王曉婷，王亞恒，王芳，王昌利，王小平，白吉慶*

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046；2.陜西省中藥原料質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)服務(wù)中心，陜西 咸陽 712046)

漢中不同規(guī)格延胡索質(zhì)量評價△

王曉婷1，2，王亞恒1，王芳1，王昌利1，2，王小平1，白吉慶1，2*

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712046；2.陜西省中藥原料質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)服務(wù)中心，陜西 咸陽 712046)

目的考察不同種植年限延胡索、一年生大、小規(guī)格的延胡索其質(zhì)量差異。方法采用高效液相色譜法HPLC，迪馬C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH 至6.0)=67∶33，流速為1.0 mL·min-1，柱溫：30 ℃；檢測波長：280 nm，測定每份樣品中延胡索乙素含量并進行比較分析。結(jié)果不同年限延胡索的含量比較，以一年生小子折干率為最高、延胡索乙素含量最高為1.776 9 mg·g-1，而母子折干率為是最低、延胡索乙素含量亦最低為1.537 4 mg·g-1。結(jié)論不同生長年限和一年生大小不同延胡索藥材規(guī)格其質(zhì)量具有差異。

延胡索；延胡索乙素；高效液相色譜法；含量測定

延胡索又名元胡、玄胡、玄胡索，為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥塊莖[1]，是常用中藥材之一。其含有多種生物堿，具有活血化瘀、理氣止痛的功能，對于治療脘腹疼痛、胸痹心痛、跌打損傷、經(jīng)閉痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻、血瘀痛經(jīng)有奇效[2]。延胡索中生物堿主要有延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素、原阿片堿、四氫紫堇薩明等[3-5]，大多以生物堿鹽結(jié)合態(tài)形式存在[6]。據(jù)記載，延胡索已具有長久的栽培歷史[7]。陜西省漢中市屬于溫暖濕潤的亞熱帶氣候，冬無嚴寒，特別適合在冬春季種植生長期較短的元胡[7]。漢中部分丘陵地區(qū)具有種植延胡索的傳統(tǒng)[8-9]。延胡索地下塊莖由上年母塊莖的更新芽形成，在新塊莖成長過程中母塊莖逐漸于癟，由此形成的新塊莖個大，皮色老。由地下莖蘆膨大而長成的新塊莖則個較小，皮色新，俗稱子元胡。延胡索產(chǎn)新獲得新鮮藥材后漢中城固縣藥農(nóng)通常將其分為，母子(第一年作為繁殖塊莖，兩年生，俗稱母元胡)、中子(優(yōu)選為下一年種子)、小子(加工成藥材使用)三種規(guī)格，其均經(jīng)殺青、干燥后作為藥材使用，這樣延胡索藥材存在多產(chǎn)地鮮品規(guī)格和不同加工方法獲得產(chǎn)品，其質(zhì)量差異性也較大，因此本文結(jié)合研究確定以煮后、烘干的延胡索為研究對象對其質(zhì)量進行評價，為建立延胡索藥材商品規(guī)格等級提供實驗依據(jù)。

根據(jù)現(xiàn)行的商品規(guī)格標準劃分為為一等和二等兩種規(guī)格，對于延胡索藥材采收沒有具體詳細的規(guī)定，對其塊莖有不同生長年份的，本文對于延胡索藥材在不同生長年限(主要為一年生和兩年生)用HPLC法測定其延胡索乙素含量來認識延胡索藥材。本實驗采用高效液相法對漢中產(chǎn)延胡索中止痛活性成分延胡索乙素進行含量測定，以此考察不同種植年限的延胡索乙素含量的影響，為藥材生產(chǎn)的改進、篩選和制定藥材及飲片的質(zhì)量標準等提供科學(xué)依據(jù)，并明確各中藥材采收年限，合理引導(dǎo)中藥材生產(chǎn)，保證藥材質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京科偉永興儀器設(shè)備有限公司)，賽多利斯XSE105DU單量程電子分析天平(賽多利斯股份有限公司)，戴安Uiti Mate 3000全自動高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器)。

