何君君 ，李天石，朱 輝

（北京大學(xué)深圳醫(yī)院整形外科，廣東 深圳 518000）

改性甲殼素對(duì)瘢痕形成影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

何君君 ，李天石，朱 輝

（北京大學(xué)深圳醫(yī)院整形外科，廣東 深圳 518000）

目的通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，來(lái)比較不同濃度的改性甲殼素對(duì)創(chuàng)面愈合的影響，探討是否能夠減少瘢痕組織形成。方法實(shí)驗(yàn)所用動(dòng)物SD大鼠120只，隨機(jī)分成6組，試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)為（10,100,500,1000,2000,5000）mg/l。制備背雙側(cè)對(duì)稱的全層皮膚缺損模型，自身對(duì)照研究；動(dòng)物模型的一側(cè)創(chuàng)面缺損以不同濃度的改性甲殼素處理，另一側(cè)以每天常規(guī)消毒對(duì)照研究；于術(shù)后7天、14天、21、28天觀察記錄各組創(chuàng)面參數(shù)，進(jìn)行評(píng)價(jià)；總結(jié)分析改性甲殼素處理創(chuàng)面與對(duì)照組大體及組織學(xué)形態(tài)的差異。結(jié)果500 mg/l組、1000 mg/組、2000 mg/組、5000 mg/組中，實(shí)驗(yàn)側(cè)vss評(píng)分優(yōu)于對(duì)照側(cè)VSS評(píng)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）結(jié)論通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，500 mg/l 濃度的改性甲殼素溶液對(duì)創(chuàng)面的愈合有明顯的促進(jìn)作用。

改性甲殼素； 瘢痕； 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

甲殼素是一種天然多糖，廣泛存在自然界中，在眾多領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用價(jià)值[1]。甲殼素及其衍生物具有良好的生物相容性及生物可降解性，目前已在醫(yī)藥領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[2]。目前,有多項(xiàng)研究證明甲殼素能促進(jìn)傷口愈合、減小瘢痕[3]。本研究分析了改性甲殼素劑量對(duì)創(chuàng)面愈合的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD 大鼠，雄性，體重 210 ～220 g，共 120 只購(gòu)于廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。

1.1.2 甲殼素材料的選擇 本實(shí)驗(yàn)選用經(jīng)過(guò)改性后的水溶性甲殼素，脫乙酰度為90%，分子量1-5萬(wàn)單位，樣品由深圳市陽(yáng)光之路科技有限公司提供，除具有非常好的組織相容性外，還具有無(wú)毒，無(wú)刺激，可降解，無(wú)免疫原性，抗菌等化學(xué)特性。

1.2 改性甲殼素檢驗(yàn)濃度的設(shè)置

經(jīng)過(guò)查閱文獻(xiàn)后，確定2000mg/l為甲殼素作用的最佳劑量，故試驗(yàn)濃度設(shè)計(jì)為（10,100,500,1000,2000,5000）mg/l。通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。

1.3 方 法

采用自身對(duì)照法進(jìn)行比較，在大鼠背部對(duì)稱性設(shè)計(jì)2cm×2cm的皮膚缺損模型，采用不同濃度的甲殼素溶液濕敷，對(duì)照側(cè)常規(guī)碘伏消毒處理。于術(shù)后7天、14天、21、28天觀察記錄各組創(chuàng)面參數(shù)，進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.4 創(chuàng)面療效的創(chuàng)有效性分析

創(chuàng)面愈合判定：大體觀察，創(chuàng)面上皮組織生長(zhǎng)良好，創(chuàng)面完全覆蓋，無(wú)紅腫，無(wú)膿性滲出.有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)：與對(duì)照側(cè)配對(duì)比較。有效：與對(duì)照組比較提前2天以上愈合；無(wú)效：與對(duì)照組比較提前1天以上愈合、對(duì)照組基本相同或推遲愈合。

1.5 瘢痕組織的大體測(cè)量

對(duì)各組創(chuàng)面的瘢痕按照溫哥華瘢痕量表(Vancouverscar scale，VSS)進(jìn)行量化評(píng)分。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

采用SPSS.19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。每組分別采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組間差異暫不分析。

2 結(jié) 果

各組創(chuàng)面療效見(jiàn)表1。各組分別進(jìn)行配對(duì)T檢驗(yàn)，10mg/l組、100 mg/l組vss評(píng)分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。500 mg/l組、1000 mg/組、2000 mg/組、2000 mg/組中，實(shí)驗(yàn)側(cè)vss評(píng)分優(yōu)于對(duì)照側(cè)VSS評(píng)分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表2。

表1 應(yīng)用甲殼素后各類創(chuàng)面療效分析

表2 各組對(duì)照側(cè)及實(shí)驗(yàn)側(cè)VSS評(píng)分均值

3 討 論

3.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，大鼠腹側(cè)制備全層缺損模型中發(fā)現(xiàn)，由于大鼠活動(dòng)影響，腹側(cè)傷口經(jīng)常受到摩擦，影響創(chuàng)面愈合，故拋棄腹側(cè)制備模型，選用制備大鼠背部雙側(cè)對(duì)稱的全層皮膚缺損模型。由于條件限制，不能做到單個(gè)大鼠飼養(yǎng)，分批集中（5只/籠）飼養(yǎng)時(shí)，各種原因?qū)е麓笫蟊硞?cè)的創(chuàng)面敷料不能穩(wěn)妥包扎，我們采用彈性網(wǎng)帽制備大鼠的約束衣,有效的解決了敷料容易掉落的問(wèn)題.

