張啟全,周冬青,朱春玲,劉成永
江蘇省徐州市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科,江蘇徐州 221004
人類白細(xì)胞抗原G的表達(dá)與慢性乙型肝炎相關(guān)性研究
張啟全,周冬青,朱春玲,劉成永
江蘇省徐州市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科,江蘇徐州 221004
目的 研究血清人類白細(xì)胞抗原-G(sHLA-G)水平與慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的相關(guān)性及對(duì)乙型肝炎轉(zhuǎn)歸的影響。方法 收集2014年8月—2016年12月徐州市傳染病醫(yī)院就診的100例慢性乙型肝炎病毒感染患者血清和臨床資料,用Elisa法檢測(cè)血清中HLA-G(sHLA G)水平,將測(cè)試結(jié)果結(jié)合臨床資料和其他實(shí)驗(yàn)室結(jié)果,綜合分析和判斷的HLA-G(sHLA G)水平和相關(guān)的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染和乙型肝炎的影響結(jié)果。結(jié)果 100例樣本中有31例為陽性,陽性率為31%.陽性患者中HBV DNA>107 5例,ADA陽性20例,肝腫瘤標(biāo)志物AFP陽性6例。將檢測(cè)結(jié)果結(jié)合患者臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,HBeAg陽性組與HBeAg陰性組比較,HLA-G表達(dá)陽性率,采用χ2檢驗(yàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。ALT異常患者與ALT正?;颊?,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HLA-G陽性患者中ADA陽性的有20例,與ADA陰性組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論HLA-G(sHLA G)水平和血清ALT,和免疫標(biāo)記HBeAg沒有相關(guān)性,與血清ADA和肝臟腫瘤標(biāo)記物及肝損傷的程度和疾病的發(fā)展密切相關(guān),它對(duì)判斷疾病的發(fā)展具有重要意義。
人類白細(xì)胞抗原-G(HLA-G);乙型肝炎病毒(HBV);慢性乙型肝炎
人類白細(xì)胞抗原G基因?qū)儆谌祟惏准?xì)胞抗原的非經(jīng)典Ⅰ類基因,有研究表明病毒可促使HLA-G分子在機(jī)體內(nèi)高表達(dá)[1],乙型肝炎病毒是一種噬肝病毒,不同人感染HBV的表現(xiàn)不盡相同,分別表現(xiàn)為隱性、急性或急性重型、慢性,還有一些患者進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌,乙型肝炎病毒通過誘導(dǎo)機(jī)體表達(dá)HLA-G分子,借助其與受體結(jié)合的直接免疫和誘導(dǎo)HLA-G+ Treg發(fā)揮的間接免疫作用,有效地逃避了宿主的免疫攻擊。為進(jìn)一步明確人類白細(xì)胞抗原G的表達(dá)與乙型肝炎病毒感染的相關(guān)性及對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的影響,該研究方便收集了100例2014年8月—2016年12月徐州市傳染病醫(yī)院就診的HBV感染患者血清樣本,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Elisa)方法檢測(cè)患者血清中HLA-G水平,結(jié)合患者臨床資料及其他實(shí)驗(yàn)室資料進(jìn)行分析,進(jìn)一步揭示HLA-G在HBV感染過程中的致病機(jī)制,同時(shí)也為乙肝的診斷、個(gè)體化治療及預(yù)后評(píng)價(jià)提供參考,現(xiàn)報(bào)道如下。
方便選取的100例樣本血清及臨床和其他臨床實(shí)驗(yàn)室資料來源于徐州傳染病醫(yī)院就診100例患者,所有患者臨床診斷符合2010年 《傳染病防治指南標(biāo)準(zhǔn)》[2],其中表面抗原攜帶者10例,慢性乙型肝炎50例,慢性乙型肝炎合并戊型肝炎的重疊感染2例,肝硬化患者15例,肝癌患者23例,采用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品作為對(duì)照,并參考標(biāo)準(zhǔn)曲線作為質(zhì)控。
1.2.1 試劑及儀器 HLA-G檢測(cè)試劑盒,酶標(biāo)儀;肝功能檢測(cè)采用全自動(dòng)生化分析儀,試劑由上海高蹤生物公司提供;乙型肝炎病毒兩對(duì)半定量試劑,采用全自動(dòng)免疫分析儀,熒光定量PCR儀,HBV DNA檢測(cè)試劑。
1.2.2 操作方法
1.2.2.1 樣本采集,患者空腹抽取血液10 mL,分別留取肝功能,兩對(duì)半及HBV DNA檢測(cè)樣本及HLA-G檢測(cè)樣本。