1.2 試藥

延胡索采自陜西漢中，藥材經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)白吉慶副教授鑒定為罌粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang ex Z.Y.Su et C.Y.Wu的塊莖。延胡索采收時間于2016年5月下旬，從新鮮的延胡索中挑出中間有肚臍的(根痕跡)扁平的延胡索，即兩年生元胡索(母子)，其余去除雜質(zhì)、過篩，分成大、小二檔。延胡索的規(guī)格分類：兩年生塊莖(母子)、當年生塊莖大子、小子。分別裝入籮筐內(nèi)擦去外表皮。按照延胡索產(chǎn)地加工，洗凈泥土，漂去老皮和雜質(zhì)，晾干表面水分，按照延胡索：水=1∶4水煮，煮至藥材內(nèi)無白心，取出，控干水分60 ℃烘干得到三種規(guī)格的樣品。

延胡索乙素對照品(批號110728-201617，中國食品藥品檢定研究院)；甲醇為色譜純；濃氨為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)pH 至6.0)=67∶33；流速為1.0 mL·min-1；柱溫30 ℃；檢測波長280 nm。理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取延胡索乙素對照品1.22 mg加甲醇制成0.048 7 mg·mL-1的溶液。

2.3 供試品溶液的制備[1]

取本品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置平底燒瓶中，精密加入濃氨試液一甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，稱定重量，冷浸1 h后加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用濃氨試液甲醇(1∶20)混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取濃度為0.048 7 mg·mL-1的對照品溶液1、2、4、6、8、10 μL，按2.1項色譜條件進樣，測定峰面積。以延胡索乙素的質(zhì)量為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)繪制標準曲線，回歸方程為Y=10.989X-0.040 1，r=0.999 9，延胡索乙素在0.048 7～0.487 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度

精密吸取濃度為0.048 7 mg·mL-1的對照品溶液6 μL，按2.1項色譜條件連續(xù)進樣6次，測得延胡索乙素峰面積RSD=1.53%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性

取2.3項制備的同一規(guī)格供試品溶液，按2.1項色譜條件，于0、2、4、6、8、10 h分別進樣1 μL，測得延胡索乙素峰面積RSD=2.97%，表明供試品中延胡索乙素在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性

取延胡索樣品6份，每份約0.5 g，按2.3項方法制備供試品溶液，測定峰面積，結(jié)果含量分別為1.388 3、1.364 3、1.3726、1.3967、1.4279、1.372 8 mg·g-1，平均含量1.387 1 mg·g-1，RSD=1.67%，表明樣品測定符合技術(shù)要求，重復(fù)性良好。

2.8 回收率

取已知含量的樣品(延胡索)6份，每份約0.25 g，置入具塞錐形瓶，分別精密加入延胡索乙素對照品溶液(0.174 45 mg·mL-1)2 mL，按2.3項制得供試品溶液，按2.1項色譜條件測定延胡索乙素含量，計算加樣回收率，延胡索乙素平均回收率99.23%，RSD=1.74%，表明加樣回收率符合要求。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗測定結(jié)果

2.9 樣品測定

按上述條件測定不同采收期的延胡索藥材中延胡索乙素的含量，分別取延胡索藥材約0.5 g，精密稱定，按2.3項方法操作，制備供試品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過后，按2.1項色譜條件進樣，記錄峰面積，計算各規(guī)格樣品中延胡索乙素含量，并比較不同采收期的延胡索藥材的折干率結(jié)果見表1和表2。色譜圖見圖1。

表2 不同規(guī)格延胡索中延胡索乙素的含量

圖1 標準品和延胡索樣品的HPLC圖

綜合結(jié)果表明延胡索子(小)與延胡索子(大)、延胡索(母子)含量之間分別具有明顯的顯著性差異，延胡索子(小)在相同條件下含量最大。

2.10延胡索藥材

2.10.1 根據(jù)延胡索形狀大小，將新鮮的藥材分為兩年生塊莖(母子)、當年生大、小三類，隨機在三類抽取20個藥材，精密量取其長、寬，求得平均值為理論直徑。

