胡 幸 鄧星輝 周勁媛

1.廣東省江門市五邑中醫(yī)院病理科，廣東江門 529000；2.廣東省江門市中心醫(yī)院病理科，廣東江門 529030

ZHX2蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床病理意義

胡 幸1鄧星輝2周勁媛1

1.廣東省江門市五邑中醫(yī)院病理科，廣東江門 529000；2.廣東省江門市中心醫(yī)院病理科，廣東江門 529030

目的檢測ZHX2蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)情況，分析其臨床病理意義。方法收集從2013年1月～2016年12月在江門市五邑中醫(yī)院手術(shù)的結(jié)直腸癌標(biāo)本67例，用免疫組化法對癌組織及癌旁組織進(jìn)行ZHX2蛋白檢測，聯(lián)系臨床病理參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果與癌旁組織比較，結(jié)直腸癌的ZHX2蛋白陽性率顯著降低（95.5% vs80.5%，P＜0.05）。ZHX2陽性率在直腸癌中為90.6%，在結(jié)腸癌中為71.4%（P＜0.05）；在高、中、低分化癌中依次為81.2%、84.2%、69.2%（P＜0.05）。在隨訪周期內(nèi)，ZHX2陽性病例比陰性病例的平均生存期顯著延長[（45.1±8.8）月vs（27.3±6.7）月，P＜0.05]。結(jié)論ZHX2可能具有抑制結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及分化的作用，檢測其表達(dá)情況對患者預(yù)后具有一定的參考價值。

結(jié)直腸癌；ZHX2；病理；免疫組織化學(xué)

R735.3

A

2095-0616（2018）01-207-04

Expression of ZHX2 protein in colorectal cancer and its clinicopathological significance

HU Xing1DENG Xinghui2ZHOU Jinyuan1
1.Department of Pathology,Jiangmen Wuyi Hospital of Traditional Chinese Medicine,Guangdong,Jiangmen 529000,China;2.Department of Pathology,Jiangmen Central Hospital,Guangdong,Jiangmen 529000,China

ObjectiveTo detect the expression of ZHX2 protein in colorectal cancer and to analyze its clinicopathological significance.MethodsA total of 67 colorectal cancer specimens from Jiangmen Wuyi Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2013 to December 2016 were collected.Immunohistochemical staining was used to detect ZHX2 protein in cancer tissues and adjacent tissues.Statistical analysis was performed with clinicopathological parameters.ResultsCompared with the para cancerous tissue,the positive rate of ZHX2 protein in colorectal cancer was significantly lower (95.5% vs 80.5%,P＜0.05).The positive rate of ZHX2 was 90.6% in rectal cancer,71.4% in colon cancer,andP＜0.05.81.2%,84.2%,69.2%,respectively,were in high,medium and low differentiated cancers (P＜0.05).During the follow-up period,the average survival time of ZHX2 positive cases was significantly longer than that of negative cases [（45.1±8.8） months vs（27.3±6.7）months,P＜ 0.05].ConclusionZHX2 may have the function of inhibiting the occurrence,development and differentiation of colorectal cancer,and detection of its expression may have certain reference value for the prognosis of patients.

Colorectal cancer;ZHX2;Pathology;Immunohistochemistry

鋅指和同源框2（ZHX2）是新克隆的非特異性轉(zhuǎn)錄抑制因子，ZHX2通過與基因啟動子區(qū)相應(yīng)DNA序列結(jié)合，發(fā)揮其對基因轉(zhuǎn)錄的抑制作用。近年來，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機制中，ZHX2越來越受到關(guān)注，多項研究表明其表達(dá)水平與多種疾病及癌癥密切相關(guān)[1]，但關(guān)于ZHX2的表達(dá)與結(jié)直腸癌之間是否存在著某種聯(lián)系及相關(guān)性的研究，仍處于探索階段。故本文將應(yīng)用免疫組化法對結(jié)直腸癌組織中ZHX2蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測分析，探究ZHX2與結(jié)直腸癌的相關(guān)性，意在為臨床診斷提供參考并為結(jié)直腸癌的預(yù)后提供一定的治療線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取于我科2013年1月～2016年12月間行結(jié)直腸癌手術(shù)、具備完整臨床和隨訪資料、且通過病理確診的67例結(jié)直腸癌石蠟標(biāo)本，其中男37例，女30例；年齡27～81歲，平均（56.6±10.3）歲。其中結(jié)腸癌35例，直腸癌32例。組織學(xué)分型：腺癌56例，黏液腺癌7例，鱗癌4例。組織學(xué)分級：高分化16例，中分化38例，低分化13例。腫瘤直徑：≥5cm 18例，＜5cm 49例。浸潤深度：浸及漿膜31例，未浸及漿膜36例。

