徐 超，周 波，王曉紅

(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，沈陽(yáng) 110034)

市售大豆油中維生素K1的含量

徐 超，周 波，王曉紅

(沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，沈陽(yáng) 110034)

目的：測(cè)定29種市售大豆油中維生素K1含量，分析比較不同原料、工藝及等級(jí)大豆油之間維生素K1含量的異同。方法：采用SPE硅膠柱萃取油脂中維生素K1，用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定每種樣品中維生素K1含量。結(jié)果：大豆油中維生素K1含量范圍由未檢出至215μg/100g，其中三級(jí)大豆油維生素K1平均含量為145.94±36.05μg/100g、一級(jí)大豆油維生素K1平均含量為126.69±24.44μg/100g，三級(jí)顯著高于一級(jí)(P=0.019)。原料為轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆、生產(chǎn)工藝為浸出法和壓榨法間大豆油中維生素K1含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：深色的三級(jí)大豆油中維生素K1含量豐富。

大豆油；維生素K1；HPLC

維生素K為人體必需的脂溶性維生素，具有促進(jìn)凝血、參與骨骼代謝、維持心血管健康等諸多功能。人體維生素K1主要來(lái)源于綠葉蔬菜(如菠菜、甘藍(lán)、萵苣等)與大豆及其制品。我國(guó)已制定蔬菜和乳制品中維生素K1含量的測(cè)定方法[1-2]，由于缺乏良好的提取和分析方法，國(guó)內(nèi)尚無(wú)測(cè)定大豆油中維生素K1的標(biāo)準(zhǔn)方法。目前，測(cè)定食品中維生素K1的方法中高效液相色譜法(HPLC)以高效、高靈敏度、應(yīng)用范圍廣和分析速度快等特點(diǎn)而受到廣泛應(yīng)用，而測(cè)定大豆油中維生素K1含量的關(guān)鍵是如何進(jìn)行分離提取，去除各種干擾物質(zhì)并避免維生素K1破壞。近年來(lái)，色譜分析前用前處理簡(jiǎn)單、萃取時(shí)間短、提取效率高、重現(xiàn)性好的固相萃取法對(duì)樣品進(jìn)行前處理被越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)學(xué)者研究和應(yīng)用[3-6]。

迄今為止，我國(guó)食物成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)中尚沒(méi)有全面的食物維生素K1含量數(shù)據(jù)，已有研究報(bào)道蔬菜類維生素K1含量[7]，但缺少大豆及大豆制品的有關(guān)數(shù)據(jù)。我國(guó)市場(chǎng)上大豆油種類繁多，有研究測(cè)定了大豆油中維生素K1含量[8]，但未見(jiàn)大豆油制取原料及工藝等對(duì)維生素K1含量影響的相關(guān)報(bào)道，故本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了大豆油中維生素K1提取方法，對(duì)不同種類的市售29種大豆油中維生素K1含量進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定并分析結(jié)果，所取得的結(jié)果對(duì)分析大豆油營(yíng)養(yǎng)成分和研究人群維生素K1膳食攝入量具有很好的參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

UV1201紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器、AS1201自動(dòng)進(jìn)樣器、RO1201溶劑管理器、P1201高壓恒流泵、EC2006色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，大連依利特公司；SPE硅膠柱(6mL，1g)，美國(guó)Agilent；Laborota 4001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，德國(guó)Heidolph；SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵，予華儀器廠；Eppendorf AG5305隔膜真空泵，New Brunswick；SC-2546型低速離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；G-560E漩渦振蕩器，美國(guó)Bohemia。

正己烷(色譜純)、甲醇(色譜純)、維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%)，美國(guó)Sigma公司；乙醚(分析純)、正己烷(分析純)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：安捷倫C18柱(4.6mm×250mm，5μL)；柱溫：30℃；流動(dòng)相：甲醇：正己烷(98：2，v/v)；檢測(cè)波長(zhǎng)248nm；進(jìn)樣量：20μL；流速：1.5mL/min。

1.3 方法

1.3.1 樣品 在市場(chǎng)上選購(gòu)成品大豆油29種。采用的原料是轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆；加工工藝有浸出法和壓榨法；等級(jí)有一級(jí)和三級(jí)兩種。所有樣品均在保質(zhì)期內(nèi)，購(gòu)回后置于陰涼避光處存放。

