張翠霞 方慶全 陳世東

甲狀腺冷凍切片速凍方法的研究

張翠霞1方慶全1陳世東2

目的探討甲狀腺冷凍切片較佳的速凍方法。方法通過實(shí)驗(yàn)，比較不同速凍方法對甲狀腺冷凍切片制片質(zhì)量的影響。結(jié)果預(yù)先在冷凍切片托頭上制作一層厚約0．1 cm的膠水凍成的“冰墊”，速凍甲狀腺組織前，取出預(yù)先制作的“冰墊”托頭，于室溫中回暖 3～5 s 后，將切取組織置于“冰墊”托頭上，再加適量膠水，將托頭連同組織放置于已經(jīng)預(yù)先冷凍至-25℃的凍臺上速凍是一種較佳的速凍方法。結(jié)論優(yōu)化甲狀腺組織速凍方法，可減少甲狀腺冷凍切片時(shí)的崩裂現(xiàn)象、減少冷凍切片的冰晶與裂隙現(xiàn)象，顯著提高冷凍切片質(zhì)量。

甲狀腺；冷凍切片；速凍；質(zhì)量

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，冷凍切片得到了廣泛應(yīng)用[1-2]。冷凍制片技術(shù)是術(shù)中快速病理診斷的基石，如何在有限的時(shí)間內(nèi)又快又好地完成制片，不僅是病理診斷的需要，更是術(shù)中醫(yī)師的迫切要求[3]。而制作甲狀腺組織冷凍切片時(shí)，切片易出現(xiàn)組織崩裂、冰晶、裂隙等情況[4]。為此，作者通過實(shí)驗(yàn)，探討較佳的甲狀腺冷凍切片速凍方法。

1 資料與方法

1.1 資料

收集廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科2017年1—6月的30例甲狀腺冷凍切片標(biāo)本，患者年齡22～71歲，平均年齡（37.9±11.2）歲。

1.2 設(shè)備與試劑

設(shè)備：LEICA CM1950冷凍切片機(jī)（德國萊卡）；試劑：普通膠水、AAF液（由乙酸A : 95%乙醇A : 甲醛F = 5 : 85 : 10組成）。

1.3 制作“冰墊”托頭

取若干個(gè)冷凍切片機(jī)配套的托頭，加上約 0.3 cm 厚膠水后，置于冷凍切片機(jī)的凍臺上速凍，膠水凍成凍塊后，用冷凍切片機(jī)將托頭上凍塊修平并修至余下約0.1 cm厚，形成帶“冰墊”托頭，置于預(yù)先設(shè)置為-25℃的冷凍切片機(jī)凍臺上備用。

1.4 不同速凍方法下甲狀腺冷凍切片的制備

取術(shù)中新鮮甲狀腺標(biāo)本，每例切取6塊大小為 1.5 cm×1.5 cm×0.3 cm 的甲狀腺組織，取出預(yù)先制作的“冰墊”托頭，于室溫中回暖 3～5 s 后，隨機(jī)取其中1塊甲狀腺組織置于“冰墊”托頭上，再加適量膠水，將托頭連同組織放置于已經(jīng)預(yù)先冷凍至-25℃的凍臺上速凍，待甲狀腺組織與后加的膠水凍成凍塊時(shí)，按常規(guī)進(jìn)行切片、固定、染色、中性樹膠封固[5]，顯微鏡觀察（A組）；隨機(jī)再取1塊組織，立即放置于已預(yù)先冷凍至-25℃、未于室溫回暖的“冰墊”托頭上，余操作同A組（B組）；隨機(jī)再取1塊組織，操作基本同A組，不同的是：將托頭連同組織放置于已預(yù)先冷凍至-18℃的凍臺上速凍，余操作同A組（C組）；隨機(jī)再取1塊組織，立即放置于已預(yù)先冷凍至-25℃、未預(yù)先制作“冰墊”的托頭上，余操作同A組（D組）；隨機(jī)再取1塊組織，放置于常溫托頭上，加適量膠水后，置于-25℃的凍臺上速凍，余操作同A組（E組）；剩余的1塊組織置于常溫托頭上，加適量膠水，托頭底部蘸少許自來水后放置于已經(jīng)預(yù)先冷凍至-25℃的凍臺上速凍，余操作同A組（F組）。比較6種不同速凍方法下甲狀腺冷凍切片組織塊崩裂機(jī)率、速凍的時(shí)間（組織放置于冷凍切片機(jī)凍臺上至剛剛凍成凍塊的時(shí)間），及無冰晶、無裂隙、組織結(jié)構(gòu)清晰等指標(biāo)的得分情況。

1.5 制片質(zhì)量觀察指標(biāo)

無冰晶、無裂隙、組織結(jié)構(gòu)清晰指標(biāo)各10分，由2名副主任以上醫(yī)師進(jìn)行雙盲評片，每項(xiàng)指標(biāo)數(shù)據(jù)為評分均值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 20.0 進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料均呈正態(tài)分布，用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，2組間比較采用student-t 檢驗(yàn)，多組間使用方差分析，以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 組織塊崩裂現(xiàn)象

A、C、E、F組未出現(xiàn)冷凍組織塊崩裂現(xiàn)象，B組 13.3%（4/30）、D組16.7%（5/30）出現(xiàn)冷凍組織塊崩裂現(xiàn)象，B、D 2組分別與其它4組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.29、5.45，P均＜0.05）。

2.2 速凍時(shí)間

A、B、C、D、E、F組平均速凍時(shí)間分別為（83.4±11.2）s、（82.7±10.1）s、（107.1±12.8）s、（86.4±9.6）s、（169.6±17.7）s、（85.1±9.7）s，A組平均速凍時(shí)間顯著少于 C、E 組（P均＜0.05）；A、B、D、F 4組平均速凍時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 制片質(zhì)量的比較