1.2 方法

采用免疫組化SuperVision法檢測結(jié)直腸癌變組織及癌旁正常黏膜組織。步驟如下：（1）對所有的石蠟標(biāo)本進(jìn)行切片，每片厚度均為4μm；（2）將烤片溫度設(shè)置為58～60℃，對標(biāo)本薄片進(jìn)行烤片處理6h；（3）對已完成烤片的標(biāo)本薄片進(jìn)行常規(guī)脫蠟及水化（應(yīng)用二甲苯脫蠟，乙醇水化）；（4）在EDTA抗原修復(fù)液中對已處理過的烤片進(jìn)行高壓修復(fù)，蒸汽上升后繼續(xù)放置2 min[2]；（5）用3%的過氧化氫將內(nèi)源性過氧化物酶以及稀釋500倍的ZHX2抗體進(jìn)行滅活處理；（6）放置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，時長1h，二抗置于室溫下培養(yǎng)20min；（7）使用DAB對標(biāo)本薄片進(jìn)行顯色處理并沖洗干凈；（8）利用蘇木精對標(biāo)本薄片復(fù)染至常規(guī)透明程度后封固，封固劑使用中性樹脂?？瞻兹芤翰捎肞BS緩沖液。

1.3 評判標(biāo)準(zhǔn)

每張切片隨機取5個視野（×400高倍鏡），采用半定量積分法切片進(jìn)行分級計分，主要依據(jù)細(xì)胞陽性百分率和陽性細(xì)胞的染色強度兩項之和進(jìn)行判定[3]。評分細(xì)則：細(xì)胞陽性百分率：＞50%為3分，26%～50%為2分，6%～25%為1分，≤5%為0分；細(xì)胞染色強度：黃褐色（強）為3分，棕黃色（中）為2分，淺黃色（弱）為1分，無染色0分。性質(zhì)判斷為以上兩項相加之和：陰性0分，1≤弱陽性≤2，3≤中等陽性≤4，5≤強陽性≤6。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0版對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中的ZHX2蛋白表達(dá)

ZHX2蛋白，位于細(xì)胞核，顏色為棕黃色，主要表達(dá)于結(jié)直腸癌組織中癌細(xì)胞，同時在基質(zhì)中也有所表達(dá)；而在癌周正常黏膜組織中，則主要在腺上皮細(xì)胞中表達(dá)（見圖A-E）。ZHX2在結(jié)直腸癌組織中的陽性率為80.5%（54/67），ZHX2在癌旁正常黏膜組織中的陽性率為95.5%（64/67），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.255，P＜0.05）。見表1。

2.2 腫瘤部位和分化程度與ZHX2表達(dá)的關(guān)系

在35例結(jié)腸癌中，ZHX2陽性率為71.4%（25/35），在32例直腸癌中，ZHX2陽性率為90.6%（29/32），不同部位的ZHX2陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。在不同組織學(xué)分級的患者中，高分化、中分化、低分化的ZHX2陽性率分別為：81.2%（13/16）、84.2%（32/38）、69.2%（9/13），不同組織學(xué)分級的ZHX2陽性率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 不同組織中的ZHX2蛋白表達(dá)情況比較

圖A、B、C:ZHX2在癌組織中高表達(dá)，A：HE×100，B：低倍×100，C：高倍×200圖D、E、F:ZHX2在癌組織中低表達(dá)，A：HE×100，B：低倍×100，C：高倍×200

2.3 腫瘤大小、浸潤深度與ZHX2表達(dá)的關(guān)系

腫瘤直徑≥5cm 18例患者中，ZHX2陽性率為83.3%（15/18）；＜5cm 49例患者中，ZHX2陽性率為79.6%（39/49）。浸及漿膜31例患者中，ZHX2陽性率為83.9%（26/31）；未浸及漿膜36例患者中，ZHX2陽性率為77.8%（28/36）。腫瘤大小、浸潤深度與ZHX2表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表2 結(jié)直腸癌組織中ZHX2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.4 ZHX2陽性組和ZHX2陰性組的生存率和生存期比較

67例病例獲得時間1～48個月，平均（38.8±10.3）隨訪，存活45例，死亡22例，生存期為1～48個月，平均生存期為（37.6±9.7）個月。ZHX2陽性組的生存率和生存期均優(yōu)于ZHX2陰性組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0. 05）。見表3。

