何東方，張麗軍，劉梅顏

· 論著 ·

藥物處理對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠的影響以及相關(guān)作用機(jī)制

何東方1，張麗軍1，劉梅顏1

目的 觀察藥物處理對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠的改善作用，并探討銀杏葉滴丸（GBP）對(duì)γ-氨基丁酸A型受體α1亞單位（GABRA1）和褪黑素受體1類(lèi)亞型（MTNR1）mRNA表達(dá)的影響。方法 采用咖啡因誘導(dǎo)活體斑馬魚(yú)建立失眠模型，分別水溶給予GBP（低劑量組56 μg/mL、中劑量組167 μg/mL、高劑量組500 μg/mL）、金納多（Ginaton，低劑量組56 μg/mL、中劑量組167 μg/mL、高劑量組500 μg/mL）和氯化鋰（陽(yáng)性對(duì)照組，500 μM），同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組和失眠組，應(yīng)用行為分析儀定量斑馬魚(yú)處于失眠狀態(tài)的時(shí)間，評(píng)價(jià)GBP對(duì)斑馬魚(yú)睡眠的改善作用。另取失眠模型斑馬魚(yú)，水溶給予GBP 56、167、500 μg/mL，同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組和失眠組，采用RT-PCR檢測(cè)GABRA1和MTNR1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果 在觀察的1 h（3600 s）內(nèi)，失眠組斑馬魚(yú)失眠時(shí)間多于正常對(duì)照組，（1598 ±277）s vs.（1240 ±129）s，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。陽(yáng)性對(duì)照組斑馬魚(yú)失眠時(shí)間為（1368±170）s，少于失眠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。低劑量、中劑量、高劑量的GBP對(duì)睡眠的改善作用分別為72%、95%和97%。低劑量、中劑量、高劑量的Ginaton對(duì)睡眠的改善作用分別為78%、80%和95%。與正常對(duì)照組比較，GBP低劑量組GABRA1 mRNA相對(duì)表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；失眠組、GBP中劑量組和高劑量組無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；與失眠組比較，GBP低劑量組GABRA1 mRNA相對(duì)表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。MTNR1 mRNA相對(duì)表達(dá)量：與正常對(duì)照組比較，失眠組、GBP低劑量組和高劑量組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），GBP中劑量組無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與失眠組比較，GBP低劑量組、中劑量組和高劑量組均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）。結(jié)論 低、中、高濃度銀杏葉滴丸和金納多對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠均有顯著改善作用；銀杏葉滴丸改善睡眠的可能機(jī)制為抑制GABRA1的表達(dá)和改善MTNR1的表達(dá)。

斑馬魚(yú)；失眠；抑郁；γ-氨基丁酸A型受體；褪黑素受體

抑郁是一種心境障礙，與正常的悲傷情緒密切相關(guān)[1]。抑郁表現(xiàn)為顯著且持續(xù)的情緒失落、活動(dòng)力明顯減退、思維及認(rèn)知能力遲緩等，同時(shí)還會(huì)導(dǎo)致一些精神生理的變化，如睡眠及食欲的紊亂，影響到患者的工作與生活，嚴(yán)重者甚至?xí)凶詺A向[2-4]。抑郁的發(fā)生及復(fù)發(fā)率很高，其發(fā)病年齡也十分寬泛[5]，抑郁患者常伴有頑固性睡眠障礙，表現(xiàn)為失眠、入睡困難、早醒、睡眠節(jié)律紊亂、睡眠質(zhì)量差等[2,6]。有研究表明[7]，睡眠障礙是抑郁癥的伴隨癥狀，睡眠問(wèn)題已經(jīng)作為抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，同時(shí)睡眠質(zhì)量也是評(píng)價(jià)治療效果的指標(biāo)之一。

