黃 濤， 付 波， 王 靜， 王 濱， 劉少君△， 翁謝川△

(1. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所神經(jīng)生物學(xué)研究室； 2. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院國家蛋白質(zhì)組學(xué)重點實驗室， 北京 100850；3. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所， 天津 300050)

HCN2在大鼠外周神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生中的作用*

黃 濤1,2， 付 波1,2， 王 靜3， 王 濱1,2， 劉少君1,2△， 翁謝川1,2△

(1. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所神經(jīng)生物學(xué)研究室； 2. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院國家蛋白質(zhì)組學(xué)重點實驗室， 北京 100850；3. 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所， 天津 300050)

目的初步探討超極化激活的環(huán)核苷酸門控通道2型(HCN2)在外周神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生中的作用。方法將24只健康成年大鼠進行隨機分組(n=12)：假手術(shù)組(Sham)大鼠僅分離左側(cè)L4、L5脊神經(jīng)，模型組(SNL)分離脊神經(jīng)后進行相應(yīng)的結(jié)扎處理，手術(shù)7 d后用行為學(xué)方法進行模型評價；將造模成功的大鼠進行隨機分組(n=6)：①陰性對照組(Saline)，左側(cè)足底注射生理鹽水；②陽性對照組(GBPT)，腹腔注射加巴噴丁；③實驗組(ZD7288)，左側(cè)足底注射HCN非特異性阻斷劑ZD7288。在給藥前以及給藥后1 h、4 h、24 h、48 h用疼痛行為學(xué)實驗檢測其對神經(jīng)病理性疼痛的作用；分別取手術(shù)前對照組(Control)、假手術(shù)組(Sham)和模型組(SNL)大鼠的背根神經(jīng)節(jié)(DRG)(n=6)，利用qPCR和Western blot的方法研究造模前后大鼠DRG內(nèi)HCN2的表達的變化情況。結(jié)果①成功建立大鼠神經(jīng)痛模型；②與Saline組比較，GBPT組和ZD7288組在注射1 h后，均能明顯的減輕大鼠神經(jīng)病理性疼痛的癥狀(P<0.01)，而GBPT組和ZD7288組之間比較則無差異；③與Control組和Sham組相比較，SNL組大鼠DRG內(nèi)的HCN2 mRNA表達量明顯增加(P<0.01)；與Control組和Sham組相比較，SNL組大鼠DRG內(nèi)的HCN2 通道蛋白表達量顯著增加(P<0.05)。結(jié)論HCN2參與外周神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生，并有可能成為治療神經(jīng)病理性疼痛一個潛在的新靶點。

外周神經(jīng)病理性疼痛；HCN2；背根神經(jīng)節(jié)；大鼠

神經(jīng)病理性疼痛(neuropathic pain，NPP)是由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病而直接造成一種慢性疼痛。其表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺過敏、異常疼痛和感覺異常等臨床特征。根據(jù)流行病學(xué)的研究，人群患有神經(jīng)病理性疼痛的概率高達6.9%～10%[1]。許多疾病都能誘發(fā)神經(jīng)病理性疼痛，例如糖尿病、帶狀孢疹、甲狀腺功能低下以及抑郁癥等。由于造成神經(jīng)病理性疼痛的因素多樣，其發(fā)病機制尚不明確，目前尚無有效的治療手段。當(dāng)前針對神經(jīng)病理性疼痛的研究主要集中在神經(jīng)電生理的改變、周圍和中樞神經(jīng)敏化、離子通道改變和新治療靶點和新途徑的探索等方面。

HCN (hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels)通道即超極化激活的環(huán)核苷酸門控通道，共有四種亞型HCN1、HCN2、HCN3和HCN4。HCN通道由4個同源或異源亞基聚合而成，具有以下特性[2]：(1)具有獨特的電壓依賴性，只有膜電位超極化時才被激活產(chǎn)生Ih電流；(2)具有非特異性的鈉、鉀離子通透性；(3)可直接受cAMP的調(diào)節(jié)；(4)對Cs+敏感，可以被其阻斷。研究發(fā)現(xiàn)，HCN通道可以影響細胞膜靜息電位，參與眾多生理病理功能的調(diào)節(jié)，維持神經(jīng)元興奮性和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的共振[2,3]。