表3 ZHX2陽性組和ZHX2陰性組的生存率和生存期比較

3 討論

ZHX2所在的ZHX家族屬于同源盒蛋白超家族中的鋅指類，其包括ZHXl、ZHX2和ZHX3，且均含有2個Cys2-His2型鋅指模序和4～5個同源結(jié)構(gòu)域（HD）。人ZHX2基因位于染色體8q24.13，cDNA序列全長4500 bp，共編碼837個氨基酸，包括2個鋅指結(jié)構(gòu)域、5個HD和408～448位富含脯氨酸殘基結(jié)構(gòu)域。ZHX2蛋白既可以自身結(jié)合形成同源二聚體，也可與ZHX1或ZHX3蛋白結(jié)合形成異源二聚體，其二聚體化結(jié)合位點位于HD1[4]。通過對氨基酸序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在包含了HD1區(qū)和脯氨酸富含區(qū)的263～446位氨基酸，ZHX2發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄抑制作用，而該區(qū)域為其發(fā)揮抑制作用的最小功能區(qū)域。多項研究結(jié)果顯示，具有轉(zhuǎn)錄抑制作用的ZHX2對多種疾病的發(fā)生、發(fā)展演變過程中均有影響。其在心血管系統(tǒng)疾病[5]、神經(jīng)系統(tǒng)疾病[6]、腎臟疾病[7]、消化系統(tǒng)疾病[8]、肝臟[9]疾病及在造血系統(tǒng)疾病[10]等均對ZXH2的表達(dá)作用有記錄。

因腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中存在多個階段并且每個階段都有多種因素的參與及調(diào)控，并且十分復(fù)雜，所以腫瘤的病因及發(fā)病機制的研究尚未十分透徹及明朗，還存在很多不可知的因素。Hoffman等[11]研究發(fā)現(xiàn)，野生型p53可以抑制與結(jié)直腸癌預(yù)后有關(guān)的survivin[12]基因的表達(dá)，而Morachis等[13]研究證實ZHX2可以通過NF-YA調(diào)節(jié)其下游基因p53的表達(dá)。但目前仍未見結(jié)直腸癌組織中ZHX2的表達(dá)與p53、survivin是否存在相關(guān)性。由此可見，ZHX2有望成為判斷結(jié)直腸癌惡性程度和預(yù)后的新型分子生物學(xué)標(biāo)志物。

本研究中主要采用了免疫組化SuperVision法，通過對ZHX2蛋白在結(jié)直腸癌變組織及癌旁正常黏膜組織中表達(dá)情況的檢測分析，得知ZHX2蛋白在癌旁組織中表達(dá)率較高，在癌組織中的表達(dá)率則稍低，表明ZHX2蛋白的表達(dá)情況對結(jié)直腸癌的發(fā)生具有一定的影響程度。此外，研究結(jié)果還表明，癌變組織的發(fā)生部位和分化程度，直接對ZHX2蛋白的表達(dá)程度有影響。相比直腸癌，結(jié)腸癌中ZHX2蛋白的陽性表達(dá)率更低，而直腸是大腸癌的好發(fā)部位，且ZHX2蛋白表達(dá)程度越高，該部位就越容易發(fā)生癌變，出現(xiàn)該現(xiàn)象的原因可能是由于腫瘤不同的發(fā)生部位，起主要調(diào)控作用的基因也不一樣。因此，本研究結(jié)果可以為結(jié)直腸癌的發(fā)生部位的研究提供一定的線索。

本研究結(jié)果提示，腫瘤大小、浸潤深度與ZHX2表達(dá)均無顯著相關(guān)（P＞0.05）。依據(jù)隨訪資料，本次研究分析了各組患者的生存狀況，發(fā)現(xiàn)ZHX2陽性組患者的生存率高于ZHX2陰性組，且生存期更長，此差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。綜合研究結(jié)果跟臨床病理資料得知，ZHX2陽性組患者多為高、中度分化者，因此ZHX2可能會作為一項結(jié)直腸癌預(yù)后情況判斷的新指標(biāo)。

ZHX2作為新型轉(zhuǎn)錄抑制因子，其自身表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)已被多項研究證實，在多種疾病及腫瘤中ZXH2均有表達(dá)，且參與多種病理生理過程并與相關(guān)基因相互作用，對疾病的進(jìn)展有影響。在肝細(xì)胞癌[14]，和多發(fā)性骨髓瘤[15]的發(fā)生中的作用已被證實，但是在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中的相關(guān)及聯(lián)系未得到確切的證實，實驗探究還有待繼續(xù)，本研究可知ZHX2的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生部位及分化程度有關(guān)聯(lián)，這為腫瘤的早期診斷、臨床治療和預(yù)后判斷提供了一定的線索。

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2017-09-20）