馬孝湘，劉玉萍，王 林，何 霞，楊雁華，陳曉平

(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 a.健康管理中心； b.藥物基因組實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610072； 2.四川大學(xué)華西醫(yī)院心內(nèi)科，四川 成都 610041)

漢族人群乙醛脫氫酶2基因Glu504Lys多態(tài)性與原發(fā)性高血壓患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度增厚的關(guān)系及其機(jī)制研究

馬孝湘1a，2，劉玉萍1a，王 林1a，何 霞1b，楊雁華1a，陳曉平2

(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院 a.健康管理中心； b.藥物基因組實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610072； 2.四川大學(xué)華西醫(yī)院心內(nèi)科，四川 成都 610041)

目的 探討漢族人群ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)性與原發(fā)性高血壓(Essential hypertension，EH)患者頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(CIMT)增厚之間的關(guān)系及其作用機(jī)制。方法 選擇四川省人民醫(yī)院進(jìn)行體檢的EH患者414例，根據(jù)CIMT厚度分為CIMT增厚組與CIMT正常組，對(duì)CIMT增厚組行肱動(dòng)脈血流介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張功能(FMD)檢測(cè)；分析不同基因型與CIMT增厚的關(guān)系及CIMT增厚組中不同基因型攜帶者與FMD的相關(guān)性。結(jié)果 CIMT增厚組AG型、AA型、AA/AG基因型及A等位基因頻率顯著高于CIMT正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。 Logistic 回歸分析顯示ALDH2基因Glu504Lys AA/AG基因與CIMT增厚相關(guān)。多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，CIMT增厚組中ALDH2基因Glu504Lys AA/AG基因型與FMD值的降低獨(dú)立相關(guān)；將FMD作為變量納入回歸分析后，ALDH2基因多態(tài)性與CIMT的相關(guān)性較之前明顯降低。結(jié)論 漢族人群ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)性與EH患者CIMT增厚存在相關(guān)性，ALDH2基因Glu504Lys 突變可能通過(guò)使血管EDD發(fā)生障礙導(dǎo)致EH發(fā)生CIMT增厚。