斑馬魚(yú)是一種具有多重優(yōu)點(diǎn)的模式脊椎動(dòng)物，與人類(lèi)基因組相似度高達(dá)87%，在神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和腎臟系統(tǒng)等方面都與人類(lèi)具有相似的發(fā)育機(jī)制與特點(diǎn)[8]。近年來(lái)斑馬魚(yú)已被越來(lái)越多地應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究，如建立人類(lèi)疾病模型、進(jìn)行藥理毒理實(shí)驗(yàn)、篩選藥物[9]。目前己有大量研究觀察抗焦慮藥、鎮(zhèn)靜藥、抗抑郁藥等作用于神經(jīng)系統(tǒng)的藥物及小分子化合物對(duì)斑馬魚(yú)成魚(yú)的影響[10-12]，同時(shí)也有研究觀察評(píng)價(jià)斑馬魚(yú)睡眠模型[13-15]。

金納多為一種國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)銀杏葉提取物，有大量文獻(xiàn)證實(shí)其對(duì)抑郁、焦慮、失眠等精神類(lèi)疾病具有一定的治療作用[16-18]。而國(guó)內(nèi)的銀杏葉提取物與金納多相比在提取工藝上存在很大差別，故國(guó)內(nèi)外的銀杏葉提取物并不能完全等同來(lái)看。國(guó)內(nèi)各廠(chǎng)家生產(chǎn)的銀杏葉制劑也不完全相同[19]，銀杏葉滴丸（GBP）是各類(lèi)銀杏葉制劑中的獨(dú)家劑型，鮮有報(bào)道其在抗抑郁、改善睡眠質(zhì)量方面的作用。本實(shí)驗(yàn)采用咖啡因誘導(dǎo)斑馬魚(yú)造成失眠模型，給予GBP和Ginaton治療，從行為學(xué)角度考察GBP對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠的改善作用。在抗抑郁、焦慮、失眠等機(jī)制的研究中，γ-氨基丁酸A（GABAA）受體和褪黑素（Mt）受體的相關(guān)靶點(diǎn)不斷受到關(guān)注[20-23]。故從銀杏葉滴丸對(duì)γ-氨基丁酸A型受體α1亞單位（GABRA1）和褪黑素受體1類(lèi)亞型（MTNR1）mRNA相對(duì)水平的影響來(lái)探討其抗抑郁、改善睡眠的生物靶點(diǎn)及其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)所用斑馬魚(yú)品系為野生型AB系斑馬魚(yú)，參照Westerfield的養(yǎng)殖方法[24]，飼養(yǎng)于杭州環(huán)特生物科技有限公司斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)室［SYXK（浙）2012-0171］，該斑馬魚(yú)研究平臺(tái)符合AAALAC國(guó)際認(rèn)證的要求。斑馬魚(yú)胚胎的繁殖以自然成對(duì)交配的方式進(jìn)行。共900尾，年齡為受精后1天（1 dpf），后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選用5 dpf的斑馬魚(yú)，飼養(yǎng)于28℃的養(yǎng)魚(yú)水中。因?yàn)榕咛タ梢詮淖陨淼穆腰S囊中獲取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以在9 dpf內(nèi)不需要喂食。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與儀器試劑

1.2.1 實(shí)驗(yàn)藥物 銀杏葉滴丸（萬(wàn)邦德制藥集團(tuán)股份有限公司）、金納多（德國(guó)威瑪舒培博士大藥廠(chǎng)）、咖啡因（阿拉丁試劑上海有限公司）、氯化鋰（LiCl，阿拉丁試劑上海有限公司）。使用前將銀杏葉滴丸、咖啡因和金納多用100%的二甲基亞砜（DMSO）配置成濃度為50 mM的母液，備用；將LiCl用超純水配置成濃度為50 mM的母液，備用。

1.2.2 儀器試劑 解剖顯微鏡（SMZ645，Nikon）、96孔板（Nest Biotech）、行為分析儀（V3，View Point Life Sciences）、PCR擴(kuò)增儀（Bioer）、超微量分光光度計(jì)（Thermo）、水平電泳儀（北京六一）、凝膠成像系統(tǒng)（培清）、6孔板（Nest Biotech）、ReverTra Are-α-反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TOYOBO）、2×PCR MasterMix（BioTeKe）、DL2,000 DNA Marker（TAKARA）、TRI reagent（Invitrogen）、DEPC水（生工生物）。

