孫位軍++++++周熙++++++王張++++++張靜++++++甘大莉++++++梁源++++++范剛++++++尹鴻翔

[摘要] 目的 研究光核桃仁油對(duì)小鼠、大鼠和兔的急性毒性。 方法 KM種小鼠40只，雌雄各半，分為空白對(duì)照組和光核桃仁油組各20只，在24 h內(nèi)分別連續(xù)灌胃3次生理鹽水和光核桃仁油，最大給予劑量為289.224 g生藥/（kg·d）。SD大鼠40只，雌雄各半，分為空白對(duì)照組和光核桃仁油組各20只，在24 h內(nèi)分別連續(xù)灌胃3次生理鹽水和光核桃仁油，最大給予劑量為144.612 g生藥/（kg·d）。新西蘭兔16只，雌雄各半，分為空白對(duì)照組和光核桃仁油組各8只，在24 h內(nèi)分別連續(xù)涂抹皮膚3次生理鹽水和光核桃仁油，最大給予劑量為482.28 mg生藥/（cm2·d）。分別觀察動(dòng)物在14 d內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)（死亡、中毒癥狀）及其嚴(yán)重程度、恢復(fù)情況、延遲反應(yīng)等。 結(jié)果 未見(jiàn)動(dòng)物死亡、中毒癥狀和肉眼可見(jiàn)的臟器異常。與空白對(duì)照組比較，大鼠和小鼠在灌胃1～3 d后出現(xiàn)大便溏稀，毛發(fā)油漬，但4 d后恢復(fù)正常。與空白對(duì)照組比較，在給藥第7天雄性小鼠體重明顯增高（P < 0.01），而雄性大鼠體重明顯降低（P < 0.01）；兔皮膚涂抹光核桃仁油第2天，雌兔體重明顯下降（P < 0.05）。與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組在給藥后第1天小鼠飼料消耗量降低（P < 0.01）。與空白對(duì)照組比較，小鼠平均血紅蛋白濃度出現(xiàn)異常（P < 0.05），但血液生化指標(biāo)無(wú)明顯變化；大鼠部分血常規(guī)指標(biāo)[紅細(xì)胞寬度變異系數(shù)、血小板數(shù)和血小板比積（P < 0.05）以及中間細(xì)胞百分比（P < 0.01）]和血液生化指標(biāo)[白蛋白、總蛋白、球蛋白、膽固醇、尿素氮、總紅膽素和三酰甘油（P < 0.05）以及肌酐（P < 0.01）]出現(xiàn)異常；兔部分血常規(guī)指標(biāo)[血小板數(shù)、粒細(xì)胞絕對(duì)值、血小板比積、中間細(xì)胞百分比、血小板分布寬度、淋巴細(xì)胞百分比和粒細(xì)胞百分比（P < 0.05）]和血液生化指標(biāo)[谷草轉(zhuǎn)氨酶和肌酐（P < 0.05）]出現(xiàn)異常。 結(jié)論 大鼠和小鼠經(jīng)口給予光核桃仁油的最大給藥量分別為144.612 g生藥/（kg·d）和289.224 g生藥/（kg·d），兔經(jīng)皮膚給予光核桃仁油的最大給藥量為482.28 mg生藥/（cm2·d），安全性良好，但在臨床應(yīng)用時(shí)應(yīng)監(jiān)測(cè)血常規(guī)和血液生化學(xué)指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 光核桃仁油；最大給藥量；急性毒性；大鼠；小鼠；兔

[中圖分類號(hào)] R28 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2017）07（c）-0018-07