研究顯示，HCN通道廣泛分布于痛覺傳導(dǎo)通路并在疼痛形成和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用[4-6]。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，HCN通道的亞型HCN2參與慢性炎性疼痛，其機制可能與慢性炎性條件下HCN2的表達上調(diào)和生物物理學(xué)特性改變相關(guān)[5]。神經(jīng)病理性疼痛，不同于慢性炎性疼痛，但其臨床癥狀提示我們HCN通道也有可能參與該疼痛的發(fā)生過程。因此，本實驗擬采用脊神經(jīng)結(jié)扎損傷(spinal nerve ligation, SNL)這一經(jīng)典的神經(jīng)痛模型，結(jié)合疼痛的行為學(xué)評價和藥理學(xué)實驗，以及分子生物學(xué)研究來闡述這一問題，探討HCN2在外周神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生中的作用，為進一步闡明神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生機制提供理論依據(jù)，也為神經(jīng)病理性痛的診療提供新的線索。

1 材料與方法

1.1 材料

鉻制羊腸線、醫(yī)用真絲編織線(上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品有限公司)；GBPT、HCN2單克隆抗體(Sigma-Aldrich)；ZD7288(Tocris Bioscience，UK)；總RNA提取試劑盒(北京天根生物科技有限公司)；SYBR Green、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TOYOBO)；山羊抗鼠IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；戊巴比妥鈉(北京化學(xué)試劑公司)；0.9%無菌生理鹽水(石家莊四藥有限公司)；多聚甲醛(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.2 主要儀器

微量移液器、離心機(Eppendorf，德國)；Von Frey filaments(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；YLS-6B智能熱板儀(上海精密儀器儀表有限公司)；PCR儀、熒光實時定量PCR儀(Life Technology，美國)；-80℃冰箱(海爾)；實驗動物專用手術(shù)器械(上海醫(yī)療器械有限公司手術(shù)器械廠)。

1.3 實驗動物模型的建立

實驗所用動物為SPF級雄性SD大鼠，體重180～220 g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供。實驗開始前，對實驗動物進行適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，然后進行痛閾相關(guān)的的行為學(xué)檢測，剔除痛覺過敏的大鼠。將符合實驗標(biāo)準(zhǔn)的大鼠進行隨機分組(n=12)，模型組(SNL)按如下步驟進行手術(shù)操作：腹腔注射戊巴比妥鈉(60 mg/kg)對實驗大鼠進行麻醉，待大鼠失去知覺后對大鼠腰部進行剃毛備皮，并固定于手術(shù)臺上。根據(jù)大鼠髂骨頂端與第六腰椎齊平為依據(jù)[7]，找到第四腰椎和第五腰椎的位置，從大鼠左側(cè)靠近腰椎處將表皮切開3 cm左右，分離肌肉組織，暴露出背根神經(jīng)。用鉻制羊腸線在L4背根神經(jīng)上打一寬松的套環(huán)，用絲線將L5背根神經(jīng)進行緊密結(jié)扎。術(shù)后對傷口進行消毒縫合；假手術(shù)組(Sham)只對大鼠L4、L5背根神經(jīng)進行分離而不損傷。手術(shù)7 d后，再次對大鼠進行行為學(xué)檢測，用統(tǒng)計學(xué)方法評價模型是否成功。

1.4 行為學(xué)檢測

1.4.1 機械痛實驗 利用Von Frey filaments檢測大鼠機械刺激縮足反射閾值：將20 cm×20 cm×25 cm的透明有機玻璃箱放置于頂部為鐵絲網(wǎng)的架子上。將大鼠放入箱內(nèi)適應(yīng)20 min，使其停止探索活動和修飾行為。實驗者用Von Frey纖維絲穿過鐵絲網(wǎng)刺激大鼠左后肢外側(cè)三分之一的部位。刺激所用的纖維絲強度包括(g)：2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、15.0。根據(jù)由小到大的原則，從2.0 g開始刺激。如果大鼠出現(xiàn)縮足反應(yīng)或舔足行為，則換上一強度的纖維絲，反之則換下一強度的纖維絲。取包括第一次出現(xiàn)反應(yīng)之后的6次測量值，重復(fù)測量2次，每次測量間隔5 min。按照50%的閾值計算疼痛的感知情況[8]。