1.3 方法

1.3.1 失眠斑馬魚(yú)模型制備和分組 選取5 dpf野生型AB系斑馬魚(yú)，在解剖顯微鏡下挑選發(fā)育正常的斑馬魚(yú)，不同分組與處理：正常對(duì)照組，正常飼養(yǎng)，未處理；失眠組，用咖啡因（200 μM）做誘導(dǎo)劑處理斑馬魚(yú)24 h；GBP治療組，用咖啡因和GBP同時(shí)水溶給樣方式處理斑馬魚(yú)24 h；Ginaton治療組，用咖啡因和Ginaton同時(shí)水溶給樣方式處理斑馬魚(yú)24 h；陽(yáng)性對(duì)照組，用咖啡因和氯化鋰（500 μM）同時(shí)水溶給樣方式處理斑馬魚(yú)24 h。

1.3.2 確定藥物的最大耐受濃度（MTC） 隨機(jī)選取480尾斑馬魚(yú)于6孔板中，分為16個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組各30尾。即正常對(duì)照組、失眠組、GBP治療組、Ginaton治療組，按不同的濃度各分為7組，GBP的濃度分別為：25、50、100、250、500、1000和2000 μg/ml，Ginaton的濃度分別為：25、50、100、250、500、1000和2000 μg/ml。24 h后，觀察斑馬魚(yú)反應(yīng)情況，并統(tǒng)計(jì)各實(shí)驗(yàn)組的死亡數(shù)量與毒性情況，確定兩種藥物的MTC。

1.3.3 評(píng)價(jià)藥物對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠的改善作用依據(jù)1.3.2的結(jié)果得到GBP和Ginaton的MTC，選取各自的MTC、1/3 MTC和1/9 MTC分別設(shè)為高劑量組、中劑量組和低劑量組。同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組、失眠組和陽(yáng)性對(duì)照組，共計(jì)9個(gè)組別，每組均30尾斑馬魚(yú)，在28℃培養(yǎng)箱中孵育。24 h后，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)選擇10尾斑馬魚(yú)，應(yīng)用行為分析儀定量斑馬魚(yú)處于失眠狀態(tài)的時(shí)間（T）。失眠狀態(tài)為斑馬魚(yú)處于黑暗環(huán)境中的靜止?fàn)顟B(tài)，失眠時(shí)間即處于靜止?fàn)顟B(tài)的時(shí)間，觀察時(shí)間為1 h。藥物對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠改善的計(jì)算公式如下：

1.3.4 GBP對(duì)GABRA1和MTNR1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的影響 各組取30尾藥物干預(yù)24 h后的AB系斑馬魚(yú)，用柱式TRIzol總RNA抽提試劑盒提取組織總RNA，擴(kuò)增生成cDNA。GABRA1上游引物序列：5'-ACCACAGTGTTCACCAGGAT T-3'，下游：5'-ACGCCCGAGTCTACGCT-3'；擴(kuò)增片段大小572 bp。MTNR1上游引物序列：5'-CCCCTGGGTGGTGACTTT-3'，下游：5'-CGA TGGCGATGCCTGTAATG-3'；擴(kuò)增片段大小302 bp。β-actin上游引物序列5'-CATCAGCATGGCT TCTGCTCTGTATGG-3'，下游：5'-GACTTGTCA GTGTACAGAGACACCCT-3'；擴(kuò)增片段大小389 bp。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性2 min，94℃變性30 s，57℃退火30s，72℃延伸30 s，共36個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，紫外分析儀觀察結(jié)果，凝膠成像分析系統(tǒng)（JS-680D）進(jìn)行掃描。分別測(cè)定GABRA1、MTNR1及β-actin的吸光度值。以β-actin作為內(nèi)參基因，得到各組光密度數(shù)據(jù)，基因相對(duì)表達(dá)量計(jì)算公式如下：