1.2.2.2 酶聯(lián)免疫法(Elisa)檢測(cè)HLA-G取患者血液2 mL,離心后取血清作為待測(cè)樣本。分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔、待測(cè)樣品孔,嚴(yán)格按照說明書操作檢測(cè)患者血清中的HLA-G水平,用酶標(biāo)儀測(cè)定的OD值,來作為判斷檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果,以大于陽性對(duì)照的最低標(biāo)準(zhǔn)孔的值,判斷為檢測(cè)的陽性標(biāo)本,將標(biāo)準(zhǔn)曲線作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
1.2.2.3 其他檢測(cè),肝功能、兩對(duì)半定量、HBV DNA熒光定量等操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作,并設(shè)有對(duì)照和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用例數(shù)(n)和百分比(%)表示計(jì)數(shù)資料,對(duì)率和構(gòu)成比應(yīng)用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
100例樣本中有31例為陽性,陽性率為31%,陽性患者中HBV DNA>1 075例,ADA陽性20例,肝腫瘤標(biāo)志物AFP陽性6例。
將檢測(cè)結(jié)果結(jié)合患者臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,HBeAg陽性組與HBeAg陰性組比較,HLA-G表達(dá)陽性率,采用χ2檢驗(yàn),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。ALT異?;颊吲cALT正?;颊?,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.01)。HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者比較,,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HLA-G陽性患者中ADA陽性的有20例,與ADA陰性組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(見表1)。HLA-G陽性患者中有6例肝腫瘤標(biāo)志物AFP陽性,另有5例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA>107。
表1 慢性HBV感染患者血清HLA-G檢測(cè)結(jié)果在ADA陽性組與ADA陰性組比較
100例樣本中有31例患者HLA-G檢測(cè)為陽性,31例陽性患者中HBV DNA>107 5例,ADA陽性20例,肝腫瘤標(biāo)志物AFP陽性6例。HLA-G陽性患者中ADA陽性的有20例,與ADA陰性的比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);HBV DNA陽性患者與HBV DNA陰性患者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),另有6例肝癌患者肝腫瘤標(biāo)志物AFP陽性。說明血清可溶性HLA-G(HLA-G)與肝功能中的ADA水平及慢性乙型肝炎病毒(HBV DNA)高載量,以及肝腫瘤標(biāo)志物狀況有一定的相關(guān)性。ALT異?;颊吲cALT正常患者,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),E抗原(+)患者與E抗原(-)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說明與患者的血清可溶性HLAG(HLA-G)與患者ALT水平,以及血清免疫標(biāo)志物HBeAg無相關(guān)性,F.J.D Souto等[3]在肝組織HLA-G表達(dá)與慢性乙型肝炎病毒感染的臨床和組織病理關(guān)系一文,通過對(duì)免疫組織化學(xué)研究74例HBV感染者肝組織中HLA-G表達(dá),有54例肝組織HLA-G出現(xiàn)陽性表達(dá),研究結(jié)果表明HBV感染者肝組織中HLA-G表達(dá)與患者年齡、肝組織中HBsAg、HBeAg、HBcAg及肝組織纖維化程度和炎癥活動(dòng)度均沒有相關(guān)性,而與患者HBV DNA含量相關(guān),在HBV DNA>105肝組織中表達(dá)率較高;這與該次的研究結(jié)果基本一致,所不同的是該次的研究發(fā)現(xiàn)血清HLA-G表達(dá)在HBV DNA>107陽性率較高(31例陽性患者中HBV DNA>107 5例)。
