張智鵬孫世鐸

（1西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，陜西楊凌 712100；2漢中市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，陜西漢中 723000）

漢中市豬口蹄疫定點(diǎn)監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

張智鵬1,2孫世鐸1*

（1西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，陜西楊凌 712100；2漢中市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，陜西漢中 723000）

為了全面掌握陜西省漢中市生豬口蹄疫感染和免疫狀況，采用非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA和正向間接血凝試驗(yàn)，對(duì)漢中市豬口蹄疫固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)的35個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)和15個(gè)散養(yǎng)戶開展了感染抗體和免疫抗體的檢測(cè)。結(jié)果顯示，豬口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率為0，O型豬口蹄疫個(gè)體合格率為89.9%，群體合格率為77.1%。結(jié)果表明，未發(fā)現(xiàn)豬口蹄疫病毒感染及帶毒情況，疫情形勢(shì)穩(wěn)定；規(guī)模場(chǎng)的O型豬口蹄疫個(gè)體合格率和群體合格率均高于散養(yǎng)戶，差異極顯著 （＜0.01）；種豬的O型豬口蹄疫個(gè)體合格率及群體合格率最高，育肥豬最低，個(gè)體合格率差異極顯著 （＜0.01），群體合格率差異顯著 （＜0.05）；不同縣區(qū)的豬口蹄疫個(gè)體合格率差異顯著，個(gè)別豬場(chǎng)對(duì)口蹄疫免疫不夠重視，存在漏免、不及時(shí)補(bǔ)免、免疫劑量不足等問題，成為口蹄疫疫情發(fā)生的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

口蹄疫；定點(diǎn)監(jiān)測(cè)；分析

口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）是當(dāng)前危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一[1]，具有病毒血清型多、易變異、傳染性強(qiáng)、傳播快等特點(diǎn)[2]，給該病的防控及消滅造成了很大困難。口蹄疫病毒在全球分布范圍廣泛，許多國(guó)家時(shí)有發(fā)生[3]。據(jù)我國(guó)農(nóng)業(yè)部官方發(fā)布統(tǒng)計(jì)，全國(guó)2011—2015年有13個(gè)省份共發(fā)生口蹄疫疫情42起，其中豬口蹄疫14起，O型和A型分別為11起和3起。每起疫情的發(fā)生都給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失，并且對(duì)國(guó)際貿(mào)易和社會(huì)穩(wěn)定影響巨大。因此世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)政府也將該病排在一類動(dòng)物疫病的第一位[4]，充分顯示了國(guó)內(nèi)外對(duì)口蹄疫的高度重視。

生豬養(yǎng)殖是陜西省漢中市農(nóng)業(yè)主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)，其飼養(yǎng)量和產(chǎn)值均占全省30%以上。隨著產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，生豬引種、交易、流動(dòng)頻繁，導(dǎo)致漢中市豬口蹄疫疫情形勢(shì)不容樂觀。為了全面掌握漢中市生豬口蹄疫感染和免疫狀況，漢中市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心在全市選取有代表性的35個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)和15個(gè)散養(yǎng)戶作為豬口蹄疫固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，開展豬口蹄疫免疫抗體和感染抗體的檢測(cè)，以便準(zhǔn)確了解全市生豬口蹄疫流行動(dòng)態(tài)，科學(xué)評(píng)估疫情發(fā)生及傳播風(fēng)險(xiǎn)，為防控豬口蹄疫提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

按照隨機(jī)抽樣的方式，在口蹄疫滅活苗免疫后30天左右，按照10%的可接受誤差、90%的置信度對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)采集血液樣品，對(duì)散養(yǎng)戶則全部采樣。采集的血樣在室溫下自然凝固，數(shù)小時(shí)或過(guò)夜后，2 000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，吸取上層血清于塑料離心管中，并按要求進(jìn)行編號(hào)，-20℃保存待檢。共抽檢血清792份，其中規(guī)模場(chǎng)748份、散養(yǎng)戶44份。

1.2 檢測(cè)試劑

口蹄疫病毒NS抗體單抗阻斷ELISA試劑盒，批號(hào)為FMD20150825E，由北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司提供。

口蹄疫O型間接血凝抗體檢測(cè)試劑盒，批號(hào)為20160505201，由中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所提供。