表3 不同延胡索中延胡索的長寬高(n=20)

統(tǒng)計分析表明延胡索母子、延胡索大、延胡索小三者的理論直徑相互具有之間均具有顯著性差異(P<0.05)。

2.10.2 折干率[10]

兩年、大、小三種規(guī)格干品質(zhì)量/鮮質(zhì)量×100=折干率，結(jié)果見表4。

表4 不同延胡索的折干率對比

3 討論

3.1延胡索乙素是延胡索的主要活性成分之一，也作為藥典質(zhì)量控制指標成分，本實驗采用HPLC法測定延胡索乙素的含量，對考查不同規(guī)格延胡索質(zhì)量具有重要參考價值。

3.2本實驗測定漢中不同年限的延胡索，延胡索乙素含量均符合國家規(guī)定的不低于0.040%的標準，測量結(jié)果表明三種規(guī)格延胡索在相同加工條件下，延胡索一年生小子的延胡索乙素含量最高，母子則最低，證明了3種延胡索的延胡索乙素含量存在差異，說明不同生長年限對延胡索乙素含量有重要影響。

3.3通過水煮后在60℃烘干下獲得樣品，其規(guī)格折干率依次為延胡索(小)>延胡索(大)>延胡索(母子)，其表明小子含水分較少，母子含水分較多。

3.4本實驗對漢中不同的延胡索進行初步的外觀大小的數(shù)據(jù)測量，表明母子直徑大小為18.71～15.33 mm，大子為15.66～13.86mm，小子為11.14～9.98mm。

不同生長年限和一年生大小不同延胡索藥材規(guī)格及其質(zhì)量具有差異。建議在延胡索產(chǎn)地加工時對鮮藥材應(yīng)進行挑選分類后進行加工，形成不同規(guī)格延胡索藥材商品規(guī)格等級類型。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：139-140.

[2] 李玉山.延胡索乙素的制備工藝及藥理作用研究發(fā)展[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報，2013，29(5)：480-483.

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QualityEvaluationofCorydalisTuberinDifferentSpecificationsinHanzhong

WANGXiaoting1，2，WANGYaheng1，WANGFang1，WANGChangli1，2，WANGXiaoping1，BAIJiqing1，2*

(1.ShaanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Xianyang712046，China；2.ShaanxiProvinceTraditionalChineseMedicineRawMaterialQualityMonitoringTechnologyServiceCenter，Xianyang712046，China)

Objective：To investigate the quality difference of Corydalis tuber planting years and its annual large and small size of corydalis.MethodsTetrahydropalmatine in each sample was determined by HPLC with Dima C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm)，mobile phase of methanol -0.1% phosphoric acid solution(triethylamine adjusted to pH 6)=67∶33，the flow rate of 1 mL·min-1，column temperature of 30 ℃ and detection wavelength of 280 nm.ResultsComparison of the content of Corydalis tuber in different years，the drying rate was the highest in the annual small tubers and tetrahydropalmatine content reached to 1.776 9 mg·g-1，while the drying rate was the lowest for biennial tubers，and tetrahydropalmatine was 1.537 4 mg·g-1.ConclusionThere are differences in the quality of different Corydalis tuber with different growth years and annual sizes.

Corydalis Rhizoma；tetrahydropalmatine；HPLC；determination of content

2015年中醫(yī)藥部門公共衛(wèi)生服務(wù)補助資金項目(國中醫(yī)藥發(fā)規(guī)財﹝2015﹞21號)

*

白吉慶，副教授，研究方向：中藥資源開發(fā)與利用；Tel：(029)38184367，E-mail：baijiqing323@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.11.017

2017-06-09)