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以（±s）表示，組間資料比較用方差分析，兩兩比較采用Dunnett’s T檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 藥物的最大耐受濃度 GBP和Ginaton設(shè)置的濃度分別為：25、50、100、250、500、1000和2000 μg/ml，其中1000 μg/ml和2000 μg/ml濃度下斑馬魚(yú)全部死亡（表1）。故MTC確定為500 μg/ml，為高劑量組；1/3 MTC為167 μg/ml，為中劑量組；1/9 MTC為56 μg/ml，為低劑量組。

2.2 藥物對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)睡眠的改善作用 在觀察的1 h（3600 s）內(nèi)，失眠組斑馬魚(yú)失眠時(shí)間多于正常對(duì)照組，（1598 ±277）s vs. （1240 ± 129）s，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明模型建立成功。陽(yáng)性對(duì)照組斑馬魚(yú)失眠時(shí)間為（1368±170）s，少于失眠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），睡眠改善作用為64%，表明LiCl對(duì)斑馬魚(yú)失眠癥具有明顯的改善作用。低劑量、中劑量、高劑量的GBP對(duì)睡眠的改善作用分別為72%、95%和97%。低劑量、中劑量、高劑量的Ginaton對(duì)睡眠的改善作用分別為78%、80%和95%（圖1～2）。

表1 藥物濃度反應(yīng)情況

圖1 藥物對(duì)斑馬魚(yú)失眠時(shí)間的改善作用（與失眠組相比，aP＜0.05，bP＜0.01，各組n=10）

2.3 GBP對(duì)GABRA1和MTNR1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的影響 與正常對(duì)照組比較，GBP低劑量組GABRA1 mRNA相對(duì)表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；失眠組、GBP中劑量組和高劑量組無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；與失眠組比較，GBP低劑量組GABRA1 mRNA相對(duì)表達(dá)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）（圖3）。MTNR1 mRNA相對(duì)表達(dá)量：與正常對(duì)照組比較，失眠組、GBP低劑量組和高劑量組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01），GBP中劑量組無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與失眠組比較，GBP低劑量組、中劑量組和高劑量組均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.01）（圖4）。

圖2 藥物對(duì)斑馬魚(yú)失眠癥的改善作用（與失眠組相比，aP＜0.05，bP＜0.01，各組n=10）

3 討論

圖3 各組GABRA1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量（與正常對(duì)照組比較，aP＜0.05，與失眠組比較，bP＜0.01）

圖4 各組MTNR1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量（與正常對(duì)照組比較，aP＜0.05，與失眠組比較，bP＜0.01）

抑郁癥主要表現(xiàn)為情緒低落和興趣減退，大部分患者存在睡眠問(wèn)題，包括失眠及嗜睡[25]。一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查表明，處于抑郁發(fā)作期的患者中存在失眠問(wèn)題的占59.1%，而沒(méi)有睡眠問(wèn)題的只有7.2%；在診斷為抑郁障礙并且無(wú)其他精神障礙的患者中，存在失眠問(wèn)題的占到了58.8%，而沒(méi)有睡眠問(wèn)題只有8%[26]。由此可見(jiàn)，抑郁癥患者中睡眠障礙的發(fā)生率高，且以失眠為主要表現(xiàn)形式。本實(shí)驗(yàn)采用咖啡因誘導(dǎo)斑馬魚(yú)造成失眠模型，以L(fǎng)iCl（臨床作為心境穩(wěn)定劑使用[27]）為陽(yáng)性對(duì)照藥，給予GBP和Ginaton治療，從行為學(xué)角度，GBP和Ginaton均能通過(guò)減少失眠時(shí)間來(lái)改善斑馬魚(yú)的睡眠質(zhì)量。GBP和Ginaton均為銀杏葉提取物，其主要有效成分為黃酮醇苷類(lèi)和萜內(nèi)酯類(lèi)，有研究表明Ginaton中的二萜內(nèi)酯（一類(lèi)萜內(nèi)酯）具有抗抑郁作用[28]，白果內(nèi)酯（一種倍半萜內(nèi)酯）也可能對(duì)抑郁樣行為和認(rèn)知障礙有作用，這種保護(hù)作用可能是通過(guò)下丘腦-垂體-腎上腺軸達(dá)到的[29]，推測(cè)GBP的萜內(nèi)酯成分同樣具有抗抑郁作用。