1.3 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀，Multiskan FC，賽默飛世爾（上海）儀器有限公司；全自動(dòng)洗板機(jī)，DNX-96，北京普朗新技術(shù)有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，DHP-9162，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；超純水機(jī)，UPH-II-20T，成都超純水科技有限公司；移液器，20～200 μL，德國(guó)普蘭德公司；微量振蕩器，WZ-2A，北京海淀電子醫(yī)療器械廠；一次性吸頭、96孔110°V型血凝板等耗材均為國(guó)產(chǎn)。

1.4 檢測(cè)方法

免疫抗體檢測(cè)采用正向間接血凝試驗(yàn)，感染抗體檢測(cè)采用非結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA方法，操作步驟按試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

正向間接血凝試驗(yàn)：對(duì)照成立的情況下，血清抗體效價(jià)≥25判定為免疫合格。免疫合格個(gè)體數(shù)量占群體總數(shù)的70%（含）以上為免疫合格群體。

非結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA：對(duì)照成立的情況下，被檢血清的阻斷率Inh%≥30%，判為FMDV-NS抗體陽(yáng)性；被檢血清的阻斷率20%≤Inh%＜30%，判為FMDV-NS抗體可疑；被檢血清的阻斷率Inh%＜20%，判為FMDV-NS抗體陰性。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 20.0軟件對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，通過(guò)卡方檢驗(yàn)（X2）分析差異顯著性， ＜0.05為差異顯著， ＜0.01為差異極顯著。

2 檢測(cè)結(jié)果

2.1 O型豬口蹄疫感染抗體檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)豬血清792份，其中35個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)748份，15個(gè)散養(yǎng)戶44份，檢出口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體0份，陽(yáng)性率為0，見表1。

2.2 O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 不同飼養(yǎng)方式O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

共檢測(cè)豬血清749份，合格抗體數(shù)673份，個(gè)體合格率和群體合格率分別為89.9%和77.1%。規(guī)模場(chǎng)的個(gè)體合格率和群體合格率均高于散養(yǎng)戶，分別高出46.3和52.9個(gè)百分點(diǎn)。散養(yǎng)戶的個(gè)體合格率遠(yuǎn)低于國(guó)家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)兩種飼養(yǎng)方式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行卡方檢驗(yàn)分析，差異極顯著（＜0.01），見表2。

2.2.2 不同生長(zhǎng)階段O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表1 O型豬口蹄疫感染抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表2 不同飼養(yǎng)方式O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

種豬的個(gè)體合格率及群體合格率最高，育肥豬最低。不同生長(zhǎng)階段的生豬個(gè)體合格率都超過(guò)國(guó)家規(guī)定70%的標(biāo)準(zhǔn)，但育肥豬的群體合格率較低，只有58.5%。不同生長(zhǎng)階段的個(gè)體合格率差異極顯著（＜0.01），群體合格率差異顯著（＜0.05），見表3。

2.2.3 不同縣區(qū)O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

7 個(gè)縣區(qū)中，城固縣的個(gè)體合格率和群體合格率最高，分別達(dá)到95.6%和100%；南鄭縣的個(gè)體合格率最低，為80.0%；洋縣的群體合格率最低，只有60.0%。檢測(cè)結(jié)果經(jīng)卡方檢驗(yàn)，各縣區(qū)間個(gè)體合格率差異極顯著（＜0.01），而群體合格率差異不顯著（＞0.05），見表4。

3 分析與討論

⑴檢測(cè)口蹄疫感染抗體時(shí)，采用的是非結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA方法。該方法具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度高等特點(diǎn)，但在實(shí)際應(yīng)用中，由于口蹄疫滅活苗中存在極少量的非結(jié)構(gòu)蛋白，家畜特別是種畜經(jīng)多次免疫滅活苗后，可產(chǎn)生少量針對(duì)非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體，影響檢測(cè)結(jié)果，因此該試驗(yàn)不能作為確診的方法[5]，僅可作為口蹄疫感染狀況監(jiān)測(cè)的初篩試驗(yàn)，陽(yáng)性病例還需用RT-PCR方法進(jìn)一步確診。本次檢測(cè)過(guò)程中，未檢出非結(jié)構(gòu)蛋白陽(yáng)性樣品，說(shuō)明漢中市豬口蹄疫防控措施得力、效果明顯，疫情暴發(fā)的可能性較小。

