黃鈺君++++++伍紹國++++++丘媛媛++++++蔡敏敏++++++陳慧敏+++++++黎彥攸

[摘要] 目的 建立廣州地區(qū)健康兒童血清維生素B12（VB12）參考區(qū)間。 方法 應(yīng)用LK3000V維生素檢測儀對2015年9月～2016年12月廣州地區(qū)2065名健康兒童（男1208名，女857名）和129名成年人（男52名，女77名）的血清VB12水平進(jìn)行檢測，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 11歲以內(nèi)的11個(gè)年齡組、11～17歲組男、女血清VB12水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。0～2歲、>2～5歲和>7～17歲、>5～7歲、>17歲血清VB12水平中位數(shù)（P2.5，P97.5）分別為252.4（192.3，338.0）、253.1（192.5，359.5）、262.7（194.8，374.9）、297.5（233.7，383.1） pg/mL，兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。年齡與血清VB12水平的相關(guān)系數(shù)（r值）為0.228（P=0.000）。 結(jié)論 廣州地區(qū)正常兒童血清VB12水平參考區(qū)間2歲以內(nèi)為192.3～338.0 pg/mL，>2～5歲和>7～17歲兩個(gè)年齡段為192.5～359.5 pg/mL，>5～7歲為194.8～374.9 pg/mL。

[關(guān)鍵詞] 參考區(qū)間；維生素B12；廣州地區(qū)；兒童

[中圖分類號] R179 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）06（a）-0114-05

Investigation on the normal reference range of healthy children serum Vitamin B12 in Guangzhou

HUANG Yujun1 WU Shaoguo2 QIU Yuanyuan3 CAI Minmin4 CHEN Huimin5 LI Yanyou6

1.Department of Laboratory Medicine， Guangzhou Children's Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510120， China； 2.Department of Laboratory Medicine， Guangzhou 12th People's Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510620， China； 3.Department of Laboratory Medicine， Guangzhou Maternity Health Care Center， Guangdong Province， Guangzhou 510120， China； 4.Department of Laboratory Medicine， Zhujiang New Town Branch of Guangzhou Women and Children Medical Center， Guangdong Province， Guangzhou 510620， China； 5.Department of Clinical Nutrition， Zhujiang New Town Branch of Guangzhou Women and Children Medical Center， Guangdong Province， Guangzhou 510620， China； 6.Tianjin Lanbiao Science and Technology Ltd.， Tianjin 300384， China

[Abstract] Objective To establish the normal reference range of healthy children serum Vitamin B12 （VB12） in Guangzhou. Methods Levels of serum VB12 of 2065 healthy children （1208 boys and 857 girls） and 129 adults （52 male and 77 female） living in Guangzhou Region were examined by LK3000V Vitamin Analyzer from September 2015 to December 2016. The results were analyzed statistically. Results There were no statistical differences in levels of serum VB12 between boys and girls in 11 age groups （aged less than 11） and 11-17 age group （P > 0.05）. The median （P2.5， P97.5） levels of serum VB12 defined by age were 252.4 （192.3， 338.0） pg/mL of 0-2 years-old group， 253.1 （192.5， 359.5） pg/mL of >2-5 years-old group as well as >7-17 years-old group， 262.7 （194.8， 374.9） pg/mL of >5-7 years-old group， 297.5 （233.7， 383.1） pg/mL of >17 years-old group， there were statistically significant differences between any two groups （P < 0.05）. Positive correlation was found between age and level of serum VB12 （r=0.228， P=0.000）. Conclusion Reference ranges of healthy children serum VB12 in Guangzhou Region are showed as follows： 192.3-338.0 pg/mL of 0-2 years-old children， 192.5-359.5 pg/mL of >2-5 years-old as well as >7-17 years-old children， and 194.80-374.9 pg/mL of >5-7 years-old children.