乙醛脫氫酶2；基因；原發(fā)性高血壓；頸動(dòng)脈內(nèi)膜中膜厚度

人類乙醛脫氫酶2(Aldehyde dehydrogenase，ALDH2)為位于線粒體基質(zhì)的同源四聚體酶。近年來(lái)有研究顯示，ALDH2酶活性降低會(huì)增加體內(nèi)的氧化應(yīng)激，從而增加原發(fā)性高血壓(Essential hypertension，EH)的易感性，其基因多態(tài)性可能是EH的遺傳危險(xiǎn)因素之一，也可能與動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)進(jìn)展及內(nèi)皮功能損傷相關(guān)[1～3]。由于ALDH2基因存在遺傳多態(tài)性，尤其是在我國(guó)，ALDH2基因Glu504Lys突變發(fā)生率高達(dá)30%～50%[4]，而我國(guó)EH發(fā)病率仍在持續(xù)上升，超過(guò)半數(shù)以上的心血管疾病發(fā)病均與EH有關(guān)[3]。因此，我們推測(cè)ALDH2基因多態(tài)性可能在我國(guó)EH患者AS改變的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)與EH伴發(fā)AS關(guān)系的研究不多，且結(jié)論尚不一致[5～7]。因此，本研究擬探討漢族人群ALDH2基因SNP位點(diǎn)Glu504Lys的多態(tài)性與EH早期AS相關(guān)的指標(biāo)——頸動(dòng)脈內(nèi)膜中層厚度(Carotid intima-media thickness，CIMT)之間的關(guān)聯(lián)，并進(jìn)一步探討ALDH2基因Glu504Ly突變是否通過(guò)使血管EDD發(fā)生障礙導(dǎo)致EH患者發(fā)生CIMT增厚。為我國(guó)EH伴發(fā)AS的發(fā)病機(jī)制研究、早期預(yù)防和個(gè)體化診治以及將來(lái)可能的基因診斷、基因治療提供一定的基礎(chǔ)理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取在四川省人民醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢的EH患者414例，均為漢族人群，且均在4周內(nèi)未服用降脂藥或抗氧化藥物，高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《JNC-7高血壓指南》[8]，排除繼發(fā)性高血壓、外周血管疾病、心腦血管疾病、內(nèi)分泌疾病及各種原因?qū)е碌男?、肝腎等重要臟器功能不全者。根據(jù)頸動(dòng)脈多普勒超聲檢測(cè)得到的CIMT值大小分為兩組[9]:為CIMT增厚組(CIMT≥0.9 mm)及CIMT正常組(CIMT<0.9 mm)。其中CIMT增厚組281例，男153例，女128例，年齡(60.25±14.76)歲，CIMT(1.28±0.24)mm；CIMT正常組133例，男80例，女53例，年齡(58.87±13.68)歲，CIMT(0.77±0.11)mm。兩組性別、年齡、血脂、血糖、心率等比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有患者均自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè) 所有受試者于檢查日清晨禁食12 h后采集外周靜脈血7 ml，取靜脈血2 ml，加至EDTA抗凝管中。采用DNA微陣列芯片法[10]提取和純化DNA并得到樣本ALDH2基因型。 將芯片的欲掃描面向上，放入芯片掃描儀中，點(diǎn)開(kāi)Array Doctor軟件，掃描出ALDH2基因Glu504Lys共有三種基因型:GG型(Glu504 glu)、AG型(Glu504Lys)和AA型(Lys504Lys)。 將剩余5 ml外周靜脈血不抗凝迅速分離血清，用于各項(xiàng)生化指標(biāo)的檢測(cè)。并進(jìn)一步將CIMT增厚組分為野生型組者[攜帶GG基因型(ALDH2*1/*1，Glu504 glu)，共有71例]和突變型組攜帶者[AA/AG基因型(ALDH2*1/*2，Glu504Lys和ALDH2*2/*2，Lys504Lys)，共有210例]兩個(gè)亞組。

1.2.2 血管EDD檢測(cè) 受檢者臥姿休息至少15分鐘后，運(yùn)用通用型超聲波圖像診斷裝置UNEXEF18 g(北京百世貿(mào)易有限公司)進(jìn)行血流介導(dǎo)的內(nèi)皮依賴性舒張功能(Flow-mediated dilation，F(xiàn)MD)測(cè)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?；蝾l率通過(guò)直接計(jì)數(shù)法來(lái)計(jì)算，使用哈迪-溫伯格平衡(Hardy-weinberg equilibrium)定律檢驗(yàn)樣本代表性。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用多因素非條件Logistic回歸分析基因型與CIMT增厚的關(guān)系，應(yīng)用多元線性回歸分析基因多態(tài)性與CIMT增厚中血管EDD的關(guān)系。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)性基因型及等位基因分布比較 各組ALDH2基因Glu504Lys基因型分布均符合HWE平衡定律(P> 0.05)，說(shuō)明樣本具有群體代表性。CIMT增厚組AG型、AA型、AA/AG基因型和A等位基因頻率均顯著高于CIMT正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)性基因型及等位基因分布比較

2.2 CIMT增厚組中兩亞組的FMD值比較 對(duì)CIMT增厚組患者行血管內(nèi)皮功能檢測(cè)結(jié)果顯示，突變型組與野生型組的FMD值分別為:(5.60±2.12)% vs(9.89±2.62)%，突變型組的FMD值較野生型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.324，P= 0.011)。

2.3 CIMT增厚影響因素作用的Logistic回歸分析 以ALDH2基因Glu504Lys 基因型為自變量，CIMT增厚為因變量進(jìn)行 Logistic 回歸分析，調(diào)整危險(xiǎn)因素后，結(jié)果仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0.015，OR=3.326，95%CI:1.711～13.024)，表明ALDH2基因Glu504Lys AA/AG基因型是影響EH患者CIMT增厚的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表2。