在研究中還發(fā)現(xiàn)血清可溶性HLA-G(HLA-G)與肝功能中的ADA水平相關(guān),目前相關(guān)報(bào)道尚不多見,35例ADA陽性的HBV感染患者有20例血清HLA-G陽性,且部分患者為病情較重的乙肝患者和乙、戊肝重疊感染,其血清中腺苷酸脫氨酶(ADA)陽性,與乙肝、乙、戊肝重疊感染造成的急性肝損傷有關(guān),ADA是反映肝損傷的敏感指標(biāo),作為肝功能常規(guī)檢查項(xiàng)目之一,與谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等組成肝酶譜能較全面地反映肝臟病的酶學(xué)改變。如果是成倍的增高的情況的話,則說明肝臟損害嚴(yán)重,而與此同時(shí)患者血清中HLA-G檢測(cè)也是陽性,進(jìn)一步說明血清HLA-G分子水平與肝損傷程度相關(guān)。乙、戊肝重疊感染亦是慢性乙型肝炎加重的因素,這部分患者機(jī)體HLA-G分子水平較高,與HLA-G抑制了機(jī)體的免疫反應(yīng),加之兩種病毒共同誘導(dǎo)機(jī)體表達(dá)HLA-G分子,血清中的HLA-G水平相對(duì)較高,反過來使病毒逃避了免疫監(jiān)視和免疫攻擊,使病毒不斷入侵,對(duì)肝臟造成嚴(yán)重的損傷,因此下調(diào)乙肝患者機(jī)體的HLA-G分子水平,不但有利于清除病毒,還能避免患者發(fā)生戊肝重疊感染,具有重要的意義;由于HLA-G分子陽性高表達(dá)患者血清中ADA陽性占大多數(shù),因此檢測(cè)患者肝功能的ADA具有重要的意義,ADA陽性的乙肝患者HLA-G分子水平較高,對(duì)這部分患者采取增強(qiáng)免疫的療法可能有助于抗病毒藥物更好地清除乙肝病毒。
人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)是人類組織相容復(fù)合體抗原Ⅰ類基因,是一個(gè)免疫耐受分子,許多研究表明病毒可以促使HLA-G分子在體內(nèi)高度表達(dá)[4-6],該研究通過對(duì)100例乙肝患者血清中HLA-G分子表達(dá)研究中發(fā)現(xiàn),HLA-G在5例HBV DNA含量大于107以上患者中出現(xiàn)高度表達(dá),HBV DNA含量較低或者陰性患者表達(dá)水平相對(duì)較低,說明HLA-G抑制了機(jī)體的免疫反應(yīng),使病毒逃避了免疫監(jiān)視和免疫攻擊,從而使病毒不能夠被有效清除,不斷復(fù)制導(dǎo)致病毒載量不斷增高,隨著病毒含量增多又刺激機(jī)體產(chǎn)生大量的HLA-G分子,如此循環(huán)往復(fù),使病毒難以清除,這與周林杰等[7]乙型肝炎病毒誘導(dǎo)HLA-G的表達(dá)與臨床意義一文中認(rèn)為HLA-G參與了調(diào)節(jié)了HBV病毒免疫逃逸的結(jié)論一致;因此,如果能夠研究一種藥物下調(diào)機(jī)體的HLA-G分子的表達(dá)或阻斷HLA-G分子對(duì)免疫功能的影響,將這種藥物配合核苷類似物一起發(fā)揮協(xié)同作用,將會(huì)縮短患者抗病毒治療的療程,提高抗病毒藥物的效果,為患者抗病毒治療提供一種輔助藥物。
HLA-G分子不但在病毒感染中發(fā)揮其免疫抑制作用,而且在腫瘤免疫過程,抑制機(jī)體的免疫監(jiān)視功能,許多研究表明HLA-G表達(dá)與卵巢癌、宮頸癌、肺癌、膀胱移動(dòng)細(xì)胞癌等數(shù)許多種癌相關(guān)[8-11],該次的研究還發(fā)現(xiàn)HLA-G分子在肝癌患者血清中出現(xiàn)高度表達(dá),有學(xué)者研究認(rèn)為肝癌患者約85%合并乙肝病毒(HBV)感染[12],HBV感染使肝癌的發(fā)病率增加,該研究發(fā)現(xiàn)肝癌患者血清中HLA-G分子的表達(dá)高于其他患者和正常健康者,說明肝癌的發(fā)生與HLA-G分子的高度表達(dá)相關(guān),因此檢測(cè)患者血清中HLA-G的水平對(duì)于預(yù)測(cè)乙型肝炎進(jìn)展、判斷預(yù)后,早期干預(yù)以減少肝癌的發(fā)生具有一定的意義。
綜上所述,血清HLA-G與肝功能中的ADA水平及慢性乙型肝炎病毒(HBV DNA)高載量,以及肝腫瘤標(biāo)志物狀況有一定的相關(guān)性;血清HLA-G是HBV持續(xù)感染的重要因素,在HBV感染所致的肝損傷過程中具有重要的作用,也是HBV感染引起肝腫瘤的促進(jìn)因素。雖然HLA-G與乙型肝炎病毒感染有一定的相關(guān)性,但是乙型肝炎的致病機(jī)制受多方面的因素的影響,至今尚未完全明確,如能擴(kuò)大樣本含量,研究病毒和宿主的關(guān)系,對(duì)HBV和HLA-G表達(dá)進(jìn)行進(jìn)一步探討,將有助于理解乙型肝炎的致病機(jī)制,為新的免疫療法提供依據(jù)(通過下調(diào)HLA-G表達(dá)為HBV感染患者提供免疫治療及減少肝癌的發(fā)生)。
[1]孫豐浩,段永剛,蔡志明.人類白細(xì)胞抗原-G分子結(jié)構(gòu)與功能[J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志,2013,10(6):355-359.