1.3.2 樣品處理 所有操作在避光室內(nèi)微弱黃光燈下進(jìn)行。每個(gè)樣品同時(shí)做3個(gè)平行樣，變異系數(shù)大于15%時(shí)重復(fù)測(cè)定。取0.1g油樣(精確至0.001g)溶于5mL正己烷，劇烈震蕩5min，離心5min(3 000r/min)，取4.5mL上清液。將SPE硅膠柱(6mL，1g，Agilent)，分別用8mL正己烷-乙醚(97：3，v/v)和8mL正己烷將SPE柱活化后，提取液以1.0mL/min流速過(guò)柱，用8mL正己烷以1.0mL/min流速淋洗小柱，最后分5次加入20mL正己烷-乙醚(97：3，v/v)溶液洗脫，收集洗脫液濃縮吹干，用5mL正己烷溶解殘?jiān)D(zhuǎn)移至試管低溫濃縮30min，加1mL正己烷定容離心5min，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾后上機(jī)分析。

1.3.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法驗(yàn)證

按中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》(GB/T 27404-2008)[9]驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果顯示，本方法的重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)差(STD%)和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(RSD%)分別為17.87%和2.91%；標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)達(dá)到99.9%以上；最低檢出限為0.0625μg/mL；絕對(duì)回收率為103.58%，加標(biāo)回收率為79.00%，由此可見(jiàn)本研究所采用的方法準(zhǔn)確可靠。

2.2 大豆油維生素K1含量

29種大豆油樣品中維生素K1含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)附表，含量范圍由未檢出至215μg/100g不等，平均含量為140.92±33.99μg/100g。大豆油中維生素K1含量在數(shù)值上可以看出，轉(zhuǎn)基因浸出法的三級(jí)大豆油含量最高，不同原料間轉(zhuǎn)基因高于非轉(zhuǎn)基因；相同原料相同工藝條件下三級(jí)高于一級(jí)。

附表 不同種類大豆油中維生素K1含量 單位：μg/100g

注：用t檢驗(yàn)對(duì)均值進(jìn)行兩兩比較，一級(jí)與三級(jí)大豆油中維生素K1的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

2.3 不同原料大豆油中維生素K1含量

在相同生產(chǎn)工藝下，一級(jí)轉(zhuǎn)基因大豆油與一級(jí)非轉(zhuǎn)基因大豆油(P=0.742)、三級(jí)轉(zhuǎn)基因與三級(jí)非轉(zhuǎn)基因大豆油中(P=0.851)維生素K1的含量沒(méi)有顯著性差異。

2.4 不同生產(chǎn)工藝大豆油中維生素K1含量

本次研究中工藝為壓榨法的樣本均為非轉(zhuǎn)基因三級(jí)大豆油，而上述結(jié)果表明不同原料大豆油中維生素K1含量沒(méi)有差異，因此，僅比較浸出法與壓榨法制取的非轉(zhuǎn)基因三級(jí)大豆油中維生素K1含量的區(qū)別，結(jié)果表明，浸出法與壓榨法制取的大豆油中維生素K1含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.176)。

2.5 不同等級(jí)大豆油中維生素K1含量

由上述結(jié)果可以看出，轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因間、浸出法與壓榨法間大豆油中維生素K1含量分析比較結(jié)果顯示差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此，將轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因、壓榨法與浸出法的大豆油合并后按級(jí)別分類，即比較一級(jí)與三級(jí)大豆油中維生素K1的含量，結(jié)果表明，三級(jí)大豆油維生素K1平均含量為145.94±36.05μg/100g，一級(jí)大豆油維生素K1平均含量為126.69±24.44μg/100g，三級(jí)顯著高于一級(jí)(P=0.017)，由此可見(jiàn)，深色的三級(jí)大豆油中維生素K1含量豐富。

3 討論

3.1 樣品預(yù)處理方法的優(yōu)化

3.2 大豆油維生素K1含量范圍

本次實(shí)驗(yàn)測(cè)定了29種大豆油，其中包括不同原料(轉(zhuǎn)基因原料和非轉(zhuǎn)基因原料)、不同工藝(壓榨法和浸出法)、不同等級(jí)(一級(jí)和三級(jí)品)，基本覆蓋了市售大豆油的品種，具有較好的代表性。美國(guó)食物成分表中大豆油維生素K1含量為183.9μg/100g[10]，日本《食物成分表》(第七版，2015)中大豆油維生素K1含量為210μg/100g[11]；日本Kamao等測(cè)定的大豆油中維生素K1的平均含量為234±48μg/100g[12]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果平均含量為140.92±33.99μg/100g，范圍為未檢出至215μg/100g，由于不同國(guó)家、地區(qū)因地理環(huán)境、植物種類等存在差異，因此測(cè)定結(jié)果不完全相同。

