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淡紫擬青霉致角膜潰瘍1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)

2017-11-17 06:32王露霞彭亮紅李建勛李雪梅黃曉燕
臨床檢驗(yàn)雜志 2017年10期
關(guān)鍵詞:角膜炎分生孢子右眼

王露霞,彭亮紅,李建勛,李雪梅,黃曉燕

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院a.檢驗(yàn)科,b.眼科,c.皮膚科,廣州 510010)

淡紫擬青霉致角膜潰瘍1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)

王露霞a,彭亮紅b,李建勛a,李雪梅c,黃曉燕a

(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院a.檢驗(yàn)科,b.眼科,c.皮膚科,廣州 510010)

淡紫擬青霉;真菌性角膜炎;真菌感染

淡紫擬青霉(Paecilomyceslilacinus)是土壤和植物中普遍存在的腐生菌,是實(shí)驗(yàn)室及醫(yī)療器械常見(jiàn)的污染菌之一,對(duì)人類(lèi)是一種機(jī)會(huì)致病真菌。其感染常為醫(yī)源性感染或外傷所致,尤其好發(fā)于免疫缺陷宿主。本文報(bào)道1例由淡紫擬青霉引起的角膜潰瘍。

1 病歷摘要

患者,女,66歲,于4年前在農(nóng)田作業(yè)時(shí)用衣物擦拭右眼后即出現(xiàn)眼紅、眼痛、畏光、流淚,伴視力下降,未予特殊處理。上述癥狀出現(xiàn)2周后在外院就診,診斷為“感染性角膜炎”,予局部抗真菌、抗細(xì)菌治療(具體不詳),刮取角膜分泌物涂片+培養(yǎng),未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌和真菌?;颊咦杂X(jué)癥狀無(wú)好轉(zhuǎn),為求進(jìn)一步診治于2016年3月來(lái)我院就診,門(mén)診以“右眼角膜炎”收入眼科?;颊咧髟V有高血壓病史10年,否認(rèn)糖尿病史、肝炎病史、病毒感染史,無(wú)免疫缺陷,否認(rèn)外傷史。專(zhuān)科檢查:右眼視力為0.2,眼壓18.3;左眼視力為0.7,眼壓12.8。右眼瞼紅腫(+),結(jié)膜充血(++),角膜混濁,表面呈潰瘍面,有膿性分泌物。角膜病灶呈不同程度的白色苔垢樣物覆蓋,見(jiàn)圖1。根據(jù)角膜刮片、培養(yǎng)和分子生物學(xué)結(jié)果,最終診斷為淡紫擬青霉菌引起的真菌性角膜潰瘍。用克霉唑眼膏、那他霉素眼液、兩性霉素B眼液滴右眼,營(yíng)養(yǎng)角膜上皮藥物對(duì)癥治療,治療3周后患者癥狀好轉(zhuǎn),右眼視力恢復(fù)至0.5,結(jié)膜輕度充血,潰瘍面明顯縮小。刮取角膜分泌物鏡檢、真菌培養(yǎng)均陰性,予出院。出院后扔按上述方案治療3個(gè)月,以鞏固治療防止復(fù)發(fā),并返院復(fù)查,至今無(wú)復(fù)發(fā)。

圖1 角膜病灶呈不同程度的白色苔垢樣物覆蓋

2 微生物檢驗(yàn)

2.1角膜刮片鏡檢 角膜潰瘍組織刮片革蘭染色鏡檢可見(jiàn)分隔菌絲,見(jiàn)圖2。

2.2真菌培養(yǎng)及鏡下特征 角膜潰瘍組織接種沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)和馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)置于27 ℃培養(yǎng)。該菌在27 ℃時(shí)SDA、PDA上生長(zhǎng)迅速,第3天可見(jiàn)真菌菌落,菌落初為白色羊毛狀,逐漸轉(zhuǎn)為淡灰紫色,隨著時(shí)間延長(zhǎng)菌落變?yōu)榘祷易霞t色,菌落顏色呈同心圓分布,培養(yǎng)5 d左右菌落背面呈黃色,10 d后背面為粉紅色,見(jiàn)圖3、4、5。傳代培養(yǎng)置37 ℃時(shí)菌落生長(zhǎng)緩慢,40 ℃時(shí)生長(zhǎng)完全受抑制。小培養(yǎng)鏡下形態(tài):無(wú)色透明菌絲,帚狀分生孢子梗,分生孢子梗直立,長(zhǎng)約40~600 μm,寬3.0~4.0 μm,壁粗糙,黃色,梗基緊密成簇,上有2~4輪瓶梗,其頂端帚狀枝一般單輪生,瓶?;颗虼?,頂端尖細(xì),形成細(xì)長(zhǎng)的產(chǎn)分生孢子管狀小體(約1 μm);分生孢子橢圓形或近球形,壁光滑或粗糙,長(zhǎng)約2.5~3 μm,寬2.0~2.2 μm, 分生孢子鏈呈柱狀或分散柱狀。見(jiàn)圖6。