表2 ALDH2基因Glu504Lys基因型與EH的Logistic回歸分析

Modle1:單因素分析；Modle 2:調(diào)整年齡、性別、飲酒史、吸煙史、高血壓家族史、BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、空腹血糖

2.4 多元線性回歸分析 多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，校正混雜因素后，CIMT增厚組中，ALDH2基因Glu504Lys AA/AG基因型與FMD值降低呈獨(dú)立相關(guān)(P=0.014，OR =3.568，95%CI:1.164～9.223)。另外，在分析ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)與CIMT增厚關(guān)系的Logistic回歸中，將FMD值作為獨(dú)立變量納入后降低了CIMT增厚組ALDH2基因Glu504Lys突變型在Logistic回歸模型中的重要性(P=0.028，OR=2.013，95%CI:1.289～11.335)。

3 討論

人類ALDH2是由線粒體內(nèi)位于12號(hào)染色體的ALDH2基因編碼，存在高度遺傳多態(tài)性[4]。ALDH2基因第12外顯子發(fā)生一個(gè)鳥(niǎo)嘌呤(G)到腺嘌呤(A)的點(diǎn)突變(Glu504Lys)，這個(gè)單核苷酸多態(tài)性突變使ALDH2第504位氨基酸發(fā)生變化，即Glu被Lys替[11]。因此存在ALDH2*1和ALDH2*2兩種等位基因，并擁有野生型純合子GG型、突變型雜合子AG型和突變型純合子AA型三種基因型。突變型雜合子AG型僅有大約6%的酶活性，而突變型純合子AA幾乎沒(méi)有酶活性[1]。ALDH2基因在亞洲人群中的突變率顯著高于歐美白種人。

頸動(dòng)脈位置表淺，病變出現(xiàn)較早，使用高分辨率B型多普勒超聲測(cè)定CIMT能精確和形象地描述頸AS引起的血管壁改變，是衡量AS早期改變的可靠指標(biāo)。大量研究證實(shí)，遺傳及氧化應(yīng)激均在AS的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色[12]。而ALDH2是體內(nèi)重要的抗氧化應(yīng)激分子，在心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[1]。故我們猜測(cè)ALDH2可能與AS的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。為此我們探討了ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)性與EH患者CIMT的相關(guān)性。為便于統(tǒng)計(jì)，我們將突變雜合型與突變純合型歸為一組(AA/AG 基因型)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，CIMT增厚組AG型、AA型、AA/AG和A等位基因頻率均顯著高于CIMT正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。提示ALDH2基因Glu504Lys多態(tài)性與EH患者的CIMT存在相關(guān)性。進(jìn)一步行Logistic回歸分析顯示，調(diào)整危險(xiǎn)因素后ALDH2基因Glu504LysAA/AG基因與CIMT增厚相關(guān)，說(shuō)明ALDH2基因Glu504Lys AA/AG基因型是影響EH患者CIMT增厚的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此結(jié)論與我們的猜測(cè)一致。

