劉建華

ABO、RH（D）血型鑒定中卡式微柱凝膠技術(shù)的應(yīng)用

劉建華

目的探討ABO、RH（D）血型鑒定中卡式微柱凝膠技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值。方法以我院檢驗(yàn)科2015年8月—2016年8月的956份血液篩查標(biāo)本為研究對(duì)象，對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型鑒定，對(duì)鑒定結(jié)果及輸血結(jié)局進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果956份標(biāo)本內(nèi)共5例Rh（-）者，占總份數(shù)的0．52%，951例Rh（+）者，占總份數(shù)的99．48%?；颊逜、B、O、AB血型中Rh陰性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。血型鑒定后進(jìn)行交叉配血及輸血之后，所有受血者輸血之后沒(méi)有溶血癥狀等不良反應(yīng)。結(jié)論卡式微柱凝膠技術(shù)操作簡(jiǎn)單，鑒定準(zhǔn)確，是血站進(jìn)行ABO、RH（D）血型鑒定的首選。

血型鑒定；卡式微柱凝膠技術(shù)；應(yīng)用價(jià)值

現(xiàn)代醫(yī)療治療中，臨床輸血是治療的一項(xiàng)重要措施手段，輸血時(shí)對(duì)血型進(jìn)行精準(zhǔn)鑒定是確保輸血安全，避免溶血性輸血反應(yīng)的前提保障。RH（D）血型是同ABO 血型一樣具有重要意義的血型系統(tǒng)，RH（D）血型系統(tǒng)遺傳多態(tài)性強(qiáng)，只有通過(guò)特定手段對(duì)血型精準(zhǔn)鑒定才能預(yù)防輸血反應(yīng)，改善治療結(jié)局，確保輸血安全，為患者生命健康提供有利保障[1]。

玻片法及試管法是最傳統(tǒng)進(jìn)行血型鑒定的方法，但是這兩種鑒定方法費(fèi)力費(fèi)時(shí)，敏感性不佳，鑒定操作中自動(dòng)化、規(guī)范化難以實(shí)現(xiàn)，鑒定后難以對(duì)檢測(cè)結(jié)果有效保存。Lipierre 1986年發(fā)明了微柱凝膠血型鑒定技術(shù)，此種技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化檢測(cè)容易實(shí)現(xiàn)，檢測(cè)結(jié)果可靠，被許多血站、醫(yī)院廣泛應(yīng)用[2]。

1 資料及方法

1.1 一般資料

自我院檢驗(yàn)科隨機(jī)抽取2015年8月—2016年8月的956份血液篩查標(biāo)本，其中男512例，女444例，患者年齡22日～56歲，平均年齡（31.42±3.16）歲。

1.2 試劑儀器

1.2.1 試劑 ABO標(biāo)準(zhǔn)血清（長(zhǎng)春博得生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)），抗-D血清，5%標(biāo)準(zhǔn)A1、B、O型紅細(xì)胞懸液（上海血液生物制藥公司生產(chǎn)），凝聚胺試劑盒（康肽生物科技北京有限公司生產(chǎn)，ABO-Rh血型卡，稀釋液（強(qiáng)生（中國(guó)）醫(yī)療器材有限公司生產(chǎn)）。

1.2.2 儀器 AUTOVUE INNOVA全自動(dòng)血型分析儀，配套離心機(jī)，孵育器[強(qiáng)生（中國(guó)）醫(yī)療器材有限公司生產(chǎn)]。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 血型鑒定 每位供血者、受血者在交叉配血前均要首先進(jìn)行ABO血型的正向、反向血型復(fù)檢，進(jìn)行Rh 血型復(fù)檢[3]。對(duì)于正定型還有Rh 血型，將供血者、受血者的血液制備成1.5%的紅細(xì)胞懸液，取其中20μl加入至血型卡中，專(zhuān)用離心機(jī)進(jìn)行5 min離心后進(jìn)行結(jié)果判定。對(duì)于反定型，自供血者、受血者血漿中取40 μl，將這些血漿中加入20 μl ABO 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，隨后用專(zhuān)用離心機(jī)進(jìn)行5 min離心后進(jìn)行結(jié)果判定。