[Abstract] Objective To study the acute toxicity of Prunus mira oil used in mice， rats and rabbits. Methods 40 KM mice which were half male and half female were divided into blank control group and Prumus mira oil group， each group had 20 mice. Within 24 hours， the mice were given normal saline and Prumus mira oil with one maximum dosage amounting to 289.224 g dried medicinal herbs/（kg·d） in a total of 3 times through mouth. 40 SD rats which were half male and half female were divided into blank control group and Prumus mira oil group， each group had 20 mice. Within 24 hours， the rats were also given normal saline and Prumus mira oil with one maximum dosage of 144.612 g dried medicinal herbs/（kg·d） in a total of 3 times in the same way. 16 New Zealand rabbits which were half male and half female were divided into blank control group and Prumus mira oil group， each group had 8 rabbits. Within 24 hours， the rabbits were given normal saline and Prumus mira oil with one maximum amount of 482.28 mg dried medicinal herbs/（cm2·d） 3 times through skin. And the toxic effects （death， poisoning symptoms） and the severity and recovery， as well as delayed reaction shown on these three animals were carefully observed within 14 days. Results There was no death， poisoning symptoms and organ abnormality visible to the naked eye. Compared with the blank control group， the mice and rats produce loose stool and oily hair after being given medicine within 1-3 d， but return to normal in 4 d. Compared with the blank control group， weights were significantly increased in the male mice （P < 0.01）， but significantly decreased in the male rats （P < 0.01） after taking Prunus mira oil of 7 d （P < 0.01）， and the weights of female rabbits decreased significantly after taking Prunus mira oil of 2 d through skin （P < 0.05）. Compared with the blank control group， the feed consumption of mice in the Prumus mira oil group were decreased after 1 d medication （P < 0.01）. Compared with the blank control group， the average hemoglobin concentration of mice in the Prumus mira oil group were abnormal （P < 0.05）， but their blood biochemical indexes showed no obvious change. Some blood indexes [RDW-CV， PLT， PCT （P < 0.05） as well as Mid% （P < 0.01）] and blood biochemical indexes [ALB， TP， GLO， CHOL， BUN， T-Bil and TG （P < 0.05） as well as CREA （P < 0.01）] showed abnormalities in rats of the Prumus mira oil group. Certain blood indexes [PLT， GR#， PCT， Mid%， PDW， LY% and GR% （P < 0.05）] and blood biochemical indexes [AST and CREA （P < 0.05）] showed abnormalities in rabbits of the Prumus mira oil group. Conclusion Maximum dosage given to the mice and rats through mouth are respectively 289.224 g dried medicinal herbs/（kg·d） and 144.612 g dried medicinal herbs/（kg·d）， while the maximum dosage given to the rabbits through skin is 482.28 mg dried medicinal herbs/（cm2·d）. There is no security problem， but the blood routine and blood biochemistry indexes should be monitored during clinical application.

[Key words] Prunus mira oil； Maximum dose； Acute toxicity； Rat； Mice； Rabbit

光核桃（Prunus mira Koehne），又名康布、毛桃、藏桃，分布于西藏、四川和云南等地[1]且潛藏巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[2]。光核桃仁曾被《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》收載，有活血祛瘀、潤(rùn)腸通便功效[3]，藏醫(yī)《晶珠本草》[4]和《藏藥志》[5]記載：種子榨取油涂擦治黃水病，頭發(fā)、眉毛、胡子等脫落癥。光核桃仁中不飽和脂肪酸的含量極高[6-8]。光核桃仁水煎液有抗炎作用，小鼠LD50為（42.81±0.02）g/kg，為臨床常用量（0.18 g/kg）的238倍；大鼠長(zhǎng)毒試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)異常[9]。但是光核桃仁油的急性毒性未見(jiàn)報(bào)道。遵照《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[10]，本研究開(kāi)展光核桃仁油的急性毒性研究，旨在為后續(xù)光核桃仁油的長(zhǎng)期毒性和藥理研究提供安全劑量參考值。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

光核桃的干燥種子，采集于四川省甘孜州得榮縣，由成都中醫(yī)藥大學(xué)賈敏如教授鑒定為薔薇科光核桃（Prunus mira Koehne）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

KM小鼠和SD大鼠，雌雄各半，均為40只，4周齡小鼠體重為18～22 g，6～8周齡大鼠體重為180～220 g，均為封閉群、SPF級(jí)，小鼠和大鼠的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)分別為51203500000978和512035000 00945，均由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供。新西蘭兔，雌雄各半，16只，體重為1.8～2.0 kg，8～10周齡，封閉群，普通級(jí)，由四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：0015884。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施由成都中醫(yī)藥大學(xué)提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（川）2014-124。

1.3 試劑

測(cè)試血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的試劑盒，均來(lái)自上海特康科技有限公司，見(jiàn)表1。

1.4 儀器

全自動(dòng)三分群血液分析儀（型號(hào)TEK-Ⅱ MINI）和全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)TC6010L）均由上海特康科技有限公司生產(chǎn)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 光核桃仁油榨取 用德力生榨油機(jī)榨取（40℃）光核桃仁油，經(jīng)濾網(wǎng)粗過(guò)濾后為橙黃半透明油狀液體，低溫保存，即為最大濃度的光核桃仁油供試品（2.4102 g藥材/mL）。

1.5.2 急性毒性試驗(yàn) 參考文獻(xiàn)[11-14]和預(yù)實(shí)驗(yàn)，以最大給藥量法開(kāi)展急性毒性實(shí)驗(yàn)。取小鼠和大鼠各40只，按體重分層后再按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組和光核桃仁油組，每組各20只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水12 h。空白對(duì)照組灌胃生理鹽水，光核桃仁油組灌胃光核桃仁油，大鼠和小鼠給藥體積分別為20 mL/kg和40 mL/kg，間隔4～6 h，連續(xù)灌胃3次。觀察14 d，記錄中毒癥狀、死亡情況、體重變化及進(jìn)食情況。第14天將動(dòng)物麻醉（ip，水合氯醛），大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈取血5 mL，分置兩管，其中一管做抗凝處理，用于測(cè)試血常規(guī)指標(biāo)；另一管自然凝固后分離出血清，用于測(cè)試血液生化學(xué)指標(biāo)。20只小鼠，兩組各10只（雌雄各半），眼球采血做抗凝處理；其余20只小鼠，兩組各10只（雌雄各半），分離血清。