[Key words] Reference range； Vitamin B12； Guangzhou Region； Children

維生素B12（vitamin B12，VB12）是兒童正常生長發(fā)育而所必需的微量營養(yǎng)素之一，對血液系統(tǒng)成熟、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育有重要作用。典型的VB12缺乏導(dǎo)致巨幼細(xì)胞性貧血，但通常沒有貧血癥狀的隱性VB12缺乏者若治療不及時(shí)將造成不可逆的神經(jīng)系統(tǒng)損害，如記憶力減退、學(xué)習(xí)成績和認(rèn)知能力下降、行為異常等[1]。兒童早期VB12缺乏可能僅表現(xiàn)為體質(zhì)虛弱、發(fā)育遲緩等非特異性的癥狀，臨床診斷較困難，因此早期診斷并及時(shí)治療是預(yù)防長期神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的關(guān)鍵[2]。然而，迄今未有診斷VB12缺乏的金標(biāo)準(zhǔn)，血清VB12作為目前判斷機(jī)體VB12水平的一線指標(biāo)，是首選標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)診斷試驗(yàn)[3]。正確的參考區(qū)間是判斷血清VB12是否缺乏的前提。國內(nèi)外研究均顯示，正常人群血清VB12水平存在著明顯的人種、地區(qū)、性別、年齡間差異，各地應(yīng)該建立當(dāng)?shù)氐膮⒖挤秶鶾4-9]。國內(nèi)有關(guān)正常人群VB12參考區(qū)間的研究多數(shù)基于成年人群，較少見兒童人群的報(bào)道，尤其欠缺對正常兒童按年齡、性別進(jìn)行分層的大樣本系統(tǒng)研究。本文按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會C28-A的要求[10]，通過檢測分析表觀“健康”兒童血清VB12的水平，以期建立廣州地區(qū)兒童人群本實(shí)驗(yàn)室的正常參考區(qū)間，同時(shí)為臨床早期發(fā)現(xiàn)兒童VB12缺乏進(jìn)而及時(shí)治療提供判斷標(biāo)準(zhǔn)，也為其他實(shí)驗(yàn)室參考本地區(qū)正常兒童VB12水平提供循證醫(yī)學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2015年9月～2016年12月在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心、廣州市兒童醫(yī)院、廣州市婦嬰醫(yī)院、廣州市第十二人民醫(yī)院進(jìn)行健康查體的兒童2065名，均肝腎功能正常、血尿常規(guī)正常及其他體檢結(jié)論為“健康”，同時(shí)經(jīng)問卷調(diào)查無任何慢性病史、代謝病史，采集標(biāo)本前1個(gè)月內(nèi)無急性病，采集標(biāo)本前2周未服用任何處方藥。其中，男1208名，女857名。同時(shí)招募健康成年人129名作為成年人對照，其中，男52名，女77名。研究經(jīng)廣州市婦女兒童醫(yī)療中心倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象均知情同意。

1.2 儀器與試劑

儀器為天津市蘭標(biāo)電子科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的LK3000V維生素檢測儀；試劑為蘭標(biāo)公司生產(chǎn)的配套試劑盒（樣品處理液、定標(biāo)液、質(zhì)控品等）。

1.3 方法

1.3.1維生素B12檢測 各醫(yī)院標(biāo)本統(tǒng)一送至廣州市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測。抽取受試者空腹靜脈血3 mL，置不含添加劑的一次性真空采血管，3000 r/min離心10 min，取40 μL血清標(biāo)本（或質(zhì)控品）加入盛有2 mL VB12樣本處理液的樣品管中，顛倒混勻后放在工作臺旋轉(zhuǎn)杯中，選擇檢測項(xiàng)目進(jìn)行檢測。

1.3.2 參考區(qū)間驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按照所建參考區(qū)間的年齡分組，分別重新隨機(jī)選取相應(yīng)年齡體檢結(jié)論為“健康”的男女各10名測定VB12，對所建立的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用IBM SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有分組比較數(shù)據(jù)均采用One sample Kolmogorov-Smirnov Test法做正態(tài)性檢驗(yàn)。正態(tài)分布數(shù)據(jù)表示形式為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s），兩組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD-t（方差齊）或Tamhane's T2法（方差不齊）；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)表示形式為中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]采用非參數(shù)檢驗(yàn)：多組間比較用Kruskal-Wallis法，兩兩比較采用Mann-Whitney法。去除離群值用Tukey's法，參考區(qū)間用（P2.5，P97.5）表示。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2065名健康兒童各年齡組兩性間血清VB12水平比較

