孫瑋+季寅星

摘 要：水產(chǎn)品是我國食物種類的重要組成，深受百姓的青睞，但是為了確保水產(chǎn)品的正常養(yǎng)殖，需要使用硝基呋喃類藥物，預(yù)防疾病的發(fā)生。雖然這類藥物可以經(jīng)代謝排出，但是水產(chǎn)品體內(nèi)依然會(huì)有一定的殘留，人們?cè)谑秤盟a(chǎn)品時(shí)如果將其體內(nèi)殘留的硝基呋喃代謝物攝入體內(nèi)，會(huì)給機(jī)體帶來一定的傷害。為了避免這種結(jié)果，必須對(duì)水產(chǎn)品中的硝基呋喃代謝物（AHD、SEM、AOZ以及AMOZ）進(jìn)行快速檢測(cè)，以免出現(xiàn)嚴(yán)重的后果。本文試對(duì)硝基呋喃代謝物進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)這種物質(zhì)的新檢測(cè)方法進(jìn)行簡單的介紹。

關(guān)鍵詞：水產(chǎn)品；硝基呋喃代謝物；殘留；快速檢測(cè)；新方法

中圖分類號(hào)：TS254.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170333033

呋喃西林、呋喃妥因、呋喃唑酮等硝基呋喃類抗菌藥物曾經(jīng)在畜禽類和水產(chǎn)品的養(yǎng)殖中有著非常廣泛的應(yīng)用，但是硝基呋喃本身具有的毒性可以為人體健康帶來危害，雖然經(jīng)過代謝可以適量排出體外，但是其與蛋白質(zhì)結(jié)合后會(huì)產(chǎn)生一定的殘留產(chǎn)物，具有致癌作用。為了保障食品安全，實(shí)驗(yàn)室必須對(duì)水產(chǎn)品進(jìn)行快速檢測(cè)，以確保其體內(nèi)的硝基呋喃代謝物在殘留程度上符合安全標(biāo)準(zhǔn)。

1 檢測(cè)重要性

硝基呋喃是抗菌藥物中的一個(gè)種類，具有廣譜的優(yōu)點(diǎn)，由人工方式合成，結(jié)構(gòu)為“5-硝基”，曾經(jīng)被添加到飼料中，用于畜禽或水產(chǎn)品疾病的預(yù)防和治療。但是，這種物質(zhì)有一定程度的慢性毒性，短暫攝入人體后會(huì)帶來惡心嘔吐、腹瀉、厭食等不良反應(yīng)，部分患者甚至?xí)霈F(xiàn)黃疸或溶血性貧血，若是長時(shí)間或大劑量攝入，會(huì)有致畸或致癌效果。雖然這種物質(zhì)半衰期較短，可以通過代謝排出，但是硝基呋喃代謝物可以與組織蛋白質(zhì)結(jié)合，以另一種存在形式長期存留在人體中。對(duì)此，我國農(nóng)業(yè)部在2002年12月下旬與2005年10月下旬先后發(fā)布了關(guān)于禁止在水產(chǎn)品養(yǎng)殖與畜牧飼養(yǎng)過程中添加硝基呋喃的公告，將硝基呋喃在動(dòng)物飼養(yǎng)中的應(yīng)用視為非法行為。正是基于這樣的狀況，實(shí)驗(yàn)室務(wù)必要對(duì)硝基呋喃殘留狀況進(jìn)行快速檢測(cè)，避免相關(guān)食品安全問題的出現(xiàn)。

2 方法——免疫膠體金法

目前，用于硝基呋喃代謝物檢測(cè)的方法有許多，如：免疫膠體金法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜線性組合法、固相萃取高效液相色譜-質(zhì)譜法等方法。本文選擇免疫膠體金法這種新方法進(jìn)行分析。

2.1 方法

挑選河蟹、魚蝦等水產(chǎn)品，取其可食用部分，大約100g，將搗碎后均勻混合，放在干凈容器中，送入-18℃環(huán)境中作冷凍避光保存。為AHD、SEM、AOZ以及AMOZ 4種硝基呋喃代謝物準(zhǔn)備生化試劑，分別為4-CBA、4-NBA、2-NBA，另準(zhǔn)備氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液以及磷酸氫二鉀溶液各0mol/L、pH=7.4的PBST緩沖劑復(fù)溶液以及其他一些必備物品。為水產(chǎn)品進(jìn)行快速檢測(cè)。為了盡快取得陰性樣品與陽性樣品，可以借助LC-MS/MS方法進(jìn)行預(yù)檢。將解凍樣品先稱取2g，放入50mL的離心管之中，添加10mL的“甲醇：水=1：1”的混合溶液，給予1min的漩渦混合操作，再以4000轉(zhuǎn)/min的速率進(jìn)行5min的離心操作，完畢后將液體剔除，將殘留物放入10mL的0.2mol/L鹽酸之中，均勻漿后再次加入0.05mol/L的2-NBA與50?g/L的混合內(nèi)標(biāo)物（包含99.5%以上純度的AHD、SEM、AOZ、AMOZ）各0.1mL，進(jìn)行1min的漩渦混合，做100次/min的振蕩，保持37℃溫度不變，過夜后將樣本取出并冷去，再添加0.1mol/L的磷酸氫二鉀5mL，使用1mol/L的氫氧化鈉進(jìn)行酸堿度調(diào)整，直至其pH=7.4，隨后使用4mL的乙酸乙酯進(jìn)行2次提取，待干燥后使用50%的甲醇溶液進(jìn)行定容，直至最終量為1mL。在混勻之后若達(dá)到0.22?m，則可以使用UPLC-MS/MS方法進(jìn)行測(cè)定。為樣品進(jìn)行面積膠體金方法的檢測(cè)。將樣品吸取0.1mL，放入含有金標(biāo)抗體的酶標(biāo)板為控制中，以滴管進(jìn)行反復(fù)吹打，直至微孔中的紅色物質(zhì)徹底溶解。安靜等待5min之后，將試條取出并保持水平放置，將微孔中的溶液全部滴加到加樣孔并開始計(jì)時(shí)，使用肉眼進(jìn)行結(jié)果觀察。

2.2 結(jié)果

陰性（-）為檢測(cè)線（T）顏色與對(duì)照線（C）相同或更深；陽性（+）為檢測(cè)線顏色比對(duì)照線顯色淺，甚至檢測(cè)線無顯色。檢測(cè)線的顯色越淺，水產(chǎn)品硝基呋喃代謝物的殘留度就越高。不同衍化劑對(duì)不同混合內(nèi)標(biāo)物具有不同的敏感度，AMOZ、AOZ、SEM與4-CBA配合性更好，AHD與2-NBA配合性更好（見圖1）。

3 結(jié)語

實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前用于硝基呋喃代謝的檢測(cè)方法主要有免疫膠體金法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。本文僅對(duì)免疫膠體金法這種新型方法進(jìn)行簡單介紹，但是實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該在眾多選擇中選擇最適宜的方法，來提高對(duì)硝基呋喃代謝物的檢出率。

參考文獻(xiàn)

[1]柳愛春，劉超，趙蕓，等.免疫膠體金法快速檢測(cè)水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物的研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，25（1）.