圖2 組織刮片革蘭染色鏡檢見(jiàn)分隔菌絲(×1 000)

圖3 SDA上生長(zhǎng)4 d菌落顏色及形態(tài)

圖4 SDA生長(zhǎng)10 d左右菌落顏色

圖5 SDA生長(zhǎng)5 d左右菌落背面顏色

圖6 小培養(yǎng)鏡下形態(tài)(乳酸酚棉藍(lán)染色,×1 000)

2.3DNA測(cè)序 經(jīng)北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)該菌株進(jìn)行rRNA基因ITS擴(kuò)增并測(cè)序,測(cè)序結(jié)果在GenBank核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)中作BLAST比對(duì),與基因庫(kù)中編號(hào)FJ752603.1的淡紫擬青霉株的同源性為99%,與其他多株淡紫擬青霉的同源性也為99%,證實(shí)該菌株為淡紫擬青霉。

2.4體外藥敏試驗(yàn) 用瑞典倍肯公司AB Biodisc生產(chǎn)的E-test試劑條對(duì)該菌株進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)。取5 d培養(yǎng)物,用0.1%吐溫-20的生理鹽水1 mL洗脫培養(yǎng)物,制成0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝痪鷳乙海坎加诤?.5% RPMI 1640瓊脂平板,干燥15 min后放試劑條,27 ℃培養(yǎng)48 h判讀最低抑菌濃度(MIC)結(jié)果:伊曲康唑MIC為32 μg/mL、伏立康唑0.19 μg/mL、兩性霉素B 0.75 μg/mL、氟胞嘧啶32 μg/mL、氟康唑256 μg/mL。

3 討論

淡紫擬青霉屬半知菌綱、絲孢菌目、絲孢菌科、擬青霉屬[1-2]。淡紫擬青霉對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求條件不高,可在多種培養(yǎng)基中生長(zhǎng),最適宜的培養(yǎng)基為PDA、SDA,培養(yǎng)時(shí)間以10 d左右為宜,溫度和pH是影響淡紫擬青霉生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素。文獻(xiàn)報(bào)道,淡紫擬青霉生長(zhǎng)溫度范圍很寬,從8 ℃到38 ℃都可以生長(zhǎng),在15~30 ℃生長(zhǎng)良好,最佳生長(zhǎng)和產(chǎn)孢溫度為25~30 ℃,6 ℃和40 ℃時(shí)停止生長(zhǎng),35 ℃時(shí)停止產(chǎn)孢;pH在2~12均能生長(zhǎng),產(chǎn)孢最佳pH為4~6[3]。

淡紫擬青霉引起的感染包括角膜炎、皮下及皮下組織感染、瓣膜修復(fù)導(dǎo)致心內(nèi)膜炎、鼻竇炎、甲真菌病、AIDS患者感染[4-8]。淡紫擬青霉眼睛感染表現(xiàn)為角膜炎、內(nèi)眼炎、角膜潰瘍和眶肉芽腫等,誘發(fā)因素包括外傷史、眼部手術(shù)后及使用過(guò)期的隱形眼鏡和在臨床表現(xiàn)出角膜炎之前使用皮質(zhì)類(lèi)固醇[4]。本例患者自述無(wú)外傷史,可能與在農(nóng)田作業(yè)時(shí)由淡紫擬青霉污染的衣物來(lái)擦拭右眼而引發(fā)角膜潰瘍有關(guān),其臨床表現(xiàn)起病緩慢,亞急性經(jīng)過(guò),刺激癥狀較輕,伴視力障礙。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,兩性霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑?qū)Φ蠑M青霉的體外抗菌活性較低[9-11],而伏立康唑具有較高的抗菌活性[4,12-13]。本例真菌體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)相符。該患者未確診淡紫擬青霉菌感染及無(wú)藥敏試驗(yàn)結(jié)果時(shí),臨床先采用眼內(nèi)通透性較好、刺激性小和抗真菌譜廣的氟康唑滴眼液滴右眼,藥敏結(jié)果提示該藥耐藥即停藥。選擇敏感有效的抗真菌藥物早期治療對(duì)患者的預(yù)后至關(guān)重要。因此,實(shí)驗(yàn)室的分離培養(yǎng),準(zhǔn)確鑒定及體外藥敏試驗(yàn)對(duì)臨床的治療具有重要的指導(dǎo)意義。

致謝:感謝北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室的老師對(duì)淡紫擬青霉菌株分子生物學(xué)鑒定給予幫助!

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2017-08-04)

(本文編輯:劉群)

10.13602/j.cnki.jcls.2017.10.19

王露霞,1960年生,女,副主任技師,大學(xué)本科,主要從事臨床微生物檢驗(yàn)工作。

R446.5

B

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