王佳， 馬哿， 黃華興， 梁夢(mèng)迪， 李明卉， 夏添松

論 著

血漿EGF水平對(duì)乳腺癌新輔助化療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值

王佳， 馬哿， 黃華興， 梁夢(mèng)迪， 李明卉， 夏添松

目的 探討血漿表皮生長(zhǎng)因子(EGF)水平變化對(duì)于新輔助化療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值。方法 檢測(cè)2015年9月20日至2016年5月31日江蘇省人民醫(yī)院乳腺外科空心針穿刺活檢證實(shí)為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的49例女性患者(乳腺癌組)新輔助化療前后血漿EGF水平，對(duì)照組為同期入院穿刺活檢證實(shí)為乳腺纖維腺瘤的36例女性患者。新輔助化療方案為EC-T(表阿霉素75 mg/m2靜滴，環(huán)磷酰胺600 mg/m2靜滴，序貫多西他賽100 mg/m2靜滴)，21天為1個(gè)周期，術(shù)前給予8周期化療。血漿EGF檢測(cè)采用ELISA法。分析兩組患者血漿EGF水平差異，乳腺癌患者化療前血漿EGF水平與臨床病理特征的關(guān)系，以及新輔助化療前后不同療效組間EGF的變化情況。結(jié)果 乳腺癌組患者血漿EGF明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。血漿EGF水平與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及術(shù)前穿刺病理標(biāo)本的激素受體狀態(tài)、HER-2狀態(tài)均無(wú)關(guān)。化療前兩組患者EGF水平相近，化療后化療反應(yīng)4～5級(jí)組EGF水平明顯低于化療反應(yīng)1～3級(jí)組(P<0.05)?；煼磻?yīng)4～5級(jí)組EGF化療后水平/化療前水平明顯低于1～3級(jí)組(P<0.05)?；煼磻?yīng)性較差的患者化療后血漿EGF水平明顯上升(P<0.05)，化療反應(yīng)性較好的患者化療后血漿EGF水平明顯下降(P<0.05)。結(jié)論 血漿EGF可能與新輔助化療的療效相關(guān)，監(jiān)測(cè)血漿EGF水平變化對(duì)預(yù)測(cè)乳腺癌新輔助化療療效有一定的作用。

乳腺癌； 新輔助化療； 表皮生長(zhǎng)因子； 療效預(yù)測(cè)

乳腺癌新輔助化療是目前針對(duì)局部晚期乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療之一。新輔助化療可以達(dá)到腫瘤降期的目的，使部分不可手術(shù)的乳腺癌患者獲得手術(shù)機(jī)會(huì)，或滿足部分不可保乳患者的保乳意愿。然而不同患者對(duì)化療的敏感性各不相同。無(wú)效或低效新輔助化療不但延誤患者的治療，也給患者增加無(wú)謂的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，新輔助化療療效的監(jiān)測(cè)主要依靠影像學(xué)方法，但無(wú)論是乳腺超聲還是磁共振成像，對(duì)于療效的評(píng)估都存在一定程度的滯后。如何有效預(yù)測(cè)患者化療敏感性是乳腺癌新輔助化療所面臨的重要問(wèn)題之一。

表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)最早由Levi-Montalcini等[1]發(fā)現(xiàn)，是含有53個(gè)氨基酸殘基的單鏈多肽類物質(zhì)。EGF是表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的配體之一，是一種強(qiáng)效的有絲分裂促進(jìn)因子。近年來(lái)，EGF在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用受到廣泛關(guān)注。目前，大量研究已經(jīng)證實(shí)EGFR與頭頸部惡性腫瘤、消化系統(tǒng)腫瘤、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤存在密切關(guān)系[2-4]。在乳腺癌中，已有多項(xiàng)研究表明EGFR/EGF信號(hào)通路在乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用且與不良預(yù)后相關(guān)[5-6]。但是，血漿游離EGF水平與乳腺癌患者化療療效的關(guān)系，尤其是在新輔助化療療效的預(yù)測(cè)中的作用研究尚少。本研究通過(guò)觀察49例局部晚期乳腺癌患者新輔助化療前后的血漿EGF水平，探討血漿EGF水平變化對(duì)于新輔助化療療效的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 乳腺癌患者外周血標(biāo)本取自2015年9月20日至2016年5月31日江蘇省人民醫(yī)院乳腺外科空心針穿刺活檢證實(shí)為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的49例女性患者，平均年齡49.8歲。對(duì)照組為同期入院穿刺活檢證實(shí)為乳腺纖維腺瘤的36例女性患者，平均年齡36.9歲。采血時(shí)間為患者首次入院當(dāng)日，接受新輔助化療的乳腺癌患者在化療結(jié)束后，術(shù)前進(jìn)行第二次采血。所有患者均為清晨空腹采血。采血材料為EDTA抗凝真空采血管，每次采血量約為3 ml，采血后2 h內(nèi)進(jìn)行血漿分離，置于-80℃保存待測(cè)。