1.4.2 熱板實驗 將YLS-6B智能熱板儀設(shè)置為將熱板加熱至56℃。實驗者迅速將大鼠放入熱板儀內(nèi)，同時腳踩計時踏板。若觀察到大鼠左后肢出現(xiàn)明顯的抬起動作或舔足動作，則立刻再次踩下踏板停止計時。此時儀器所顯示的即為大鼠熱痛閾值。重復(fù)測量2次，每次測量間隔5 min。

1.4.3 自發(fā)抬足實驗 自發(fā)抬足被認為是自發(fā)性神經(jīng)痛的重要指標(biāo)。將大鼠放入上述鐵絲網(wǎng)架上的透明箱內(nèi)，使其適應(yīng)20 min進入安靜狀態(tài)。記錄5 min內(nèi)大鼠自發(fā)抬起左后肢的時間(走動及舔足不納入記錄標(biāo)準(zhǔn))。重復(fù)記錄2次，中間間隔5 min。

1.5 藥理學(xué)實驗

ZD7288是HCN離子通道的非特異性阻斷劑，加巴噴丁(gabapentin, GBPT)則是目前用于治療神經(jīng)病理性疼痛的一種抗癲癇藥物。通過給藥前后的行為學(xué)檢測，觀察ZD7288是否能起到逆轉(zhuǎn)疼痛的作用，進而說明HCN2是否參與外周神經(jīng)病理性疼痛。將造模成功后的大鼠進行隨機分組(n=6)，按如下方法進行給藥試驗：①陰性對照組(Saline)，足底注射0.9%生理鹽水，注射劑量為500 μl/kg；②陽性對照組(GBPT)，腹腔注射0.9%生理鹽水配制的加巴噴丁溶液，注射劑量為10 mg/kg；③實驗組(ZD7288)，足底注射0.9%生理鹽水配制的ZD7288溶液，注射劑量為15 μg/kg。分別測量給藥前和給藥后1 h、4 h、24 h、48 h 5個時間點的上述3個行為學(xué)指標(biāo)。

1.6 qPCR檢測HCN2 mRNA的變化

隨機選取造模前正常大鼠(Control)、造模后假手術(shù)組(Sham)和造模成功后的模型組(SNL)大鼠各6只，分離得到其背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglia, DRG)，用總RNA提取試劑盒提取大鼠DRG總RNA，再用紫外分光光度計測量其濃度。取1.2 μg總RNA，利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。將cDNA稀釋兩倍后，取2 μl進行qPCR。上游引物為5’-CCGGCGTCAACAAGTTCTC-3’，下游的引物設(shè)計為5’-TGCCCACGGGAATGATAATGA-3’，產(chǎn)物大小為180 bp。PCR擴增體系：逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2 μl，上下游引物各0.4 μl，2×QuantiTect SYBR green PCR Master Mix 10 μl，Nuclease-free Water 5.2 μl，10×plus one 2 μl。擴增條件：95℃預(yù)變性10 min；95℃ 15 s，60℃ 1 min，40個循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-△△Ct方法計算目的基因的改變倍數(shù)。

1.7 Western blot 檢測HCN2的表達情況

隨機選取造模前正常大鼠(Control)、造模后假手術(shù)組(Sham)和造模成功后的模型組(SNL)大鼠各6只，分離得到其DRG，用液氮研磨后，加蛋白裂解液置于冰上裂解30 min，12 000 r/min，4℃，離心10 min，吸取上清，用BCA檢測試劑盒檢測蛋白濃度；12% SDS-PAGE膠電泳，電轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂牛奶粉室溫封閉1 h；孵育一抗，抗體稀釋比：GAPDH(1∶1 000)，HCN2(1∶1 000)，4℃，過夜；TBST漂洗10 min×3次，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗，室溫孵育2 h；TBST漂洗10 min×3次，滴加顯影液于PVDF膜上，在全自動凝膠成像分析儀上，根據(jù)Marker進行掃描成像。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)病理性疼痛模型的建立和評價