由表1可見，17歲及以下各年齡組男性與女性血清VB12水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），故可以合并性別后按年齡組進(jìn)行比較。

2.2 各年齡組、合并部分年齡組后血清VB12水平

由表2可見，總體判斷各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），但兩兩比較并非所有組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，本研究將水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的年齡組進(jìn)行合并后行方差分析或非參數(shù)檢驗(yàn)比較，直至組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，最終分成0～2歲、>2～5歲和>7～17歲、>5～7歲、>17歲四組。見表3。

2.3 血清維生素B12水平與年齡的相關(guān)性分析

血清VB12水平與年齡的相關(guān)系數(shù)（r值）為0.228（P=0.000）。

2.4 簡單驗(yàn)證參考區(qū)間實(shí)驗(yàn)

選取的60名來自3個(gè)年齡段的血清VB12檢測結(jié)果全部在相應(yīng)年齡段的參考區(qū)間之內(nèi)，提示該參考區(qū)間可以應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)室。

3 討論

VB12又被稱為氰鈷胺，作為輔因子參與甲基化同型半胱氨酸轉(zhuǎn)化為蛋氨酸而影響DNA的合成，參與甲基丙二酰輔酶A轉(zhuǎn)化成琥珀酰輔酶A而影響神經(jīng)髓鞘的代謝繼而影響神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育與功能[11]。研究表明，VB12與同型半胱氨酸、葉酸是成年人心血管疾病和腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[12-14]。研究還表明，在孩童時(shí)期的低維生素B水平和高同型半胱氨酸水平可能對改變其長大后發(fā)生慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn)具有潛在的影響[15]。因此，正確評估少年兒童時(shí)期VB12狀態(tài)對于健康成長以及預(yù)防成年后心腦血管病都具有重要意義。國內(nèi)外研究均顯示，兒童人群中有較高的VB12缺乏率[16-18]。但迄今未有診斷VB12缺乏的金標(biāo)準(zhǔn)，更沒有統(tǒng)一可用的健康少年兒童維生素B的參考區(qū)間，對VB12缺乏的判定造成了困擾。一方面，除了不同地區(qū)人群種族、飲食、生活習(xí)慣、性別年齡間可能存在固有的差異外，兒童生長發(fā)育動態(tài)變化也深深地影響著實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的參考區(qū)間[19]，再加上VB12水平測定的儀器和方法眾多，相互間可比性差，很難建立統(tǒng)一的參考范圍。另一方面，通常要建立基于大樣本的、健康的、兒童人群的參考值調(diào)查研究非常困難，在全世界領(lǐng)域都是一項(xiàng)艱巨的任務(wù)[10]。因此，國外很多研究也基于醫(yī)院的“健康人群”建立參考區(qū)間[20-21]。在國內(nèi)尚無多中心大樣本自然兒童人群調(diào)查研究的情況下，本研究旨在建立基于醫(yī)院“健康”兒童人群血清VB12水平的參考區(qū)間，先行為兒科臨床提供可用、有用的參考標(biāo)準(zhǔn)提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，促進(jìn)臨床診療的精準(zhǔn)化。