1.2 治療方案 所有乳腺癌患者均于術(shù)前行空心針穿刺活檢，穿刺標(biāo)本由江蘇省人民醫(yī)院病理科行免疫組化染色。化療方案為EC-T：表阿霉素75 mg/m2靜滴、環(huán)磷酰胺600 mg/m2靜滴，序貫多西他賽100 mg/m2靜滴。21天為1個(gè)周期，術(shù)前給予8周期化療。化療結(jié)束后行乳房全切術(shù)+前哨淋巴結(jié)活檢±腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)。

1.3 血漿EGF測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定血漿EGF水平。試劑盒購(gòu)自杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司，具體操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書執(zhí)行。根據(jù)說(shuō)明書繪制EGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，并按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品EGF濃度。

1.4 療效評(píng)價(jià) 新輔助化療的療效評(píng)價(jià)根據(jù)術(shù)后病理Miller-Payene分級(jí)系統(tǒng)，將化療前粗針穿刺標(biāo)本與化療后的手術(shù)標(biāo)本進(jìn)行比較，根據(jù)殘余的細(xì)胞豐度進(jìn)行分級(jí)。1級(jí)：浸潤(rùn)性癌細(xì)胞無(wú)改變或僅個(gè)別癌細(xì)胞發(fā)生改變，癌細(xì)胞數(shù)量總體未減少；2級(jí)：浸潤(rùn)性癌細(xì)胞輕度減少，但總數(shù)量仍高，癌細(xì)胞減少不超過(guò)30%；3級(jí)：浸潤(rùn)性癌細(xì)胞減少介于30%～90%；4級(jí)：浸潤(rùn)性癌細(xì)胞顯著減少超過(guò)90%，僅殘存散在的小簇狀癌細(xì)胞或單個(gè)癌細(xì)胞；5級(jí)：原腫瘤瘤床部位已無(wú)浸潤(rùn)性癌細(xì)胞，但可存在導(dǎo)管原位癌[7]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。不同組別血漿EGF表達(dá)水平均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或配對(duì)t檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿EGF水平比較 檢測(cè)結(jié)果顯示，乳腺癌組血漿EGF含量為(74.81±39.16)pg/ml，明顯高于對(duì)照組的(26.26±25.10)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖1。

2.2 血漿EGF水平與乳腺癌分期及分子病理特征的關(guān)系 乳腺癌組血漿EGF水平與患者的年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及術(shù)前穿刺病理標(biāo)本的激素受體狀態(tài)、HER-2狀態(tài)均無(wú)關(guān)(均P>0.05)，見表1。