神經(jīng)病理性疼痛脊神經(jīng)結(jié)扎(SNL)模型大鼠的手術(shù)方法如前所述。手術(shù)前分別對假手術(shù)組(Sham)和模型組(SNL)進行機械痛實驗、熱板實驗和自發(fā)抬足實驗。手術(shù)后7 d，再次進行上述3項行為學(xué)檢測。經(jīng)統(tǒng)計分析，在機械痛實驗中(圖1A)，Sham組術(shù)前術(shù)后分別為(11.22±0.87 g，11.69±0.70 g)，而SNL組為(11.62±0.82 g，7.84±0.39 g，P<0.01)；在熱板實驗中(圖1B)，Sham組術(shù)前術(shù)后分別為(7.59±0.35 s，7.41±0.51 s)，而SNL組分別為(7.85±0.37 s，4.68±0.45 s，P<0.01)；在自發(fā)抬足實驗中(圖1C)，Sham組術(shù)前術(shù)5 min抬足時間為(2.42±0.38 s，2.21±0.42 s)，而SNL組為(2.13±0.32 s，8.29±0.56 s，P<0.01)。以上實驗結(jié)果表明，SNL組大鼠的熱痛閾值和機械痛閾值明顯降低，自發(fā)抬足時長明顯增加，模型成功建立。

Fig.1Effects of operation on mechanical and heat hypersensitivity and spontaneous foot lifting (SFL) (n=12) SNL-operation significantly decreased mean paw withdrawal threshold to a mechanical stimulus(A) and mean paw withdrawal latency to a hot plate stimulus(B). C shows significantly longer SFL duration in SNL group**P<0.01vspreoperation

2.2 HCN通道阻斷劑對大鼠行為學(xué)指標(biāo)的影響

將給藥前和給藥后1 h、4 h、24 h、48 h的行為學(xué)進行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示：在機械痛方面(圖2A)，與Saline組(6.44±0.72 g)相比，大鼠腹腔注射GBPT(11.14±1.07 g)和足底注射ZD7288(12.34±0.72 g)1 h的時候，都能使大鼠50%機械刺激反射閾值明顯增高(P<0.01)，同時GBPT組和ZD7288組之間沒有差異；在熱板實驗中(圖2B)，與Saline組(4.02±0.27s)相比，大鼠熱痛閾值也顯著提高，分別為GBPT組(5.61±0.29 s，P<0.01)、ZD7288組(5.80±0.35 s，P<0.01)；此外，給予GBPT和ZD7288后1 h、4 h都能減少大鼠自發(fā)抬足的時間(圖2C)，在1 h時，ZD7288(1.75±0.39 s，P<0.01)效果優(yōu)于GBPT(3.75±0.76 s，P<0.01)，此時，Saline組為(8.75±0.82 s)，而在4 h時，GBPT(4.92±0.53 s，P<0.01)效果則優(yōu)于ZD7288(5.50±0.71 s，P<0.05)，此時Saline組為(8.16±0.89 s)。以上結(jié)果提示HCN通道的阻斷劑ZD7288能起到逆轉(zhuǎn)疼痛的作用。

Fig.2Effects of operation on mechanical and heat hypersensitivity and spontaneous foot lifting (SFL) (n=6) ZD7288 significantly increased mean paw withdrawal threshold to a mechanical stimulus(A) and mean paw withdrawal latency to a hot plate stimulus(B) at 1 h. C shows ZD7288 deceased the rats’ duration of SFL at 1 h and 4 h*P<0.05，**P<0.01vssaline group

2.3 造模前后大鼠DRG內(nèi)HCN2的表達變化

通過qPCR實驗檢測并計算2-△△CT值，結(jié)果如圖(3A)所示，對比手術(shù)前Control組(1.13±0.15)，Sham組(1.27±0.10)大鼠DRG內(nèi)HCN2的mRNA無顯著變化，而SNL組(3.16±0.46)大鼠DRG內(nèi)HCN2的mRNA量明顯增加(P<0.01)；同時與Sham組相比，SNL組的2-△△CT值也明顯增大(P<0.01)。Western blot實驗結(jié)果顯示(圖3B、3C)，SNL組大鼠DRG內(nèi)HCN2蛋白表達水平也有所提高，各組中HCN2蛋白條帶相較于內(nèi)參GAPDH條帶的灰度比分別是Control組(0.58±0.04)、Sham組(0.61±0.01)，SNL組(0.81±0.05)，P<0.05。以上結(jié)果說明HCN2隨著神經(jīng)痛的形成而表達上調(diào)，提示HCN2與神經(jīng)病理性疼痛的形成相關(guān)聯(lián)。

