鄧海云　肖鴿飛　李樺　廖燕潔　梁燕霞

【摘要】 目的 以VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法檢測(cè)降鈣素原（PCT）結(jié)果作為參照， 對(duì)Wondfo干式熒光免疫層析法測(cè)定PCT結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。方法 收集72例患者的血清標(biāo)本， 以雙盲方式對(duì)上述標(biāo)本分別采用VIDAS和Wondfo儀器進(jìn)行PCT定量檢測(cè)， 再通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析評(píng)估兩種方法測(cè)定PCT的一致性。結(jié)果 兩種設(shè)備檢測(cè)的PCT結(jié)果高度相關(guān)（r=0.987， P<0.01）；回歸方程：Y=1.069X-0.021， F檢驗(yàn)顯示回歸方程差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；對(duì)回歸方程的兩個(gè)系數(shù)進(jìn)行t檢驗(yàn)顯示， 截距（b）則反之差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.768>0.05）， 而斜率（a）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。PCT在定值0.23 ng/ml和0.50 ng/ml時(shí)的系統(tǒng)誤差（SE%）分別為6.90%和2.70%。結(jié)論 兩種方法檢測(cè)PCT結(jié)果具有高度的相關(guān)性， 但二者存在一定的比例誤差， Wondfo干式熒光免疫層析法檢測(cè)PCT可以用于臨床病情及療效監(jiān)控。

【關(guān)鍵詞】 降鈣素原；系統(tǒng)誤差；相關(guān)性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.23.015

Comparison and evaluation of the results of two different methods for the determination of serum procalcitonin DENG Hai-yun， XIAO Ge-fei， LI Ye， et al. Department of Clinical Laboratory， Zhuhai City Maternal and Child Health Care Hospital， Zhuhai 519001， China

【Abstract】 Objective To evaluate procalcitonin （PCT） results determined by Wondfo dry fluorescent immunochromatography， with PCT results determined by VIDAS Brahms double antibody immunofluorescence method as a reference. Methods Serum specimens were collected from 72 patients and their PCT was quantitatively detected by VIDAS and Wondfo devices in a double-blind manner. Statistical analysis was used to assess the consistency of the two methods for the determination of PCT. Results The PCT results of the two devices were highly correlated （r=0.987， P<0.01）； regression equation： Y=1.069X-0.021， F test showed that there was statistically significant difference in regression equation （P<0.05）. The t test of the two coefficients of the regression equation showed that there was no statistically significant difference in the intercept （b） （P=0.768>0.05）， while there was statistically significant difference in slope （a） （P=0.000<0.05）. The systematic errors （SE%） of PCT at 0.23 ng/ml and 0.50 ng/ml were respectively 6.90% and 2.70%. Conclusion The PCT results of the two devices are highly correlated， but there is a certain proportion of systematic errors. Wondfo dry fluorescent immunochromatography for determination of PCT can be used for clinical disease and efficacy monitoring.

【Key words】 Procalcitonin； Systematic errors； Correlation

降鈣素原（procalcitonin， PCT）是降鈣素（calcitonin， CT）的激素原， 為甲狀腺C細(xì)胞分泌所產(chǎn)生。正常生理狀況下， 血清PCT水平低到幾乎檢測(cè)不到（<0.1 ng/ml）。而在細(xì)菌感染尤其是在膿毒癥、休克等全身炎癥反應(yīng)綜合征的情況時(shí)， 血清PCT水平會(huì)顯著升高。作為細(xì)菌性感染非特異的炎癥敏感指標(biāo)， PCT在臨床上得到了廣泛應(yīng)用[1， 2]。目前， 檢測(cè)PCT的國(guó)產(chǎn)設(shè)備及試劑大量涌現(xiàn)， 良莠不齊， 檢測(cè)結(jié)果的溯源性有待完善， 其正確度能否滿足臨床的要求成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。本文以VIDAS Brahms PCT檢測(cè)結(jié)果作為參照， 評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)萬(wàn)孚（Wondfo）PCT檢測(cè)方法的相關(guān)性及偏倚， 從而判斷Wondfo PCT檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用于臨床的適宜性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取72例2015年6月～2016年6月就診于珠海市婦幼保健院的患者， 分別患新生兒肺炎、化膿性扁桃體炎、急性支氣管肺炎、感染性腹瀉、膿毒血癥等炎性疾病。收集患者的高、中、低值的新鮮血清標(biāo)本72例。