3.2 改性甲殼素促進(jìn)創(chuàng)面愈合

減少瘢痕產(chǎn)生的機(jī)制瘢痕組織的主要成分是膠原纖維，其中又以Ⅰ型膠原纖維含量最多。在膠原的合成與降解過(guò)程中，已經(jīng)證實(shí)有多種生物活性起到重要作用[4]。陳海蓉等使用羥脯氨酸比色法研究羧甲基殼多糖對(duì)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞膠原合成的影響，發(fā)現(xiàn)羧甲基殼多糖在10、50、100、200ug/ml濃度下對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞作用48h后,能顯著抑制該細(xì)胞膠原的合成(P＜ 0.01)[5]。其機(jī)制是通過(guò)抑制Ⅰ型膠原的產(chǎn)生，從而減少Ⅰ型/Ⅲ型膠原的比例。還有有研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖通過(guò)刺激多種細(xì)胞的生長(zhǎng)誘導(dǎo)血管再生和肉芽生成[7]。劉宗軍等觀察動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞在殼聚糖和磷脂化殼聚糖作用下的增殖和遷移情況，發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞在聚糖和磷脂化殼聚糖膜上的增殖率分別達(dá)88.8%和77.8%,存活內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目較不銹鋼片組顯著增加(P＜0.01);聚糖和磷脂化殼聚糖膜的細(xì)胞遷移數(shù)目較空白組顯著增加(P＜0.01)，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移[7]。許慶等也發(fā)現(xiàn)殼聚糖單體能使內(nèi)皮細(xì)胞在膠原表面形成的管狀結(jié)構(gòu)的生成率突增，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞血管化功能[8]。張敬德等用組織塊法進(jìn)行正常皮膚成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)隨著甲殼素濃度的增高，成纖維細(xì)胞細(xì)胞器萎縮，各組G0+G1期的成纖維細(xì)胞百分比均上升，S期及G2+M期的成纖維細(xì)胞百分比均下降[9-11]。Eugene等通過(guò)非晶化蟹殼制備出甲殼素產(chǎn)品 Vinaehitin，用該產(chǎn)品對(duì)超過(guò)300名重度燒傷、外傷和潰瘍患者進(jìn)行臨床使用，其結(jié)果表明該產(chǎn)品對(duì)傷口愈合有很好的效果。還有研究發(fā)現(xiàn)甲殼素可以直接刺激成纖維細(xì)胞分泌IL-8來(lái)促進(jìn)傷口中血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，從而增加血液供應(yīng)，促進(jìn)肉芽組織的生長(zhǎng)。綜上所述，甲殼素通過(guò)抑制Ⅰ型膠原纖維的產(chǎn)生、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的血管化，改善組織修復(fù)是的血供，促進(jìn)創(chuàng)面的愈合，減少瘢痕組織的產(chǎn)生，

本次實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)濃度達(dá)到500 mg/l時(shí)，改性甲殼素不僅能夠促進(jìn)創(chuàng)面愈合，縮短創(chuàng)面的愈合時(shí)間，同時(shí)能夠減少瘢痕組織產(chǎn)生。說(shuō)明改性甲殼素療效安全、可靠，不受環(huán)境、條的限制，使用方便，具有很好的使用價(jià)值，為臨床使用提供依據(jù)。同時(shí)，當(dāng)濃度在500 mg/l以上時(shí)，不同濃度的溶液對(duì)創(chuàng)面恢復(fù)的影響，可以進(jìn)一步研究分析。

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Animal Experiment of Effect of Modifed Chitin on Scar Formation

HE Jun-jun LI Tian-shi ZHU Hui
(Department of plastic surgery, Shenzhen hospital, Peking University, Guangdong Province,518000, China)

ObjectiveTo compare the effects of different concentrations of modifed chitin on wound healing in animal experiments, and to explore whether it can reduce scar tissue formation.Methods120 SD rats were randomly divided into 6 groups. The experimental concentration was (10,100,500,1000,2000,5000) mg / l. The surface of the animal model was treated with different concentrations of modifed chitin, and the other side was treated with routine disinfection control. The observation and evaluation of the parameters in groups were done at 7,14,21,28 days after operations; summed up the modifed chitin treated wounds and control group in the general and histological differences.ResultsIn the 500 mg/l group, 1000 mg/l group, 2000 mg/l group and 2000 mg /l group, the vss score on the experimental side was superior to the control VSS score, the difference was statistically signifcant (P＜0.01)。ConclusionAnimal experiments found that 500 mg/l concentration of the modifed Chitin solution on the wound healing has a significant role in promoting.

Modifed chitin;scar;animal experiment

2014年度深圳市衛(wèi)生計(jì)生系統(tǒng)科研項(xiàng)目立項(xiàng)編號(hào):201401037。

何君君 ，副主任醫(yī)師，

李天石，副主任醫(yī)師。