3.3 大豆油維生素K1含量的影響因素

3.3.1 不同生產(chǎn)原料對(duì)大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結(jié)果顯示，原料為轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因大豆的樣品間維生素K1的含量沒(méi)有顯著性差異，認(rèn)為原料對(duì)大豆油中維生素K1的含量沒(méi)有影響。近年來(lái)，轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因大豆的安全性及產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀得到廣泛關(guān)注，國(guó)內(nèi)外研究者大多致力于大豆改良育種技術(shù)及安全性研究[13-15]，而關(guān)于轉(zhuǎn)基因大豆油的研究較少，未見(jiàn)轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因大豆油中維生素含量的相關(guān)報(bào)道。

3.3.2 不同生產(chǎn)工藝對(duì)大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結(jié)果顯示，不同生產(chǎn)工藝的大豆油中維生素K1含量沒(méi)有差異。目前，我國(guó)食用油在制作工藝上基本分為“浸出法”和“壓榨法”，壓榨油和浸出油在生產(chǎn)過(guò)程中都需通過(guò)堿煉、脫色、脫臭等化工過(guò)程進(jìn)行精煉才能成為可食用的成品油，并由此提出衡量食用成品油品質(zhì)的根據(jù)不是制油工藝(是壓榨還是浸出)，而是國(guó)家為各類食用油制定的指標(biāo)體系[16]，由此可見(jiàn)，生產(chǎn)工藝并不是大豆油中維生素K1含量的影響因素。

3.3.3 不同等級(jí)對(duì)大豆油中維生素K1含量的影響 本次研究結(jié)果表明，一級(jí)大豆油中維生素K1含量低于三級(jí)大豆油。我國(guó)最新制定大豆油國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 1535-2003)對(duì)成品油按質(zhì)量要求一級(jí)油較三級(jí)油多了脫色、脫臭、脫脂等精煉工序處理[17]。化學(xué)精煉工藝中要經(jīng)過(guò)堿煉環(huán)節(jié)，脫色對(duì)進(jìn)一步降低脫膠油或堿煉油中的磷脂含量和皂類物質(zhì)含量是非常重要的工作，目前在植物油精煉過(guò)程中所采用的脫色工藝基本上都使用活性白土，即用白土吸附脫色，也就是說(shuō)白土對(duì)皂類物質(zhì)的吸附先于色素物質(zhì)[18]，而維生素K1遇堿易分解，所以脫色可能是導(dǎo)致一級(jí)大豆油中維生素K1減少的原因。由此可見(jiàn)，顏色較深的三級(jí)大豆油維生素K1含量高于脫色處理的一級(jí)大豆油。但是本次僅為初步實(shí)驗(yàn)室研究，大豆油中維生素K1含量與精煉工藝之間的關(guān)系需要進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí)，進(jìn)而豐富食物中維生素K1含量的數(shù)據(jù)。

4 結(jié)論

市售大豆油中維生素K1含量豐富，其中維生素K1含量三級(jí)大豆油高于一級(jí)大豆油?！?/p>

[1]GB/T5009.158-2003，蔬菜中維生素K1的測(cè)定[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/CN/2003/GBT%205009.158-2003.shtml.

[2]GB 5413.10-2010.嬰幼兒食品和乳品中維生素K1的測(cè)定[S].http：//www.spsp.gov.cn/page/CN/2010/GB%205413.10-2010.shtml.

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[11]科學(xué)技術(shù)·學(xué)術(shù)政策局政策課資源室.日本食品標(biāo)準(zhǔn)成分表2015年版(七訂)[DB/OL].http：//www.mext.go.jp/a_menu/syokuhinseibun/1365297.htm.2016-05-21.

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[18]周斌.白土吸附和脫臭工藝在精煉過(guò)程中的作用[J].中國(guó)油脂，2003，28(6)：15-16.

(責(zé)任編輯 李婷婷)

Contents of Vitamin K1in Commercially Available Soybean Oils

XU Chao，ZHOU Bo，WANG Xiao-hong

(Department of Nutrition and Food Hygiene，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China)

soybean oil；vitamin K1；HPLC

沈陽(yáng)市科學(xué)技術(shù)局項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：F13-302-1-00)。

徐超(1987— )，女，碩士研究生，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與慢性病。

周波(1963— )，女，博士，教授，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與慢性病。