γ-氨基丁酸（GABA）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，其在阻斷興奮性的傳導(dǎo)過(guò)程中起決定性作用[30]。GABA受體根據(jù)結(jié)構(gòu)和藥理作用不同，分為離子型受體（GABAA、GABAC）和代謝型受體（GABAB），其中GABAA受體是最重要的一種[31]。GABAA為很多臨床神經(jīng)活性藥物的作用靶點(diǎn)，其受體功能障礙與失眠、抑郁、焦慮、癲癇等密切相關(guān)[21]。目前所識(shí)別出的GABAA受體亞基種類(lèi)有8個(gè)亞基族的23種單體（α1-6、β1-6、γ1-4、δ、ε、ρ1-3、θ、π）[32]，其中α亞基對(duì)其藥理作用至關(guān)重要，鎮(zhèn)靜效應(yīng)是由GABAA受體α1亞單位介導(dǎo)的；α2、α3亞單位可能與抗焦慮、抗驚厥、肌松作用有關(guān)；而含α5受體的選擇性反激活劑可能為癡呆癥的治療提供有效途徑[22,33-35]。本實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)了GBP對(duì)GABAA受體α1亞單位（GABRA1）表達(dá)的影響，結(jié)果顯示GBP能顯著降低其mRNA的表達(dá)，故推測(cè)GBP可能通過(guò)下調(diào)GABRA1的表達(dá)對(duì)失眠斑馬魚(yú)起到鎮(zhèn)靜作用，改善睡眠質(zhì)量。

褪黑素（MTN）是由松果體分泌的一種吲哚類(lèi)神經(jīng)內(nèi)分泌激素，參與調(diào)節(jié)睡眠覺(jué)醒節(jié)律。MTN與特異性的受體結(jié)合后進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，啟動(dòng)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，影響神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)睡眠障礙、生物節(jié)律紊亂和抑郁情緒[36]。5-羥色胺（5-HT）是MTN的前體，抑郁癥患者腦內(nèi)5-HT含量的降低可以致MTN合成減少[20]。2009年2月，阿戈美拉?。ㄒ环N褪黑素受體激動(dòng)劑以及5-HT2C受體的拮抗劑）獲得歐盟上市許可，用于抑郁癥成人患者的治療。有臨床研究證實(shí)阿戈美拉汀能增加海馬部位神經(jīng)元的可塑性及神經(jīng)元再生，具有明顯的抗抑郁作用，且起效較快，對(duì)抑郁以及伴隨的焦慮癥狀均有較好的療效[37]。哺乳動(dòng)物中普遍存在褪黑素受體（MTNR）的兩類(lèi)亞型，分別為MTNR1和MTNR2[38]。有研究表明，MTNR1與治療失眠和睡眠紊亂密切相關(guān)[39,40]。在本次斑馬魚(yú)失眠模型研究中，檢測(cè)了GBP對(duì)MTNR1 mRNA水平的影響，結(jié)果顯示GBP能顯著提高其表達(dá)，故推測(cè)GBP可以通過(guò)上調(diào)MTNR1 mRNA表達(dá)對(duì)失眠斑馬魚(yú)起到改善睡眠的作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)采用咖啡因誘導(dǎo)斑馬魚(yú)造成失眠模型，給予GBP和Ginaton治療，從行為學(xué)角度證實(shí)了GBP確實(shí)對(duì)失眠癥斑馬魚(yú)的睡眠具有改善作用；GBP對(duì)GABRA1和MTNR1 mRNA水平的影響進(jìn)一步來(lái)探討其抗抑郁、改善睡眠的生物靶點(diǎn)及其作用機(jī)制，但仍需進(jìn)一步研究以發(fā)掘其深層機(jī)制。