圖1 乳腺癌組與對(duì)照組患者血漿EGF的表達(dá)水平，** P<0.001

表1 乳腺癌患者血漿EGF水平與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 新輔助化療前后血漿EGF水平與患者化療療效的關(guān)系 49例乳腺癌患者均完成新輔助化療全療程治療?；熀蟾鶕?jù)Miller-Payne分級(jí)評(píng)估患者病理反應(yīng)性：1級(jí)8例，2級(jí)9例，3級(jí)11例，4級(jí)13例，5級(jí)8例。1～3級(jí)占57.14%(28/49)，4～5級(jí)占4.86%(21/49)?；熐?～3級(jí)組與4～5級(jí)組患者的血漿EGF水平分別為(79.08±45.38)pg/ml和(69.12±29.01)pg/ml，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Miller-Payne分級(jí)化療反應(yīng)4～5級(jí)組的血漿EGF水平為(33.38±29.80)pg/ml，明顯低于化療反應(yīng)1～3級(jí)組的(132.15±72.13)pg/ml(P<0.05)。進(jìn)一步比較這兩組間血漿EGF指標(biāo)在化療前后的變化，可以發(fā)現(xiàn)化療反應(yīng)4～5級(jí)組血漿EGF化療后水平/化療前水平明顯低于1～3級(jí)組(P<0.05)，見表2。根據(jù)療效分組后，分別比較兩組患者化療前后的血漿EGF變化，可以發(fā)現(xiàn)化療反應(yīng)性較差的患者化療后血漿EGF水平明顯上升(P<0.05)，而化療反應(yīng)性較好的患者化療后血漿EGF水平明顯下降(P<0.05)，見圖2。

表2 血漿EGF水平與新輔助化療療效間的關(guān)系

圖2 新輔助化療患者化療前后血漿EGF水平的變化，**P<0.001

3 討論

本研究顯示，乳腺癌患者血漿中EGF水平明顯高于乳腺纖維腺瘤患者，提示EGF與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)。已有研究證實(shí)，EGF水平在肺癌、胃癌等患者血清中水平升高[8-9]。在乳腺癌的相關(guān)研究中，國(guó)內(nèi)學(xué)者報(bào)道乳腺癌患者血清中EGF水平明顯高于對(duì)照組，而EGF水平在發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清中升高更加明顯[10]，這一研究結(jié)果與本研究一致。在本研究中，不同亞型或分期的乳腺癌患者血漿EGF水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。新輔助化療后共21例患者化療反應(yīng)較好，結(jié)果表明療效好的患者化療后血漿EGF的水平下降明顯，而在療效較差的28例患者中血漿EGF水平未見降低。曲嫻等[11]發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞自身也可以分泌EGF，進(jìn)而作用于細(xì)胞膜表面EGFR達(dá)到促進(jìn)增殖的效應(yīng)。曾有學(xué)者檢測(cè)了荷瘤小鼠化療前后血清EGF的水平變化，證明阿霉素能以濃度依賴性的方式降低血清EGF蛋白水平，進(jìn)而降低腫瘤細(xì)胞的分裂增殖[12]。部分患者接受化療可能正是打破了EGF/EGFR這一自身刺激的環(huán)路抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖，同時(shí)導(dǎo)致血漿EGF水平急劇下降，而對(duì)于化療不敏感的患者，血漿EGF水平則保持在相對(duì)較高的水平。

新輔助化療后原發(fā)灶達(dá)到病理完全緩解的患者可以顯著延長(zhǎng)無(wú)進(jìn)展生存期，化療過(guò)程中病理緩解分級(jí)4～5級(jí)的患者血漿EGF水平明顯下降，提示血漿EGF可能與新輔助化療的療效相關(guān)。血漿EGF水平監(jiān)測(cè)對(duì)乳腺癌新輔助化療的療效存在一定的預(yù)測(cè)作用。

[1] Levi-montalcini R, Cohen S. Effects of the extract of the mouse submaxillary salivary glands on the sympathetic system of mammals[J]. Ann N Y Acad Sci, 1960, 85: 324-341.

[2] Ang KK, Berkey BA, Tu X, et al. Impact of epidermal growth factor receptor expression on survival and pattern of relapse in patients with advanced head and neck carcinoma[J]. Cancer Res, 2002, 62(24): 7350-7356.

[3] Wang L, Yuan H, Li Y, et al. The role of HER3 in gastric cancer[J]. Biomedecine & pharmacotherapie, 2014, 68(6): 809-812.

[4] Paek AR, Lee C, You HJ. A role of zinc-finger protein 143 for cancer cell migration and invasion through ZEB1 and E-cadherin in colon cancer cells[J]. Mol Carcinog, 2014，53 Suppl 1:E161-E168.

[5] Hardy KM, Booth BW, Hendrix MJ, et al. ErbB/EGF signaling and EMT in mammary development and breast cancer[J]. J Mammary Gland Biol Neoplasia, 2010, 15(2): 191-199.