⑵通過(guò)免疫抗體檢測(cè)結(jié)果可以看出，規(guī)模場(chǎng)的個(gè)體合格率比散養(yǎng)戶高46.3個(gè)百分點(diǎn)。主要原因是：規(guī)模場(chǎng)有嚴(yán)格的管理制度，并能根據(jù)本場(chǎng)及周邊的疫情狀況制定科學(xué)的免疫程序，實(shí)施程序化免疫，保證了豬群較高的抗體水平，降低了口蹄疫感染的風(fēng)險(xiǎn)。散養(yǎng)戶的飼養(yǎng)環(huán)境條件差，無(wú)消毒滅菌意識(shí)，僅免疫一次口蹄疫疫苗，以春秋兩季集中免疫為主，免疫抗體持續(xù)時(shí)間短、抗體水平差，點(diǎn)狀疫情風(fēng)險(xiǎn)較大。

從不同生長(zhǎng)階段免疫抗體檢測(cè)分析結(jié)果看，種豬的個(gè)體合格率明顯高于保育仔豬和育肥豬，這是由于規(guī)模場(chǎng)非常重視種豬的飼養(yǎng)管理，加之飼養(yǎng)周期長(zhǎng)，每年免疫3～4次，使種豬口蹄疫免疫抗體效價(jià)高、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。保育仔豬和育肥豬的個(gè)體合格率相差不大。據(jù)調(diào)查，除散養(yǎng)戶外，規(guī)模場(chǎng)的保育仔豬和育肥豬均經(jīng)過(guò)了兩次免疫，個(gè)體合格率也超過(guò)了國(guó)家70%的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)防止口蹄疫大面積暴發(fā)起到了重要的作用。

從不同縣區(qū)免疫抗體檢測(cè)分析結(jié)果看，7個(gè)縣區(qū)的

表3 不同生長(zhǎng)階段O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

表4 不同縣區(qū)O型豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表

個(gè)體合格率均超過(guò)國(guó)家70%的標(biāo)準(zhǔn)，但縣區(qū)之間差異顯著，個(gè)體合格率最大相差15.6個(gè)百分點(diǎn)。洋縣、南鄭兩縣的個(gè)別規(guī)模場(chǎng)對(duì)口蹄疫免疫不夠重視，存在漏免、不及時(shí)補(bǔ)免、免疫劑量不足等問題，造成了免疫死角和免疫失敗，增大了口蹄疫感染的風(fēng)險(xiǎn)。

⑶本次監(jiān)測(cè)中首次將群體合格率納入口蹄疫免疫效果評(píng)價(jià)指標(biāo)。群體合格率是指在一定區(qū)域范圍內(nèi)，個(gè)體合格率≥70%的養(yǎng)殖場(chǎng)數(shù)量占全部監(jiān)測(cè)場(chǎng)數(shù)的百分比。與個(gè)體合格率相比，群體合格率更能代表某一地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)的總體免疫情況，受監(jiān)測(cè)場(chǎng)數(shù)和樣品大小的影響較小。由表4可以看出，個(gè)體合格率高的縣區(qū)其群體合格率不一定高，但群體合格率高的縣區(qū)大多數(shù)養(yǎng)殖場(chǎng)的合格率都能達(dá)到國(guó)家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)是點(diǎn)與面的關(guān)系。因此，在開展口蹄疫免疫效果監(jiān)測(cè)評(píng)價(jià)時(shí)，應(yīng)將群體合格率作為一個(gè)重要指標(biāo)，促進(jìn)更多的養(yǎng)殖場(chǎng)重視口蹄疫免疫，提升口蹄疫整體免疫效果，防止豬口蹄疫疫情的發(fā)生。

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S851.3

：A

：1673-4645(2017)08-0064-03

2017-04-18

陜西省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新轉(zhuǎn)化資金項(xiàng)目（陜農(nóng)業(yè)計(jì)財(cái)〔2015〕155號(hào)）

張智鵬（1977-），男，陜西城固人，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控及畜牧技術(shù)推廣工作，E-mail：275813255@qq.com

*通訊作者：孫世鐸（1960-），男，陜西大荔人，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究，E-mail：ssdsm@tom.com