Fig.3The expression of HCN2 in rats’DRG(n=6) A shows that the mRNA significantly increased in SNL group’s DRG. B and C shows the HCN2 protein increased in SNL group’s DRG. The results indicate HCN2 channels contribute to the mechanisms of neuropathic pain*P<0.05，**P<0.01vssham group

3 討論

神經(jīng)病理性疼痛是目前臨床上難以解決的問題之一。它的發(fā)生部位、發(fā)生時間、臨床癥狀和誘發(fā)原因都沒有固定的模式。神經(jīng)病理性疼痛對患者造成的影響也因人而異，但是共同點是持續(xù)時間長，嚴重影響患者的正常生活。有的患者還可能因此引發(fā)失眠、焦慮、抑郁，甚至自殺。神經(jīng)病理性疼痛在臨床上還沒有針對性的有效藥物，目前使用較多的是抗癲癇藥物(普瑞巴林、加巴噴丁)、抗抑郁藥(三環(huán)、非三環(huán)抗抑郁藥)以及阿片類等其他藥物[9]。這些藥物普遍存在著作用靶點不明、副作用多、緩解疼痛效率低及易復(fù)發(fā)等缺點。因此，尋找新的藥物治療靶點無疑對神經(jīng)病理性疼痛的臨床治療具有重要的意義。

關(guān)于神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生，傳入神經(jīng)元受損異常放電假說是目前比較公認的機制之一。該假說認為，外周神經(jīng)損傷后產(chǎn)生的自發(fā)疼痛和誘發(fā)痛與受損部位神經(jīng)元自發(fā)和持續(xù)性地異常放電密切相關(guān)，而這種異常放電與離子通道的異常相關(guān)[10]，如Na1.3、Na1.7、Na1.8、Na1.9以及鈉激活型鉀離子通道等，是目前研究較多的與疼痛相關(guān)的鈉離子通道亞型[11]。研究表明，HCN通道在維持膜電位的穩(wěn)定性和細胞興奮性發(fā)揮了重要的作用。HCN通道與一般的鈉、鉀離子通道最大的不同點是它只有在超極化時被激活，同時產(chǎn)生一個內(nèi)向的Ih電流。當(dāng)HCN通道與cAMP結(jié)合并激活時，Ih電流可以使靜息膜電位去極化，進而提高神經(jīng)元的放電頻率。本研究通過一系列實驗證實HCN2參與外周神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生，其表達量在神經(jīng)痛大鼠DRG內(nèi)顯著增加。該結(jié)果提示我們HCN2在外周神經(jīng)病理性疼痛中的作用是維持傷害性感覺神經(jīng)元的興奮性，從而產(chǎn)生持續(xù)的、異常的疼痛。

前已述及，HCN2參與炎性疼痛已被證實，它是炎性介質(zhì)PGE2的作用靶點。PGE2在外周和中樞敏化中發(fā)揮重要作用，而中樞敏化是慢性疼痛的原因之一[12]。近期的研究發(fā)現(xiàn)COX2缺失的小鼠在神經(jīng)病理性疼痛中表現(xiàn)出更加緩和的癥狀，而COX2是PGE2合成相關(guān)的酶。這就提示我們，HCN2不但參與兩種疼痛的發(fā)生，還極有可能是炎性疼痛向神經(jīng)病理性疼痛過渡的橋梁。