[6] McIntyre E, Blackburn E, Brown PJ, et al. The complete family of epidermal growth factor receptors and their ligands are co-ordinately expressed in breast cancer[J]. Breast Cancer Res Treat, 2010, 122(1): 105-110.

[7] 楊文濤, 步宏. 乳腺癌新輔助化療后的病理診斷專家共識(shí)[J]. 中華病理學(xué)雜志, 2015, 44(4): 232-236.

[8] Blanco-Prieto S, Vázquez-Iglesias L, Rodríguez-Girondo M, et al. Serum calprotectin, CD26 and EGF to establish a panel for the diagnosis of lung cancer[J]. PLoS One, 2015, 10(5): e0127318.

[9] Masiak W, Szponar A, Chodorowska G, et al. Evaluation of endostatin and EGF serum levels in patients with gastric cancer[J]. Pol Przegl Chir, 2011, 83(1): 42-47.

[10] 宋紅蕾, 盧緒章, 畢延智, 等. 血清EGF及TRACP-5b水平在乳腺癌患者骨轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 甘肅醫(yī)藥, 2012, 31(12): 894-895.

[11] 曲嫻, 陳杰, 劉彤華, 等. 人結(jié)腸癌中EGFR、EGF及TGF-α的基因表達(dá)[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào), 1994, 16(4): 259-263.

[12] 郭春寶, 陳峰, 金先慶. 荷瘤小鼠多柔比星化療后表皮生長(zhǎng)因子(EGF)表達(dá)的檢測(cè)[J]. 中國(guó)癌癥雜志, 2004, 14(3): 251-253,257.

Predictive role of plasma EGF level for efficacy of neoadjuvant chemotherapy in patients with breast cancer

WANGJia1,MAGe1,HUANGHuaxing2,LIANGMengdi1,LIMinghui1,XIATiansong1.

(1.DepartmentofBreastSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing210029,China；2.DepartmentofGeneralSurgery,NanjingMedicalUniversity,Nanjing211166,China)

Correspondingauthor：XIATiansong,Email：xiatsswms@163.com

Objective To explore the predictive value of the epidermal growth factor (EGF) in plasma in neoadjuvant chemotherapy (NCT) in breast cancer. Methods A total of 49 patients with breast carcinoma and 36 females with fibroadenoma from Department of Breast Surgery, the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University from September 20, 2015 to May 31, 2016 was included in this study. Patients with breast cancer received EC-T regimen (epirubincin 75 mg/m2iv d1, cyclophosphamide 600 mg/m2iv d1, and docetaxel 100 mg/m2iv d1) for 8 cycles with 21 days per cycle. The level of plasma EGF was detected by ELISA. The difference between patients with breast cancer and the negative control group was analyzed. The relationship between clinical efficacy of NCT, clinicopathological features and plasma EGF was analyzed. Results Levels of plasma EGF were significantly increased in patients with breast cancer compared with the control group (P<0.05). No significant differences were observed among age, lymph node metastasis, biopsy results and HER-2 status. The levels of plasma EGF of pre-neoadjuvant chemotherapy between different groups of chemotherapy response showed no significance. The plasma EGF level of the chemotherapy response 4～5 grade group decreased significantly after NCT (P<0.05). The plasma EGF level of 1～3 grade group increased significantly after NCT (P<0.05). The plasma EGF level was significantly increased in patients with poor response to chemotherapy (P<0.05), and significantly decreased in patients with better response to chemotherapy after NCT (P<0.05). Conclusions The plasma EGF level is related with the efficacy of NCT. Monitoring of the level of plasma EGF may predict the efficacy of NCT in breast cancer.

Breast cancer; Neoadjuvant chemotherapy; Epidermal growth factor; Efficacy prediction

210029 江蘇 南京，南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 乳腺病科(王佳，馬哿，梁夢(mèng)迪，李明卉，夏添松)；211166 江蘇 南京，南京醫(yī)科大學(xué) 外科學(xué)總論教研室(黃華興)

夏添松，Email：xiatsswms@163.com

10.3969/j.issn.1674-4136.2017.01.003

1674-4136(2017)01-0009-04

2016-12-20][本文編輯：李慶]