1.3.2 交叉配血 分別制備好1.5%的紅細(xì)胞懸液及同型供血者、受血者血清，對(duì)抗人球卡進(jìn)行標(biāo)記，在卡上每孔都滴加50 μl Liss 液；卡的主側(cè)添加20 μl 1.5%的紅細(xì)胞懸液及受血者血清40 μl；卡次側(cè)添加20 μl 1.5%的紅細(xì)胞懸液及供血者血清40 μl。隨后將血型卡在孵育器中37℃溫度下孵育10 min，專(zhuān)用離心機(jī)進(jìn)行5 min離心后對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，如果凝膠管的底部出現(xiàn)紅細(xì)胞沉積則血型為陰性；如果凝膠帶上部出現(xiàn)紅細(xì)胞聚集則血型為陽(yáng)性。

1.3.3 輸血治療 在進(jìn)行ABO血型及RH（D）血型篩查之后對(duì)不規(guī)則抗體進(jìn)行陽(yáng)性篩查，選擇血型抗體完全相合的血液對(duì)用血者進(jìn)行配血輸注；如果一時(shí)沒(méi)有找到血型抗體相合的，如抗-C抗體Rh陰性的A型血用血者可以選擇用Rh表面抗原是CCdee的O型血進(jìn)行輸注。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

將所獲得的數(shù)據(jù)輸入到SPSS 17.5軟件處理，計(jì)量資料用（±s）形式表示，用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用數(shù)（n）及百分率（%）的形式表示，用χ2檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

956份標(biāo)本內(nèi)共5例Rh（-）者，占總份數(shù)的0.52%，951例Rh（+）者，占總份數(shù)的99.48%?；颊逜、B、O、AB血型中Rh陰性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。血型鑒定后，及時(shí)交叉配血，輸血之后，所有受血者輸血之后沒(méi)有溶血癥狀等不良反應(yīng)。具體如表1所示。

3 討論

對(duì)血型鑒定來(lái)說(shuō)，玻片法、試管法為最傳統(tǒng)鑒定，不同鑒定方法具有不同優(yōu)勢(shì)。試管法是ABO、RH（D）血型鑒定的一個(gè)金標(biāo)準(zhǔn)，鑒定的結(jié)果更準(zhǔn)確，但是試管檢測(cè)法操作復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)鑒定難以實(shí)行規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化管理，因此從大規(guī)模血樣標(biāo)本來(lái)說(shuō)，這種方法并不適合。玻片鑒定法血樣無(wú)需離心處理，操作簡(jiǎn)單，適合血液普查，但這種鑒定方法反應(yīng)速度慢，鑒定時(shí)間長(zhǎng)，鑒定中容易忽略反應(yīng)弱凝集，從而出現(xiàn)定型上的判斷錯(cuò)誤[4]。

隨醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，微柱凝膠技術(shù)廣泛應(yīng)用于血型鑒定中，這種檢測(cè)技術(shù)屬免疫學(xué)范疇，凝膠檢測(cè)下會(huì)出現(xiàn)分子篩效應(yīng)，在紅細(xì)胞為主的凝膠內(nèi)，在這種分子篩作用下，紅細(xì)胞能同對(duì)應(yīng)抗體進(jìn)行結(jié)合。低速離心處理之后，所凝集的紅細(xì)胞會(huì)懸浮在凝膠內(nèi)，但是如果紅細(xì)胞同抗體沒(méi)有結(jié)合，這些凝集的紅細(xì)胞會(huì)在凝膠底部沉淀。

當(dāng)前微柱凝膠交叉配血已經(jīng)成為了國(guó)際上比較公認(rèn)的一種安全輸血方法，近些年來(lái)，國(guó)家出臺(tái)了輸血安全管理?xiàng)l例，在此種背景下，卡式微柱凝膠試驗(yàn)也被列入到血型檢測(cè)指標(biāo)中，能夠在血型檢測(cè)中對(duì)不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，臨床用血安全性大大提高。