本研究采用的是目前常用的神經(jīng)病理性疼痛模型之一(SNL)，其造模成功率較高，最快術(shù)后3 d即可檢測到痛閾值的變化，7～10 d后大鼠痛覺變化最明顯，而且它持續(xù)時間長，往往可以觀察8周以上[13, 14]。在藥理學(xué)實驗中，前文提到HCN通道對Cs+敏感，可快速結(jié)合胞外的Cs+并發(fā)生阻滯，但因為Cs+同時是非選擇性的鉀通道阻斷劑并具有一定的毒性，因此我們選擇更為安全有效的HCN通道的非特異性阻斷劑ZD7288。所謂非特異性阻斷劑，即ZD7288會同阻斷HCN通道的4種亞型，因此僅通過藥理學(xué)實驗并不能判斷是HCN2發(fā)揮了逆轉(zhuǎn)疼痛的作用。但是根據(jù)已報道的研究結(jié)果，可以對其他3種亞型加以排除。第一，HCN1只在一小部分冷覺感受器上有分布，只占其表達總量的5%[15]。第二，HCN2在小的傷害性感覺神經(jīng)元上有較多表達[16]。第三，HCN3在DRG內(nèi)有較多表達，但是其全身敲除小鼠在痛覺方面沒有變化。第四，HCN4不表達于神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)[17]。綜上所述，HCN2是最有可能在外周神經(jīng)病理性疼痛中發(fā)揮作用。

本研究的結(jié)果只是證實HCN2參與外周神經(jīng)病理性疼痛，而我們最終的目的是要探究HCN2參與神經(jīng)病理性疼痛的機制，進而才有可能發(fā)現(xiàn)并利用潛在的治療靶點。孫瑞卿等[18]探討利用不同頻率的電針治療神經(jīng)病理性疼痛，其原理是促進腦啡肽和內(nèi)嗎啡肽的釋放。實際上，由于HCN2的放電特性，它在神經(jīng)遞質(zhì)的釋放方面也具有調(diào)節(jié)作用。因此，研究如何利用HCN2的電生理特性，將有可能為神經(jīng)病理性疼痛的治療找到新的策略。

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EffectsofHCN2inthedevelopmentofperipheralneuropathicpaininrats

HUANG Tao1,2, FU Bo1,2, WANG Jing3, WANG Bin1,2, LIU Shao-jun1,2△, WENG Xie-chuan1,2△

(1. Department of Biology, Institute of Basic Medical Science, Academy of Military Medical Science; 2. State Key Laboratory of Proteomics, Beijing 100850; 3. Institute of Health and Environmental Medicine, Academy of Military Medical Sciences, Tianjin 300050, China)

Objective: To explore the effects of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channels 2(HCN2) in the formation of peripheral neuropathic pain in rats.MethodsTwenty-four healthy adult rats were divided into two groups randomly(n=12): the sham group rats were only isolated the left L4, L5 spinal nerve, the spinal nerve ligation(SNL) group was separated the spinal nerve and performed the corresponding ligation. The behavioral experiments were tested 7 days after operation; The model rats were randomly divided into 3 groups(n=6): ① negative group(Saline), intra-plantar injection of saline in left hindpaws; ② positive group(gabapentin, GBPT), intraperitoneal injection of gabapentin; ③ experimental group(ZD7288), intra-plantar injection of ZD7288 in left hindpaws. The behavioral experiments were tested before injection and 1 h, 4 h, 24 h and 48 h after injection; Obtaining the dorsal root ganglion(DRG) of the control group (before operation), sham group and the SNL group(n=6), using qPCR and Western blot to analyze the mRNA and protein of HCN2 in rats’ DRG.ResultsThe rat model of neuropathic pain was successfully established. Compared with saline group, GBPT group and ZD7288 group could significantly reduce the symptoms of neuropathic pain in rats after injection 1 h (P<0.01), and there was no difference between GBPT group and ZD7288 group. Compared with control group and sham group, the expression of HCN2 mRNA in SNL group’s DRG was significantly increased (P<0.01), and the expression of HCN2 channel protein was also increased significantly (P<0.05).ConclusionHCN2 is involved in the development of peripheral neuropathic pain and is likely to be a potential new target for the treatment of neuropathic pain.

peripheral neuropathic pain; HCN2; DRG; rat

Q28

A

1000-6834(2017)04-294-06

北京市自然科學(xué)基金面上項目(7142123)；蛋白質(zhì)組學(xué)國家重點實驗室優(yōu)青課題(SKLP-YB201403)；總裝預(yù)研基金課題(9140A26060215JB94001)

2017-03-01

2017-06-02

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Tel: 010-66931304, 010-66931345; E-mail: liusj@bmi.ac.cn, wengxc2000@sina.com

10.12047/j.cjap.5574.2017.072