1. 2 儀器與試劑 萬(wàn)孚飛測(cè)全自動(dòng)干式熒光免疫分析儀FS-301及其配套的特定干式試劑（批號(hào)21010907）；法國(guó)梅里埃VIDAS免疫熒光分析儀及其配套Brahms PCT試劑（批號(hào)1004914100）。

1. 3 測(cè)定方法 PCT檢測(cè)試驗(yàn)開(kāi)始前， 檢驗(yàn)人員應(yīng)該熟悉比對(duì)試驗(yàn)方案， 接受廠家工程師培訓(xùn)， 熟練操作儀器并能進(jìn)行保養(yǎng)和故障排除。在內(nèi)部質(zhì)量控制（IQC）或外部質(zhì)量控制（EQC）均在控的情況下， 嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）文件操作， 采用雙盲方式分別采用VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法和Wondfo干式熒光免疫層析法進(jìn)行PCT定量檢測(cè)。主要方法為：采用干式熒光免疫層析的方法（A組）， 待測(cè)物與熒光標(biāo)記抗體形成免疫復(fù)合物， 經(jīng)過(guò)層析， 分別固定在檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)。LED藍(lán)光激發(fā)熒光免疫復(fù)合物上的熒光物質(zhì)發(fā)光， 光波被信號(hào)收集并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)， 通過(guò)電信號(hào)的強(qiáng)弱計(jì)算出待測(cè)樣品中PCT的濃度。應(yīng)用雙抗體夾心熒光免疫法（B組），

形成固相抗PCT抗體-PCT抗原-PCT熒光抗體結(jié)合物， 所測(cè)得的熒光與標(biāo)本中PCT抗原的濃度呈正比。計(jì)算相關(guān)系數(shù)r≥0.975為線性相關(guān)良好；計(jì)算斜率， 截距， 建立直線回歸方程， 對(duì)兩種方法的系統(tǒng)誤差進(jìn)行t檢驗(yàn)， 判斷系統(tǒng)的可接受性[3]。根據(jù)臨床使用要求， 將給定的醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc（0.5 ng/ml[4]）代入回歸方程， 計(jì)算參考方法（Y）與對(duì)比方法（X）之間的SE%。SE=|Yc - Xc|， SE%=（SE/Xc）×100%。參照廠家試劑使用說(shuō)明書(shū)， SE%小于T±20%作為臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性分析和直線回歸分析。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 測(cè)定結(jié)果中最高值為25.51 ng/ml， 最低值為<0.05 ng/ml。

A組和B組進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.342>0.05）。

2. 2 離群點(diǎn)的檢查以（B組檢測(cè)值-A組檢測(cè)值）為Y軸， B組檢測(cè)值為X軸做偏倚圖。見(jiàn)圖1。 可能存在離群點(diǎn)， 以相對(duì)偏倚差均值的4倍（0.472）為可接受限， 故在B組檢測(cè)值為0.05 ng/ml， A組檢測(cè)值為0.14 ng/ml為離群點(diǎn)（相對(duì)偏倚差為0.474>0.472）， 從數(shù)據(jù)組中剔除此數(shù)值。

圖1 兩種方法結(jié)果差值與參比方法均值的偏倚圖

2. 3 相關(guān)性分析以B組檢測(cè)值為X軸， A組檢測(cè)值為Y軸做散點(diǎn)圖。見(jiàn)圖2。經(jīng)Pearson相關(guān)性分析， A、B兩組數(shù)據(jù)呈顯著性正相關(guān)（r=0.987， P<0.01）；經(jīng)回歸分析可得：Y=1.069X-0.021（F=2661.186， P<0.05）；對(duì)回歸方程的兩個(gè)系數(shù)進(jìn)行t檢驗(yàn)， t（b）=-0.296， t（a）=51.587， P（b）=0.768>0.05， P（a）=0.000<0.05。