[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì).感染病分會(huì):慢性乙型肝炎防治指南[Z].北京:2010.
[3]F J D Souto,J C O Crispim,S C Ferreira,et al.Liver HLA-G expression is associated with multiple clinical and histopat hological forms of chronic hepatitis B virus infection[J].Journal of Viral Hepatitis,2011(18):102-105.
[4]楊志.人類白細(xì)胞抗原與乙型肝炎病毒感染相關(guān)性研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2011,17(20):3044-3047.
[5]張淑瓊,張華,汪亞玲,等.白細(xì)胞抗原G基因14bp插入缺失多態(tài)與丙型肝炎病毒感染的關(guān)聯(lián)[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,39(1):35-38.
[6]許惠惠,林愛芬,顏衛(wèi)華.HLA-G與病毒感染[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2016,30(2):244-248.
[7]周林杰,鄭貞蒼,王鑫,等.乙型肝炎病毒誘導(dǎo)HLA-G的表達(dá)及其臨床意義[J].溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2014,44(6): 435-437.
[8]韋瑋,余波,章如松,等.卵巢漿液性癌中HLA-G的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病毒學(xué)雜志,2015,31(5):488-491.
[9]王元芬,牛子儒,郭一帆,等.人類白細(xì)胞抗原G在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,35(7):741-743
[10]黃理福,王小紅,張顯軍 .膀胱移行細(xì)胞癌患者人類白細(xì)胞抗原G的表達(dá)及其與臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性[J].浙江醫(yī)學(xué),2013,35(13):1254-1256.
[11]尚書恒.非小細(xì)胞肺癌組織中人類白細(xì)胞抗原G的表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2015,55(2):87-88
[12]王婕.重視抗HBV在肝癌治療中的作用[J].外科研究與新技術(shù),2013,2(4):225-228.
Research on Correlation between the Expression of Human Leucocyte Antigen G and Chronic Hepatitis B
ZHANG Qi-quan,ZHOU Dong-qing,ZHU Chun-ling,LIU Cheng-yong
Department of Clinical Laboratory,Xuzhou Infectious Disease Hospital,Xuzhou,Jiangsu Province,221004 China
ObjectiveTo research the correlation between the expression of human leucocyte antigen G and chronic hepatitis B and effect on the hepatitis B outcome.Methods100 cases of patients with chronic hepatitis B virus infection diagnosed in our hospital from August 2014 to December 2016 were selected and the HLA-G(sHLA G)in serum was tested by the Elisa method,and the testResultswere comprehensively analyzed and determined according to the clinical data and other laboratoryResults,and the correlation between the expression of human leucocyte antigen G and chronic hepatitis B and effect on the hepatitis B outcome were analyzed.ResultsOf the 100 patients,31 were positive and 31%positive.There were 5 5 patients with HBV DNA>10 patients with ADA positive and 6 patients with AFP positive for liver tumor markers. The positive rate of HLA-G expression in HBeAg positive group and HBeAg negative group was statistically significant(P> 0.05).The positive rate of HLA-G expression was not statistically significant(P>0.05).ALT abnormalities and normal ALT patients,the difference was not statistically significant(P>0.05).HBV DNA positive patients and HBV DNA negative patients,the difference was statistically significant(P<0.05).HLA-G positive patients with ADA positive in 20 cases,compared with ADA negative group,the difference was statistically significant(P<0.01).ConclusionThe HLA-G(sHLA G)level has no correlation with the serum ALT and immunolabelling HBeAg,but the serum ADA has a close correlation with the livertumor marker,liver injury degree and disease development,which is of important significance to determining the disease development.
Human leucocyte antigen G(HLA-G);Hepatitis B virus(HBV);Chronic hepatitis B
R4
A
1674-0742(2017)06(c)-0013-04
10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.18.013
2017-03-22)
張啟全(1981-),男,安徽濉溪人,本科,主管技師,主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和傳染病研究工作。
周冬青(1970-),女,江蘇徐州人,碩士,副主任技師,主要從事病理學(xué)技術(shù)和傳染性疾病研究工作。