王翠蓮

碳青霉烯酶表型檢測的方法比較

王翠蓮

目的探討并比較相關(guān)碳青霉烯酶表型檢測方法的臨床應(yīng)用情況。方法30株碳青霉烯酶腸桿菌陽性菌株為觀察組, 同比例的30株非產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌菌株為對照組, 應(yīng)用改良Hodge試驗(yàn)及Carba NP試驗(yàn)檢測, 對比觀察組經(jīng)兩種試驗(yàn)的檢測陽性率、假陰性率及兩組的耐藥情況。結(jié)果觀察組30株菌株經(jīng)Carba NP試驗(yàn)檢測陽性率及假陰性率分別為100.0%、0；改良Hodge試驗(yàn)檢測陽性率及假陰性率分別為80.0%、20.0%；Carba NP試驗(yàn)檢測陽性率明顯高于改良Hodge試驗(yàn), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。觀察組中耐亞胺培南、美羅培南及左氧氟沙星菌株比例76.7%、56.7%、73.3%均顯著高于對照組10.0%、10.0%、43.3%, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組耐厄他培南、頭孢他啶、慶大霉素菌株比例比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論Carba NP試驗(yàn)法檢測碳青霉烯酶陽性率較高, 具有操作簡便、檢測時(shí)間短、特異性高等特點(diǎn), 可為臨床診療提供準(zhǔn)確、快速的結(jié)果。

碳青霉烯酶；表型；檢測方法

隨著臨床碳青霉烯酶抗生素的廣泛應(yīng)用, 相應(yīng)的耐碳青霉烯腸桿菌的現(xiàn)象不斷增加, 因此準(zhǔn)確快速的檢驗(yàn)碳青霉烯酶相關(guān)菌株及治療至關(guān)重要［1-5］。臨床應(yīng)用的改良Hodge試驗(yàn)法具有一定的局限性, 其臨床檢測假陰性的結(jié)果率相對比較高。有研究報(bào)道稱［2］, Carba NP試驗(yàn)法在檢驗(yàn)臨床相關(guān)的SME、KPC、VIM及SPM等類的碳青霉烯酶菌株有比較高靈敏度。因此, 本研究探討了相關(guān)碳青霉烯酶表型檢測方法的臨床應(yīng)用情況, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)菌株 選取2013年6月～2015年10月在本院分離的腸桿菌科細(xì)菌, 均由聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)將碳青霉烯酶基因進(jìn)行擴(kuò)增作為檢測產(chǎn)酶菌株的金標(biāo)準(zhǔn)［3］, 選取了碳青霉烯酶腸桿菌陽性30株菌株為觀察組, 并選取同比例的非產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌30株菌株為對照組, 所有菌株均經(jīng)過體外藥物敏感性及菌種驗(yàn)證。應(yīng)用微量肉湯稀釋法有效驗(yàn)證相應(yīng)抗生素最低抑菌濃度, 主要是驗(yàn)證美羅培南、亞胺培南及厄他培南碳青霉烯酶類抗生素, 其根據(jù)臨床CLSI規(guī)則進(jìn)行操作及判讀。

1.2 方法

1.2.1 改良Hodge試驗(yàn) 配制麥?zhǔn)蠞舛?.5大腸埃希菌ATCC25922相應(yīng)的菌懸液, 應(yīng)用生理鹽水根據(jù)1:10的比例進(jìn)行相應(yīng)的稀釋, 在MH載玻板上均勻的涂布稀釋液, 將其干燥3～10 min后, 將10 μg美羅培南相應(yīng)的藥敏紙片貼在載玻片的中央, 在已培養(yǎng)18～24 h的37℃的實(shí)驗(yàn)菌相應(yīng)的菌落使用無菌棉棒蘸取, 起點(diǎn)以藥敏試紙邊緣開始, 并準(zhǔn)確劃出相應(yīng)寬度的直線, 使長度為20～25 mm, 將其放置于37℃的相關(guān)孵箱中, 進(jìn)行孵育16～20 h, 之后觀察結(jié)果。

1.2.2 Carba NP試驗(yàn) 先配置相應(yīng)的A液及B液, A液的具體配置方式為：在16.6 ml的超純水中加入相應(yīng)的0.5% 2 ml的酚紅溶液, 之后將180 μl的10 mmol/L七水硫酸鋅溶液,應(yīng)用10% HCl將其pH值調(diào)整為(7.8±0.1), 在4～8℃下進(jìn)行避光儲存。B液的具體配置方法為：將終濃度為6 mg/ml的相應(yīng)的亞胺培南抗生素粉末有效的加入每毫升的A液中, 并確保顏色未變化方可應(yīng)用, 可保存2～3 d。在96孔板上加入相應(yīng)的100 μl A、B檢測液, 將40 μl的細(xì)菌蛋白提取液分別有效的加入在A、B檢驗(yàn)液中, 之后進(jìn)行吹打混勻, 相應(yīng)的操作均完成后, 把上面待孵育的96孔板放置于孵箱中, 每15分鐘進(jìn)行一次觀察并記錄相關(guān)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 對比觀察組經(jīng)兩種試驗(yàn)的檢測陽性率、假陰性率及兩組的耐藥情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組30株菌株經(jīng)兩種試驗(yàn)檢測的結(jié)果比較 觀察組30株菌株經(jīng)Carba NP試驗(yàn)檢測陽性率及假陰性率分別為100.0%、0；改良Hodge試驗(yàn)檢測陽性率及假陰性率分別為80.0%、20.0%；Carba NP試驗(yàn)檢測陽性率明顯高于改良Hodge試驗(yàn), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 觀察組30株菌株經(jīng)兩種試驗(yàn)檢測的結(jié)果比較［株(%)］