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Influence of drug treatment on sleep in zebra fishes with insomnia and relevant mechanism

HE Dong-fang*, ZHANG Li-jun, LIU Mei-yan.*Department of Cardiology, Beijing Anzhen Hospital, Capital University of Medical Sciences, Beijing 100029, China.

LIU Mei-yan, E-mail: china_lmy@hotmail.com

Objective To observe the relief effect of drug treatment on sleep in zebra fishes with insomnia, and discuss the influence of Ginkgo Biloba Pills (GBP) on mRNA expressions of γ-aminobutyric acid type A receptor-1 (GABRA1) and melatonin receptor-1 (MTNR1). Methods The insomnia model was established by caffeine in living zebra fishes, and zebra fishes were respectively given GBP (56 μg/mL, GBP low-dose group; 167 μg/mL, GBP mid-dose group; 500 μg/mL, GBP high-dose group), Ginaton (56 μg/mL, Ginaton low-dose group; 167 μg/mL, Ginaton mid-dose group; 500 μg/mL, Ginaton high-dose group), and lithium chloride (500 μM, positive control group), and at the same time normal control group and insomnia group was set up. The duration of zebra fishes being insomnia condition was quantified by using behavior analyzer, and relief effect of GBP on zebra fishes’ sleep was reviewed. In addition zebra fishes with insomnia were selected and given GBP [56 μg/mL (GBP low-dose subgroup), 167 μg/mL (GBP mid-dose subgroup) and 500 μg/mL (GBP high-dose subgroup)], and at the same time normal control subgroup and insomnia subgroup was set up for detecting the relative mRNA expressions of GABRA1和MTNR1 by using RT-PCR. Results The insomnia duration was longer in insomnia group than that in normal control group [(1598 ±277) s vs. (1240 ±129) s, P＜0.01] within observation time for 1 h (3600 s). The insomnia duration was shorter in positive control group (1368±170) s than that in insomnia group (P＜0.05). The meliorating effect of GBP on sleep reached, respectively, by 72% in GBP low-dose group, by 95% in GBP mid-dose group and by 97% in GBP high-dose group. The meliorating effect of Ginaton on sleep reached, respectively, by 78% in Ginaton low-dose group, by 80% in Ginaton mid-dose group and by 95% in Ginaton highdose group. The relative expression of GABRA1 mRNA decreased in GBP low-dose subgroup compared with normal control subgroup (P＜0.01), had no significant changes in insomnia subgroup, GBP mid-dose subgroup and GBP high-dose subgroup (all P＞0.05), and decreased in GBP low-dose subgroup compared with insomnia subgroup(P＜0.01). The relative expression of MTNR1 mRNA decreased in insomnia subgroup, GBP low-dose subgroup and GBP high-dose subgroup compared with normal control subgroup (all P＞0.01), had no significant changes in GBP mid-dose subgroup (P＞0.05), and increased in GBP low-dose subgroup, GBP mid-dose subgroup and GBP highdose subgroup compared with insomnia subgroup (all P＜0.01). Conclusion Low-dose, mid-dose and high-dose GBP and Ginaton all have significant meliorating effect on sleep in zebra fishes with insomnia, and the possible mechanism may be the inhibition of GABRA1 expression and melioration of MTNR1 expression.

Zebra fishes; Insomnia; Depression; γ-Aminobutyric acid type A receptor; Melatonin receptor

R749.7

A

1674-4055(2017)03-0326-05

1100029 北京,首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京安貞醫(yī)院心臟中心

劉梅顏,E-mail:china_lmy@hotmail.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2017.03.20