甲峰計算應(yīng)不低于2000。

2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取五味子醇甲對照品適量，加甲醇制成每1 ml含0.3 mg的溶液，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備取相當(dāng)于原藥材0.25 g的9組實(shí)驗(yàn)提取液，水浴濃縮至干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 正交設(shè)計及結(jié)果[6-7]

2.3.1 根據(jù)藥材有效成分的理化性質(zhì)及相關(guān)制劑要求，采用水提工藝，選用四因素三水平正交表，確定加水量、水煎時間及水煎次數(shù)為考察因素，按照“2.1.2”及“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，測定并計算提取物中人參總皂苷及五味子醇甲含量。因素水平表見表1。

本工藝?yán)玫玫饺藚⒖傇碥?、五味子醇甲的含量及干膏收率，根?jù)指標(biāo)因素對提取工藝影響的貢獻(xiàn)大小的差異給予分配不同的權(quán)重系數(shù)，即人參總皂苷及及五味子醇甲的含量各為0.4，干膏收率為0.2，再進(jìn)行加權(quán)求和，綜合評分(OD)=0.4W1/Wmax1+0.4W2/ Wmax2+0.2W3/Wmax3。

2.3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 提取工藝四因素三水平正交表

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果分析

表3 方差分析表

2.3.3 驗(yàn)證試驗(yàn)為驗(yàn)證上述優(yōu)選提取工藝的準(zhǔn)確性，確保提取工藝的科學(xué)合理性，按已確定的最佳提取工藝條件進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)（n=3），結(jié)果見表4。結(jié)果表明該優(yōu)化的工藝方法穩(wěn)定可靠、合理可行。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)果與討論

中藥藥效的發(fā)揮往往是多種活性成分共同作用的結(jié)果。對于多味藥材的提取，由于成分的復(fù)雜性，故選擇合適的指標(biāo)成分尤為重要。本試驗(yàn)采用人參總皂苷和五味子醇甲的含量測定結(jié)合出膏率來綜合評價提取工藝，并對有效成分提取率和出膏率進(jìn)行系數(shù)加權(quán)，可較全面地反映藥物在整體制劑中的作用，并更直觀地反映整體提取工藝。

從表中直觀或方差分析均表明，影響因素主次順序?yàn)镃>A>B，因素C即水煎次數(shù)對指標(biāo)的影響具有顯著性，因素A加水量和因素B水煎時間對指標(biāo)的影響不具有顯著性。最佳工藝為A2B3C3D2，即8倍量水，提取3次，每次提取2 h。

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Optimizaton of Water Extraction Technique for Panax Ginseng and Schisandra Chinensis by Multi Index Comprehensive Weighted Score Evaluation

YU Min,ZHAI Ying,JIAO Lianqing,YAO Lan
(Institute of Phytochemistry,Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130012,China)

Objective To optimize water extraction technique for Panax ginseng and Schisandra Chinensis,and to confirm the optimum extraction process parameters by multi index comprehensive weighted score evaluation.Methods Orthogonal experiment method L9 (34)was applied to investigate solvent consumption,extraction time and extraction times.The total ginseng saponins was determined by UV,and the Schisandrin were determined by HPLC.The toatal yield of Ginsenosides and Schisandrin,the extract rate as the index,the extraction was comprehensive evaluated by using the weighted scoring method.Results The optimum factors were 8 times of water,extracting for 2 h,for 3 times.Conclusion The optimized extraction process is simple,easy,with good reproducibility and suitable for industrial production.

comprehensive weighted scoring method;orthogonal test;total Ginsenosides;Schisandrin

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.07.063

1672-2779（2017）-07-0137-03

：李海燕本文校對：司云珊

2016-12-06）

吉林省中醫(yī)藥專題研究項目【No：2015ZT25】；吉林省長春市科技計劃項目【No：14KG071】