不同速凍方法甲狀腺冷凍切片無冰晶、無裂隙、組織結(jié)構(gòu)清晰指標(biāo)的得分情況見表1。由表1可見，A、B、D、F 4組無冰晶、無裂隙、組織結(jié)構(gòu)清晰指標(biāo)的得分組間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）；C、E 2組無冰晶、無裂隙、組織結(jié)構(gòu)清晰指標(biāo)的得分均低于A組（P均＜0.05）。

2.4 托頭夾持穩(wěn)定性

A、B、C、D、E 5組的托頭夾持穩(wěn)定性好，未出現(xiàn)夾持不穩(wěn)現(xiàn)象 ；F組有4個(gè)托頭底部因蘸水太多，托頭底部與周圍粘附冰塊過多，需要去除多余冰塊后，托頭才能與冰凍切片機(jī)的夾頭穩(wěn)定地夾持。F組托頭夾持穩(wěn)定性與其它5組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2均=4.29，P均＜0.05）。

3 討論

冷凍切片是采用冷凍的方法使組織在較短時(shí)間內(nèi)變硬切成薄片，其原理是利用物理降溫的方法，使組織達(dá)到一定硬度進(jìn)行切片的一種方法[6]。冷凍切片技術(shù)在病理診斷中具有舉足輕重的作用[7-8]。

速凍是冷凍切片的關(guān)鍵步驟之一，速凍的目的是使組織在較短時(shí)間變硬，以便于后續(xù)的切片工作。B組將組織塊放置于預(yù)先制作的“冰墊”托頭時(shí)，未將托頭取出于室溫回暖 3～5 s，導(dǎo)致組織與托頭粘附不牢固，后續(xù)切片時(shí)組織塊崩裂率達(dá)13.3%；C組用-18℃的凍臺進(jìn)行速凍，速凍速度較慢，因此產(chǎn)生的冰晶與裂隙較多，組織結(jié)構(gòu)也較為不清晰；D組組織塊放置于預(yù)先冷凍至-25℃、未預(yù)先制作“冰墊”的托頭上速凍，組織與托頭粘附不牢固，后續(xù)切片時(shí)組織塊崩裂率達(dá)16.7%；E組組織放置于常溫托頭上，再放入冷凍切片機(jī)凍臺上速凍，速凍速度慢，因此產(chǎn)生冰晶與裂隙多，組織結(jié)構(gòu)也較為不清晰；F組在托頭底部蘸少許自來水后放置于凍臺上速凍，水能提高托頭與凍臺接觸的緊密性，所以速凍速度較快，但在托頭底部蘸少許水時(shí)，蘸水太少則效果較差，蘸水太多則會影響托頭與冷凍切片機(jī)夾頭的夾持穩(wěn)定性。

綜上所述，A組的速凍方法冷凍速度快，可減少甲狀腺冷凍切片時(shí)的蹦裂現(xiàn)象，減少冷凍切片的冰晶與裂隙現(xiàn)象，托頭夾持穩(wěn)定性好，可提高冷凍切片質(zhì)量，值得推薦。

表1 不同速凍方法甲狀腺冷凍切片相關(guān)指標(biāo)評分結(jié)果（分）

[1] 張紅紅． 冷凍切片與術(shù)中細(xì)胞學(xué)診斷卵巢腫瘤的對比研究[J]． 中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理，2016，7（11）：185-186．

[2] Sala P，Morotti M，Menada MV，et a1． Intraoperative frozen section risk assessment accurately tailors the surgical staging in patients affected by early-stage endometrial cancer：the application of 2 different risk algorithms[J]． Int J Gynecol Cancer，2014，24（6）：1021-1026．

[3] 薛曉偉 孫保存，王偉，等． 首屆全國病理技術(shù)“華夏杯”冷凍切片總決賽結(jié)果分析［J］． 中華病理學(xué)雜志，2016，45（6）：413-414．

[4] 秦嶺，蔡江義． 冷凍切片結(jié)合細(xì)胞學(xué)涂片在卵巢腫瘤病理診斷中的臨床價(jià)值[J]． 中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2016，8（7）：39-40．

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[6] 王德田，董建強(qiáng)． 實(shí)用現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)[M]． 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2012：80．

[7] 黃波濤，林秀峰，朱云，等． 甲狀腺微小乳頭狀癌的冷凍病理特征與中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究[J]． 診斷病理學(xué)雜志，2016，23（6）：444-447．

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Study on the Quick-Frozen Method of Thyroid Frozen Section

ZHANG Cuixia1FANG Qingquan1CHEN Shidong21 Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen Fujian 361003, China; 2 Department of Clinical Laboratory

ObjectiveTo explore a better quick-frozen method of thyroid frozen section.MethodsThe effect of different frozen methods on the quality of thyroid frozen section was compared.ResultsIt was a kind of better quick-frozen method that pre-made a frozen mat made of 0.1 cm thick glue on the frozen section holder ,and took it out to pick up 3～5 s at room temperature and placed the thyroid tissue on the top of the frozen mat, and then placed the holder with the thyroid tissue in the freezing microtome at -25℃ after adding right amount of glue on the holder.ConclusionOptimizing the quick-frozen method of thyroid frozen section can reduce the crack, the ice crystal and the fracture, and significantly improve the quality of the thyroid frozen section.

thyroid; frozen section; quick-frozen; quality

R365

A

1674-9316（2017）23-0139-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．23．069

1 廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建 廈門 361003；2檢驗(yàn)科

陳世東