建立參考區(qū)間的理想做法，應(yīng)基于健康人群，并對性別、年齡、種族等關(guān)鍵協(xié)變量進(jìn)行分層[22]。因此，本研究將在醫(yī)院進(jìn)行健康保健、擇期手術(shù)的“準(zhǔn)健康兒童”作為調(diào)查對象，選取經(jīng)各種實(shí)驗(yàn)室檢查和體格檢查最終結(jié)論為“健康”的血清VB12結(jié)果納入統(tǒng)計(jì)分析。首先按年齡分層，11歲以內(nèi)以1歲為一組、11～17歲因樣本量小單列為一組，觀察男童與女童血清VB12水平的差異，發(fā)現(xiàn)所有未成年各年齡組兩性間血清VB12水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。與國內(nèi)重慶（2～7歲）[16]、湖北（健康成人）報(bào)道的結(jié)果[6]，及多數(shù)國外基于青少年人群如美國（3～19歲）[23]、英國（4～18歲）[15]、威爾士（12～13歲）[24]、希臘（6～15歲）[25]、奧地利（2～17歲）[26]等所報(bào)道的結(jié)果一致；但與國內(nèi)部分地區(qū)成年人群[4]、歐洲10個(gè)國家（12.5～17.49歲）[27]、土耳其（7～14歲）[28]、科威特（10～19歲）[29]、中國臺灣（12～15歲）[30]、西班牙（13～18.5歲）[31]所報(bào)道的男性明顯低于女性有所不同?？梢姡詣e對不同地區(qū)正常少年兒童血清VB12水平的影響不同，未見有女童血清VB12水平明顯低于男童的報(bào)道。隨后本研究合并兩性結(jié)果觀察各個(gè)年齡組間的血清VB12水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2歲以內(nèi)（含2歲）嬰幼兒血清VB12水平最低，依次明顯低于>2～5歲和>7～17歲組（P < 0.05）、>5～7歲組（P < 0.05），而這三組又分別明顯低于>17歲組（P < 0.05）?？傮w而言，兒童血清VB12水平有隨年齡增加而增加的趨勢，與國內(nèi)外報(bào)道的各年齡組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[4，16，29]，國內(nèi)[6]與多數(shù)國外[15，23，25-29]報(bào)道的隨年齡有遞減趨勢結(jié)果不同。反映了不同地區(qū)兒童年齡對血清VB12水平影響存在較大差異。2歲以下嬰幼兒血清VB12水平最低，可能是由于該階段為兒童體格生長發(fā)育最迅速的階段，對營養(yǎng)的要求相對更高，而此階段飲食又較為單一，VB12攝入量相對不足從而導(dǎo)致血清VB12水平明顯低于2歲以上各階段的兒童。至于>2～5歲和>7～17歲兩個(gè)年齡段兒童血清VB12水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異且明顯低于>5～7歲組的原因有待進(jìn)一步研究。此外，相關(guān)性分析顯示，17歲以內(nèi)未成年人血清VB12水平與年齡存在明顯的正相關(guān)，也是本研究中血清VB12水平隨年齡增長而增加在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的另一種印證。因此，就本次調(diào)查的人群而言，兒童血清VB12的參考區(qū)間應(yīng)按3個(gè)年齡段進(jìn)行設(shè)置：0～2歲為192.30～338.0 pg/mL，>2～5歲和>7～17歲兩個(gè)年齡段為192.5～359.5 pg/mL，>5～7歲為194.8～374.9 pg/mL。然后本研究隨機(jī)選取上述3個(gè)年齡區(qū)間內(nèi)正常兒童各20名的血清VB12結(jié)果均落在相應(yīng)參考區(qū)間之內(nèi)，驗(yàn)證了該參考區(qū)間的臨床適用性。

需要指出的是，本研究所建立的廣州地區(qū)正常兒童血清VB12水平參考區(qū)間是95%的正常兒童血清VB12檢測結(jié)果會落入的一個(gè)范圍，其下限和上限并非發(fā)生不良臨床事件，如VB12缺乏導(dǎo)致的巨幼細(xì)胞性貧血或高半胱氨酸血癥、神經(jīng)系統(tǒng)損傷的臨界值，有關(guān)這些臨界值的研究目前也未見有報(bào)道，需要在日后進(jìn)一步行隨機(jī)對照試驗(yàn)進(jìn)行研究。

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（收稿日期：2017-02-10 本文編輯：程 銘）