取兔16只，雌雄各半，按體重分層后再按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組和光核桃仁油組，每組各8只，雌雄各4只，剃毛約為15 cm×10 cm[15-16]?？瞻讓?duì)照組涂抹生理鹽水，光核桃仁油組涂抹光核桃仁油，給藥體積為每次666.67 mL/m2，連續(xù)涂抹3次，間隔至少6～7 h。觀察和測(cè)試指標(biāo)同大鼠。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況和尸檢結(jié)果

灌胃光核桃仁油30 min內(nèi)，鼠均出現(xiàn)精神萎靡、行動(dòng)遲緩，隨后迅速恢復(fù)正常，觀察期內(nèi)無(wú)動(dòng)物死亡。第1～3天大便溏稀，毛發(fā)油漬，但第4天后恢復(fù)正常。第14天解剖所有動(dòng)物，內(nèi)部臟器[17]未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)異常。

首次涂抹光核桃仁油后，兔無(wú)死亡和中毒反應(yīng)，外觀體征無(wú)異常，皮膚無(wú)刺激性表現(xiàn)。第14天解剖所有兔，內(nèi)部臟器未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)異常。

2.2 體重及飼料消耗量

2.2.1 小鼠 由表2可見(jiàn)，與空白對(duì)照組同性別動(dòng)物比較，小鼠服用光核桃仁油7 d后，雄性小鼠體重明顯增加。由表3可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組在給藥后第1天小鼠飼料消耗量降低（P < 0.01），但在第7天后，小鼠飼料消耗量又逐漸增高。

2.2.2 大鼠 由表4可見(jiàn)，與空白對(duì)照組同性別動(dòng)物比較，雌性大鼠服用光核桃仁油1 d后，雌性大鼠體重增加，雄性大鼠體重降低（P < 0.01）；在給藥后第7天雄性大鼠體重明顯降低（P < 0.01）。由表5可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組大鼠飼料消耗量無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.2.3 兔 由表6可見(jiàn)，與空白對(duì)照組同性別動(dòng)物比較，雌兔皮膚涂抹光核桃仁油第2天體重明顯下降（P < 0.05）；而雄兔體重?zé)o明顯變化。由表7可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組兔的飼料消耗無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.3 血常規(guī)

2.3.1 小鼠 由表8可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組雌雄小鼠的平均血紅蛋白濃度均增加（P < 0.05），其他指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.3.2 大鼠 由表9可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組雄性大鼠的紅細(xì)胞寬度變異系數(shù)減少（P < 0.05），中間細(xì)胞百分比明顯減少（P < 0.01）；雌性大鼠的血小板數(shù)和血小板比積含量增加（P < 0.05）；其他指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.3.3 兔 由表10可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組雌兔的血小板數(shù)、粒細(xì)胞絕對(duì)值和血小板比積均增加（P < 0.05），中間細(xì)胞百分比和血小板分布寬度減少（P < 0.05）；雄兔的淋巴細(xì)胞百分比減少（P < 0.05），粒細(xì)胞百分比增加（P < 0.05）；其他指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.4 血液生化指標(biāo)

2.4.1 小鼠 由表11可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組小鼠的血液生化指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.4.2 大鼠 由表12可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組雄性大鼠的白蛋白含量增加（P < 0.05）；雌性大鼠的總蛋白、白蛋白、球蛋白、膽固醇、尿素氮和肌酐的含量減少（P < 0.05或P < 0.01），但總膽紅素和三酰甘油的含量增加（P < 0.05）；其他指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

2.4.3 兔 由表13可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，光核桃仁油組雌兔的谷草轉(zhuǎn)氨酶活性增強(qiáng)（P < 0.05），肌酐減少（P < 0.05），其他指標(biāo)均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。

3 討論

大鼠灌胃給予光核桃仁油的最大劑量為144.612 g生藥/（kg·d），小鼠為289.224 g生藥/（kg·d）。光核桃仁油的成人日用劑量為5 g[18]，即5 g/60 kg，故上述給藥劑量分別為成人日用劑量的1735.344倍和3470.688倍。兔皮膚給予的最大劑量為482.28 mg/（cm2·d）。

光核桃仁毒性主要是苦杏仁苷在體內(nèi)分解出較多的氫氰酸[19]?？嘈尤受盏牧硪粋€(gè)水解產(chǎn)物為苯甲醛[20]，具有良好的抑菌和抗癌作用，也作食品添加劑使用[10]，可降低光核桃仁油的毒性。本文發(fā)現(xiàn)光核桃仁油對(duì)實(shí)驗(yàn)鼠與兔的毒性較低，推測(cè)可能與光核桃仁油中氫氰酸和苯甲醛的比例有一定的關(guān)系，有待進(jìn)一步研究。

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