有研究表明ALDH2 突變型基因可通過(guò)抗氧化應(yīng)激，加重內(nèi)皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙[1]。由于AS的形成最早是從血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)的完整性和功能的受損開(kāi)始的，而CIMT增厚是AS早期改變的可靠指標(biāo)，故而我們推測(cè)，不同的ALDH2基因Glu504Lys基因型表達(dá)不同的活性可能通過(guò)影響血管內(nèi)皮功能進(jìn)而導(dǎo)致EH患者CIMT增厚的發(fā)生。因此，我們又進(jìn)一步將CIMT增厚組劃分為野生型組和突變型組兩個(gè)亞組，觀察了兩個(gè)亞組中FMD值的差異。我們采用新近研究成功的一種先進(jìn)的專門用于肱動(dòng)脈FMD檢測(cè)的超聲儀器UNEX-EF來(lái)檢測(cè)FMD值以反應(yīng)血管舒張功能的變化。結(jié)果顯示，突變型組較野生型組的FMD值明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P= 0.011)。多元線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，校正因素后，CIMT增厚組中，ALDH2基因Glu504Lys AA/AG基因型與FMD值降低呈獨(dú)立相關(guān)，并且，將與FMD作為獨(dú)立變量納入回歸分析后，ALDH2基因多態(tài)性與EH伴CIMT的相關(guān)性出現(xiàn)較明顯的降低。這一結(jié)果提示，ALDH2基因突變可能通過(guò)引起血管EDD障礙，進(jìn)而導(dǎo)致EH患者發(fā)生CIMT增厚。推測(cè)其機(jī)制可能為:突變型ALDH2活性明顯降低甚至喪失，可促使體內(nèi)氧化應(yīng)激顯著增加，損傷內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮通透性增加，導(dǎo)致血管EDD障礙[1]，促使脂質(zhì)遷移至動(dòng)脈內(nèi)膜下，發(fā)生血管內(nèi)膜增厚及脂質(zhì)斑塊形成 。另外，突變型ALDH2基因使硝酸甘油在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化為NO的過(guò)程受阻，從而使具有生物活性的 NO 減少以及 NO 的生物利用度降低，導(dǎo)致血管EDD障礙，最終促進(jìn)AS的發(fā)生和發(fā)展。

但是，由于AS為多基因復(fù)雜性疾病，且ALDH2基因分布存在明顯的種族和地域差異，因此未來(lái)還需設(shè)計(jì)多方面、大規(guī)模的研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證以上結(jié)論。

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The relationship and its mechanism between Glu504Lys polymorphism of aldehyde dehydrogenase 2 in Han population and thickening of the carotid intima-media thickness in essential hypertension patients

MA Xiao-xiang1a，2，LIU Yu-ping1a，Wang lin1a，HE xia1b，YANG Yan-hua1a，CHEN Xiao-ping2

(1a.Center of Health Physical Examination and Health Management，1b.Pharmacogenomics Laboratory，Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China； 2.Department of Cardiology，West China Hospital，Sichuan University，Chengdu 610041，China)

CHEN Xiao-ping

Objective To explore the relationship and its mechanism between Glu504Lys polymorphism of aldehyde dehydrogenase 2 (ALDH2) in Han population and thickening of the carotid intima-media thickness (CIMT) in essential hypertension (EH) patients.Methods We selected 414 EH patients in Sichuan Province People’s Hospital and divided into CIMT thickening group and CIMT normality group.The endothelium dependent dilation function was detected by brachial artery flow-mediated dilation (FMD) in the patients with CIMT thickening group.The relationships between different genotypes and thickening of the CIMT and between different genotypes and FMD in the EH patients were statistically analyzed.Results The frequencies of AG type，AA type，AA/AG type and A allele in the CIMT thickening group were significantly higher than those in the normal CIMT group (P< 0.05).Logistic regression analysis demonstrated that AA/AG gene type of ALDH2 Glu504Lys was related to CIMT thickening.Multiple linear regression analysis showed that AA/AG gene type of ALDH2 Glu504Lys was independently related to decreased FMD in the EH patients with CIMT thickness.However，the correlation between ALDH2 gene Glu504Lys polymorphism and EH patients combined with increased CIMT was lowered after including FMD as an independent variable in logistic regression analysis.Conclusion ALDH2 gene Glu504Lys polymorphism in Han population was associated with thickening of CIMT in EH patients.The mutations of ALDH2 gene Glu504Lys lead to CIMT thickening in EH patients through abnormalities of vascular EDD.

Aldehyde dehydrogenase 2；Gene；Essential hypertension；Carotid intima-media thickness

四川省干部保健科研課題(編號(hào):川干研2015-206)

陳曉平

R544.1

A

1672-6170(2017)01-0040-04

2016-06-12；

2016-11-15)