徐凱+戚蘭君+張群

【摘要】目的：建立測定治傷膠囊生產(chǎn)設(shè)備表面關(guān)附甲素的清潔殘留的方法。方法：色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C8柱（4.6mm*250mm，3.5μm），流動相：0.2%庚烷磺酸鈉緩沖液（加入0.2%三乙胺，磷酸調(diào)節(jié)至pH3）-乙腈（梯度洗脫），流速：0.5ml/min；檢測波長：205nm；柱溫25℃。結(jié)果：鹽酸關(guān)附甲素質(zhì)量濃度在0.02mg/ml-0.16mg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999），其平均加樣回收率（n=9）為101.4%。結(jié)論：本方法分離度和重復(fù)性良好，簡單易行，可用于治傷膠囊設(shè)備表面關(guān)附甲素清潔殘留的檢測。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；關(guān)白附；鹽酸關(guān)附甲素；擦拭法；清潔殘留

【中圖分類號】R746.5 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）12--01

清潔驗證是為了確定在中藥生產(chǎn)過程中，設(shè)備、容器清洗后相關(guān)操作規(guī)程的可行性和有效性，清潔驗證檢測方法是衡量其清潔操作后是否符合規(guī)定的重要手段，公司主要產(chǎn)品治傷膠囊為復(fù)方制劑，處方有關(guān)白附、白芷、制南星和防風(fēng)組成，其中關(guān)白附為生品毒性藥材，從中藥使用安全性考慮，選擇關(guān)白附作為目標(biāo)殘留物，基于關(guān)附甲素最大日允許攜帶量為1.727mg/Kg，與關(guān)白附共用設(shè)備的與藥品接觸的總的表面積，，結(jié)合批量，以單位面積設(shè)備表面關(guān)附甲素殘留限度為0.139 mg/100cm2。

1 材料與儀器

高效液相色譜儀、電子天平、酸度計、庚烷磺酸鈉、鹽酸關(guān)附甲素對照品、治傷膠囊等。

2 檢驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：

色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C8柱（4.6mm*250mm，3.5μm） 流動相B：乙腈。

流動相A：0.2%庚烷磺酸鈉緩沖液（加入0.2%三乙胺，磷酸調(diào)節(jié)至pH3）

流速：0.5ml/min；檢測波長：205nm；柱溫25℃；進樣量10μl。

2.2 對照品溶液的制備：

精密稱取鹽酸關(guān)附甲素對照品，用流動相A溶解并稀釋，制成80?g/ml的溶液。

2.3 供試品溶液的制備：

取治傷膠囊內(nèi)容物約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入1%鹽酸溶液50ml，稱重，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘（水溫50℃以下），放冷，加入1%鹽酸溶液補足失重，搖勻，移取上清液，過0.45μm微孔濾膜。

2.4 供試品擦拭樣制備：

取治傷膠囊粉末約0.1g均勻涂布在面積約為100 cm2的不銹鋼板上，待涂勻后，用干凈的棉球（用純化水浸潤）將不銹鋼板擦拭干凈，然后將棉球浸在10ml1%鹽酸溶液中，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）30分鐘（水溫50℃以下），放冷，搖勻，取上清液，過0.45μm微孔濾膜，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性

按2.1項下的色譜條件，取2.3項下供試品溶液，測得理論板數(shù)按鹽酸關(guān)附甲素峰計不低于10000，與其相鄰色譜峰分離度大于1.5。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 線性關(guān)系考察。

精密量取鹽酸關(guān)附甲素對照品儲備液（0.8mg/ml）0.3、0.5、0.7、1.0、1.2、1.5、2.0ml分別至10ml容量瓶中用流動相A稀釋至刻度，制成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，進樣，記錄圖譜。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（C）為橫坐標(biāo)進行回歸計算，得回歸方程A=11367C+28.96（r=0.9999）。其質(zhì)量濃度范圍為：0.0199mg/ml-1.591mg/ml。

2.6.2 重復(fù)性試驗。精密稱取同一批治傷膠囊內(nèi)容物，按2.3處理，制成6份供試品溶液，進樣，記錄色譜圖。測得結(jié)果6份樣品的鹽酸關(guān)附甲素含量的RSD（n=6）為3%。表明該方法的重復(fù)性良好。

2.6.3 回收率試驗。取3個10ml量瓶，加入濃度約為0.4mg/ml鹽酸關(guān)附甲素溶液0.5ml及治傷膠囊內(nèi)容物85mg；取3個10ml量瓶，加入濃度約為0.4mg/ml鹽酸關(guān)附甲素溶液1.0ml及治傷膠囊內(nèi)容物171mg；取3個10ml量瓶，加入濃度約為0.4mg/ml鹽酸關(guān)附甲素溶液1.5ml及治傷膠囊內(nèi)容260mg。9個樣均按2.3處理，進樣，記錄色譜圖。結(jié)果50%的回收率為101.2%，100%的回收率為102.3%，150%的回收率為100.8%平均加樣回收率為101.4%，RSD（n=9）為0.9%。

2.6.4 擦拭回收率。50%濃度（約0.04mg/ml）：取治傷膠囊內(nèi)容物約195mg，按2.4方法制備三份；100%濃度（約0.08mg/ml）：取治傷膠囊內(nèi)容物約390mg，同法制備；150%濃度（約0.12mg/ml）：取治傷膠囊內(nèi)容物約585mg，同法制備。結(jié)果測得：50%的質(zhì)量濃度，擦拭回收率為86.9%；100%的擦拭回收率為86.8%；150%的擦拭回收率為86.9%。RSD（n=9）為3%。該擦拭方法可將殘留在設(shè)備表面的大部分藥粉擦拭下來。

2.6.5 生產(chǎn)車間設(shè)備清潔后，擦拭取樣，按2.4制備供試品溶液。結(jié)果未檢出鹽酸關(guān)附甲素的殘留。

3 討論

該方法為中藥治傷膠囊中毒性藥材的殘留提供了可靠的方法，此方法的建立，解決了公司中藥產(chǎn)品清潔殘留的問題。關(guān)白附、治傷膠囊含量測定一直采用傳統(tǒng)的滴定方法，而且以生物堿關(guān)附甲素計算含量，缺少毒性藥材中毒性物質(zhì)的定量檢測，據(jù)文獻[1]記載，關(guān)白附中毒性成分主要有關(guān)附甲素、關(guān)附壬素和關(guān)附辛素，其中關(guān)附辛素的毒性最高，能抑制骨骼肌系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，而且含量較高，如何采用有效的方法來定量控制關(guān)白附中所含的毒性物質(zhì)，需要我們采用靈敏度更高、方法簡單易行的高效液相來解決，這也勢必是日后中藥材鑒別和有效成分含量測定的趨勢。

本文所建立的方法分離度和重復(fù)性良好，簡單易行，可用于治傷膠囊設(shè)備表面關(guān)附甲素清潔殘留的檢測，同時該方法也可用于測定治傷膠囊或關(guān)白附的含量。

參考文獻

RP-HPLC法同時測定中藥關(guān)白附中關(guān)附甲素、關(guān)附壬素和關(guān)附辛素含量；藥學(xué)進展；2011，35（5）：230-233。endprint