圖2 兩種方法比較的散點(diǎn)圖

2. 4 臨床可接受性能評(píng)價(jià)取兩個(gè)點(diǎn)0.23 ng/ml（<0.5 ng/ml）、

0.5 ng/ml分別代入線性回歸方程， 最終計(jì)算出SE%=6.90%、2.70%， 均<20%。

3 討論

臨床上細(xì)菌感染性疾病極為常見(jiàn)， 而病原學(xué)診斷耗時(shí)長(zhǎng)， 在微生物血培養(yǎng)結(jié)果出來(lái)前臨床上已盲目地使用抗菌藥物， 造成了抗菌藥物的濫用， 也加重了患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡快找到快捷、有效的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)細(xì)菌感染性疾病進(jìn)行診斷及鑒別診斷， 并準(zhǔn)確評(píng)價(jià)細(xì)菌感染性疾病的發(fā)生、發(fā)展， 有著非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值[5]， 尤其對(duì)于婦幼特殊人群。

本文采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)顯示：VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法和Wondfo 干式熒光免疫層析法檢測(cè)PCT結(jié)果具有的高度相關(guān)性（r=0.987， P<0.01）， 說(shuō)明試驗(yàn)數(shù)據(jù)分布合理、隨機(jī)誤差可以接受。從散點(diǎn)圖和偏倚圖中剔除離群值后， 兩種方法檢測(cè)的PCT結(jié)果表現(xiàn)出較好的線性， 回歸方程為：Y=1.069X-0.021。但回歸系數(shù)的t檢驗(yàn)表明：截距比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 而斜率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 說(shuō)明兩種方法間存在一定的比例誤差， 因此要設(shè)法找出誤差的變化規(guī)律， 用修正公式或修正曲線對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行修正， 以用于臨床病情及療效監(jiān)控。

據(jù)調(diào)查， 目前國(guó)內(nèi)三級(jí)甲等以上醫(yī)院的臨床實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)普及了自動(dòng)化儀器， 其中進(jìn)口設(shè)備以及試劑所占比例超過(guò) 95%， 基本上處于壟斷地位， 國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)免疫系統(tǒng)處于發(fā)展期[6]。

目前臨床上PCT的試劑大多為進(jìn)口儀器及其配套試劑盒， 試劑和耗材價(jià)格昂貴， 儀器維護(hù)成本高， 依賴(lài)性過(guò)強(qiáng)， 增加了患者的經(jīng)濟(jì)和精神上的負(fù)擔(dān)。然而， 有報(bào)告指出， 檢測(cè)設(shè)備方法為免疫層析法， 免疫層析膠體金技術(shù)無(wú)法直接實(shí)現(xiàn)定量和半定量， 而是通過(guò)反應(yīng)著色的比較間接定量有其不足[7]。

但無(wú)可厚非的是， 與VIDAS Brahms雙抗體免疫熒光法相比， 熒光免疫層析法檢測(cè)PCT無(wú)需昂貴的設(shè)備且操作簡(jiǎn)單、快速和價(jià)廉 [8]。Wondfo PCT檢測(cè)系統(tǒng)屬于及時(shí)檢測(cè)（POCT）系統(tǒng)， 具有方便放置、標(biāo)本用量少、檢測(cè)快捷等優(yōu)點(diǎn)， 在一定程度上保證了急診患者的快速定量檢測(cè)， 提高了服務(wù)質(zhì)量和降低了醫(yī)療費(fèi)用[9]。因此， 在POCT免疫層析法測(cè)定PCT在投入檢測(cè)前必須按照EP15-A2進(jìn)行精密度驗(yàn)證試驗(yàn)， 確定其通過(guò)精密度驗(yàn)證后再根據(jù)EP9進(jìn)行后續(xù)系統(tǒng)性的方法比對(duì)實(shí)驗(yàn)， 并進(jìn)行相關(guān)調(diào)整[10]， 以滿足臨床需求。

總之， 兩種方法檢測(cè)PCT結(jié)果具有高度的相關(guān)性， 但二者存在一定的比例誤差。Wondfo干式熒光免疫層析法檢測(cè)PCT可以用于臨床病情及療效監(jiān)控。

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[收稿日期：2017-04-17]