Rh（-）血是比較稀有的熊貓血，此類(lèi)血量?jī)?chǔ)備比較少，而不同類(lèi)型輸血過(guò)程中因?yàn)檠褐兴鶖y帶的抗原不同，抗原間出現(xiàn)排斥反應(yīng)，這種排斥反應(yīng)也會(huì)讓輸血中發(fā)生溶血。有學(xué)者研究顯示反復(fù)輸血下，Rh抗原會(huì)在輸血刺激下產(chǎn)生新的抗體，新抗體一旦產(chǎn)生，患者再次輸血時(shí)，會(huì)有較高幾率產(chǎn)生輸血反應(yīng)，如果血站沒(méi)有新抗體所對(duì)應(yīng)的血液，患者生命安全會(huì)受到嚴(yán)重威脅[5]。因此在輸血前對(duì)Rh血型進(jìn)行預(yù)見(jiàn)性篩查檢測(cè)是非常必要的?；颊咻斞磻?yīng)輕則發(fā)熱、寒戰(zhàn)，重則出現(xiàn)溶血反應(yīng)，不僅影響輸血效果，嚴(yán)重還可能導(dǎo)致患者死亡。

卡式微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)的原理為將凝膠過(guò)濾技術(shù)同抗原抗體的免疫反應(yīng)有機(jī)結(jié)合，檢測(cè)過(guò)程中通過(guò)凝膠濃度對(duì)凝膠間隙大小進(jìn)行自動(dòng)調(diào)節(jié)，讓凝膠間間隙同紅細(xì)胞保持差不多大小，讓間隙只能通過(guò)游離狀態(tài)下的紅細(xì)胞通過(guò)。低速離心之后，抗原抗體發(fā)生反應(yīng)，并同紅細(xì)胞凝集起來(lái)，凝集后的紅細(xì)胞體積增大，此時(shí)就不能自孔隙通過(guò)了，只能在凝膠的上層漂流凝集。而沒(méi)有凝集的紅細(xì)胞則可以通過(guò)凝膠孔隙向凝膠柱底運(yùn)動(dòng)，這樣就將有無(wú)凝集實(shí)現(xiàn)了良好區(qū)分。

表1 血型鑒定結(jié)果

卡式微柱凝膠檢測(cè)過(guò)程中已經(jīng)將抗人球蛋白及各類(lèi)血型抗體添加到了凝膠中，此時(shí)凝膠內(nèi)只要將樣本細(xì)胞加入之后便可以實(shí)現(xiàn)定型，檢測(cè)操作過(guò)程簡(jiǎn)便[6]。強(qiáng)生血型儀試劑卡采用玻璃珠介質(zhì)，這種介質(zhì)可常溫保存，耐熱耐壓[7]。試劑卡檢測(cè)加樣、離心還有孵育所需要的時(shí)間都不多，經(jīng)過(guò)不同打孔器打孔后能夠避免交叉污染，試劑卡還存在急診插入功能，且結(jié)果顯示采取雙面讀取方式，讀取方式更安全，也能夠有效杜絕輸血過(guò)程中的安全隱患。

卡式微柱凝膠檢測(cè)具有敏感度高、檢測(cè)影響因素少、易于觀察、檢測(cè)特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，這種檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)成為臨床ABO、RH（D）血型鑒定及交叉配血的一個(gè)首選檢測(cè)方法。

此次研究的956例標(biāo)本中存在5例Rh（-）者，占總份數(shù)的0.52%，這個(gè)檢測(cè)結(jié)果比國(guó)家原衛(wèi)生部所統(tǒng)計(jì)的0.4%這個(gè)統(tǒng)計(jì)結(jié)果略高些[8]。血型鑒定之后，同受血者進(jìn)行交叉配血檢測(cè)，配血正常，給受血者輸血治療之后，患者沒(méi)有1例出現(xiàn)輸血反應(yīng)，ABO、RH（D）血型鑒定的準(zhǔn)確率達(dá)到了100%。