2.2 兩組藥敏結(jié)果比較 觀察組中耐亞胺培南、美羅培南及左氧氟沙星菌株比例均顯著高于對照組, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組耐厄他培南、頭孢他啶、慶大霉素菌株比例比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表2 兩組藥敏結(jié)果比較［株(%)］

3 討論

臨床碳青霉烯酶是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的常見項(xiàng)目, 對檢測的結(jié)果進(jìn)行相應(yīng)的分析, 對指導(dǎo)臨床用藥具有至關(guān)重要的作用。臨床對于不同類的碳青酶烯酶常應(yīng)用不同的檢驗(yàn)方式。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的不斷發(fā)展, Carba NP試驗(yàn)法及改良Hodge試驗(yàn)法已應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)中［4,6-9］。

本研究結(jié)果顯示, Carba NP試驗(yàn)檢測陽性率明顯高于改良Hodge試驗(yàn), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。表明Carba NP試驗(yàn)法檢測碳青霉烯酶陽性率較高。分析其原因在于Carba NP法可以準(zhǔn)確并直觀的反映相關(guān)菌株是否產(chǎn)生相應(yīng)的酶, 并且可以將碳青霉烯酶的所有均屬分別, 改良Hodge試驗(yàn)法相對具有一定的局限性, 只能夠初步的判斷是否有酶產(chǎn)生［5,10-13］。有研究報(bào)道稱［6］, 改良Hodge試驗(yàn)法對于碳青霉烯酶的表型檢測對腸桿菌科類的細(xì)菌具有有效性。Carba NP試驗(yàn)法的在進(jìn)行檢驗(yàn)后的1 h內(nèi)可準(zhǔn)確判定菌株的產(chǎn)酶情況,測定藥敏結(jié)果, 比改良Hodge試驗(yàn)法所需的18 h左右的時(shí)間明顯縮短, 其檢驗(yàn)較為方便, 檢驗(yàn)價(jià)格便宜, 臨床敏感性及特異性高［7,14,15］。本研究結(jié)果還顯示, 觀察組中耐亞胺培南、美羅培南及左氧氟沙星菌株比例均顯著高于對照組, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組耐厄他培南、頭孢他啶、慶大霉素菌株比例比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。表明產(chǎn)碳青霉烯酶菌株中的耐藥菌株數(shù)高于非產(chǎn)碳青霉烯酶腸菌株數(shù)。主要由于對于臨床常見的假單胞菌屬及腸桿菌科細(xì)菌的臨床檢測率較高, 可以為臨床醫(yī)生對攜帶碳青酶烯酶的菌株患者的早期診療具有一定的指導(dǎo)意義, 有效的阻斷耐藥菌傳播。在受菌株孵育的18 h后, 改良Hodge試驗(yàn)法對試驗(yàn)檢測水平中的金屬β-內(nèi)酰胺相關(guān)的敏感性及特異性均較低, 還與AmpC酶表達(dá)、外排泵作用及相應(yīng)的膜孔蛋白一定的缺失等相關(guān), 致使臨床檢驗(yàn)存在相應(yīng)的假陰性結(jié)果［8］。Carba NP試驗(yàn)法在實(shí)驗(yàn)室中可的檢測較快, 特異性及敏感性均高, 耗時(shí)少, 可優(yōu)化指導(dǎo)臨床治療方案, 增強(qiáng)院感控制。

綜上所述, Carba NP試驗(yàn)法檢測碳青霉烯酶陽性率較高,具有操作簡便、檢測時(shí)間短、特異性高等特點(diǎn), 可為臨床診療提供準(zhǔn)確、快速的結(jié)果, 值得在微生物實(shí)驗(yàn)室中廣泛的應(yīng)用。

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Comparison on detection methods of phenotype of carbapenemases

WNAG Cui-lian.Department of Clinical Laboratory, Luoding City People’s Hospital, Luoding 527200, China

ObjectiveTo explore and compare the clinical application of related detection methods of phenotype of carbapenemases.MethodsThere were 30 positive strain of carbapenemases as observation group, and same ratio of 30 stains of non-productive carbapenemases as control group.They were detected by modified Hodge test and Carba NP test, and comparison were made on positive rate, false negative rate of two tests and drug resistance situation in two groups.ResultsThe observation group had positive rate and false negative rate respectively as 100.0% and 0 in 30 strains by Carba NP test, and 80.0% and 20.0% by modified Hodge test.Carba NP test had obviously higher positive rate than modified Hodge test, and the difference had statistical significance (P＜0.05).The observation group had obviously higher proportion of imipenem, meropenem-resistant andlevofloxacin resistant strains as 76.7%, 56.7% and 73.3% than 10.0%, 10.0% and 43.3% in the control group, and their difference had statistical significance (P＜0.05).Both groups had no statistically significant difference in proportion of ertapenem, ceftazidime and gentamicin resistant strains (P＞0.05).ConclusionCarba NP shows high positive rate in detection of carbapenemases with simple operation, short detection time and high specificity, and it can provide accurate, fast results for clinical diagnosis and treatment.

Carbapenemases; Phenotype; Detection methods

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.07.045

2016-12-14］

527200 羅定市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科