綜上所述，對(duì)ABO、RH（D）血型進(jìn)行準(zhǔn)確血型鑒定為確保臨床輸血安全，預(yù)防輸血過(guò)程中發(fā)生溶血性疾病的一個(gè)必要手段。卡式微柱凝膠檢測(cè)技術(shù)，價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)便，患者在存在輸血需要時(shí)能夠及時(shí)檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度高，準(zhǔn)確率高，更安全可靠，且在檢測(cè)過(guò)程中容易發(fā)現(xiàn)亞型，便于檢測(cè)實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化操作，為臨床大批量標(biāo)本快速檢測(cè)提供了保障，標(biāo)準(zhǔn)化操作后，檢測(cè)中認(rèn)為因素差錯(cuò)率少，能永久保存，臨床應(yīng)用價(jià)值高，是醫(yī)院進(jìn)行ABO、RH（D）血型鑒定的首選。

[1] Noah DN，Njouom R，Bonny A，et al． HBs antigene prevalence in blood donors and the risk of transfusion of hepatitis b at the central hospital of yaounde，cameroon[J]． Open Journal of Gastroenterology，2011，1（2）：61-65．

[2] Andoulo F A，Tagnisartre M，Noah D N，et al． Prevalence of the hepatitis B surface antigen in a population of workers in Cameroon[J]．Open Journal of Gastroenterology，2013，3（8）：323-327．

[3] 吳濤，周俊，王勤，等． ABO、Rh（D）血型快速鑒定紙卡臨床應(yīng)用研究 [J]． 人民軍醫(yī)，2015，58（12）：1404-1405．

[4] 李健，劉喜龍，譚為，等． 手工微柱凝膠免疫檢驗(yàn)法在ABO、RhD血型抗原鑒定中的應(yīng)用[J]． 當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016，22（10）：27-28．

[5] 周慧盈． 4819份新生兒臍帶血ABO 及 Rh（D）血型鑒定結(jié)果分析 [J]． 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（20）：3048-3050．

[6] 張勇萍，杜娟，楊世明，等． 4397例孕產(chǎn)婦ABO和RhD血型檢測(cè)及不規(guī)則抗體的分析[J]． 細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2016，32（5）：680-682．

[7] 王晨，張學(xué)慧，張鵬． GALILEO NEO自動(dòng)血型儀在ABO及Rh（D）血型鑒定中的應(yīng)用[J]． 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，31（2）：119-122．

[8] 黃會(huì)金． 微柱凝膠卡式法和試管抗人球蛋白法在新生兒ABO溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中的效果觀察[J]． 中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2015，22（18）：129-131．

Application of Cassette Microcolumn Gel Technique in Identification of ABO and RH (D) Blood Groups

LIU Jianhua Clinical Laboratory Department, The Fifth People's Hospital of Ji'nan, Ji'nan Shandong 250022, China

ObjectiveTo investigate cassette microcolumn gel technique in identification of ABO and RH (D) blood groups.Methods956 blood screening specimens in our hospital from August 2015 to August 2016 were selected as the research object, were performed on all specimens card micro column gel ABO, RH (D) blood group identification. Statistical analysis was made on the results of identification and blood transfusion.ResultsOf the 956 specimens, 5 cases were Rh (-), accounting for 0.52% of the total number, and 951 of Rh (+) accounted for 99.48% of the total number. There was no statistically significant difference in Rh negative rate in patients with A, B, O, and AB (P ＜ 0.05). After cross matching and blood transfusion, all blood recipients did not have hemolysis and other adverse reactions after blood type identification.ConclusionThis technique is simple and accurate.It is the first choice for ABO and RH (D) blood group identification in blood bank.

blood type identification; cassette microcolumn gel technology;application value

R446

A

1674-9316（2017）23-0122-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．23．060

濟(jì)南市第五人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濟(jì)南 250022