高若兮

摘要 以高中生物的微生物培養(yǎng)為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究綠茶的抑茵作用。采用濾紙片法檢測(cè)兩種常見的抗菌藥物阿莫西林、青霉素V鉀片對(duì)腸道菌群大腸桿菌的抑菌作用，并觀察綠茶浸出液聯(lián)合常見抗菌藥物對(duì)大腸桿菌的抗菌作用。結(jié)果表明廣譜青霉素對(duì)大腸桿菌的抑菌作用比窄譜青霉素強(qiáng)得多，綠茶對(duì)兩種藥物的抑茵作用均無顯著影響

關(guān)鍵詞 微生物培養(yǎng) 綠茶 阿莫西林 青霉素V鉀片 抑菌作用

中圖分類號(hào) Q-331 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 B

在生活中經(jīng)常聽到“茶水不能送服藥物”的說法，然而在藥物說明書的注意事項(xiàng)中只提及用藥前詳細(xì)詢問藥物過敏史并作青霉素皮膚試驗(yàn)、有哮喘和腎功能嚴(yán)重?fù)p害者慎用等，并未對(duì)口服藥的送服水作出規(guī)定，而同時(shí)，現(xiàn)代科學(xué)研究表明茶葉中的茶多酚具有廣譜抑菌作用，對(duì)細(xì)菌有較強(qiáng)的抑菌活性。20世紀(jì)90年代，日本學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)：頭孢唑啉、亞胺培南、氨芐西林、頭孢替安、頭孢美唑、頭孢唑肟和拉氧頭孢等抗生素和綠茶浸出液合用，能顯著增強(qiáng)對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的抗菌作用。我國(guó)研究者也通過實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：各種茶葉對(duì)MRSA均有一定的抗菌作用，其中綠茶和白茶的抗菌作用最強(qiáng)。因此，本探究實(shí)驗(yàn)基于高中基本實(shí)驗(yàn)操作要求以綠茶、阿莫西林與青霉素v鉀片為實(shí)驗(yàn)材料，大腸桿菌為供試菌，初步探究綠茶浸出液對(duì)兩種生活中常見抗菌藥物抑菌作用的影響，并對(duì)“茶水不能送服藥物”這一常識(shí)作出甄別、判斷。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)儀器及材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料

江蘇宜興毛尖：大腸桿菌；阿莫西林膠囊（廣譜青霉素類，殺菌作用較強(qiáng)）、青霉V鉀片片劑（窄譜青霉素類）；LB固體培養(yǎng)基（胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化鈉10g，瓊脂15g，1000mL蒸餾水）。

1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器

培養(yǎng)皿、高壓蒸汽滅菌鍋、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、燒杯、玻璃棒、錐形瓶、濾紙、電子天平、刻度尺、涂布棒、移液槍、酒精燈、超凈工作臺(tái)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法及步驟

（1）綠茶浸出液的制備：在超凈工作臺(tái)中稱取0.5g毛尖，浸泡于10mL煮沸蒸餾水中并在超凈工作臺(tái)中自然冷卻靜置1h，用孔徑0.22μm無菌濾器濾過除菌，得到5%綠茶浸出液，備用。

（2）抗菌藥物懸浮液的配置：將去除膠囊殼的阿莫西林和青霉素v鉀片分別研磨至粉末狀，各稱取0.5g；將0.5g粉末狀藥物分別溶解于10mL蒸餾水中，制備藥物濃度為0.05g/mL的懸浮液，標(biāo)號(hào)備用。

（3）菌懸液的制備：用接種環(huán)挑取3～4環(huán)在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h的大腸桿菌，置于250mL無菌生理鹽水中，在37℃下振蕩培養(yǎng)12h，備用。

（4）綠茶浸出液對(duì)抗菌藥物抑菌作用的測(cè)定：采用K-B法（Kirby-Bauertest），即濾紙片法。選用質(zhì)地均勻的濾紙，用打孔機(jī)打成直徑均為12mm的小圓片，滅菌后烘干；將大腸桿菌在LB培養(yǎng)基上涂布培養(yǎng)，設(shè)置4組，每組6個(gè)培養(yǎng)皿，每個(gè)培養(yǎng)皿中放置3個(gè)濾紙片，并相互間隔一定距離。濾紙片滴加阿莫西林懸浮液的記為A組，濾紙片滴加阿莫西林和綠茶懸浮液的記為B組，濾紙片滴加青霉素v鉀片的記為C組，濾紙片滴加青霉素v鉀片和綠茶懸浮液的記為D組。在37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24h后，用游標(biāo)卡尺測(cè)定抗菌藥物的抑菌圈。

1.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析；用LSD法對(duì)不同抗菌藥物及綠茶藥物混合物之間有無顯著性差異均采進(jìn)行多重比較。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1抗菌藥物對(duì)大腸桿菌的抑制作用

抑菌圈的直徑大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，抑菌圈直徑增大表明所用藥物對(duì)該測(cè)試菌的抑制效果增強(qiáng)。培養(yǎng)24h后，觀察A、C組的培養(yǎng)皿（圖1），可清楚觀察到大腸桿菌生長(zhǎng)良好，抑菌圈清晰，在含有阿莫西林的A組中，抑菌圈的平均直徑為26.0mm；含有青霉素v鉀片的c組中，抑菌圈平均直徑為16.4mm。阿莫西林和青霉素V鉀片對(duì)供試的大腸桿菌有較為明顯的抑制作用。比較抑菌圈直徑大小，阿莫西林對(duì)大腸桿菌的抑菌效果更為顯著。

2.2綠茶浸出液對(duì)抗菌藥物抑菌作用的影響

由表1可知，綠茶浸出液與抗菌藥物混用的抑菌圈略小于單用抗菌藥物形成的抑菌圈，說明綠茶浸出液對(duì)阿莫西林、青霉素V鉀片兩種抗菌藥物沒有增效作用。

2.3不同抗菌藥物及綠茶藥物混合物之間顯著性差異分析

對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS22.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性差異分析。

由表2可知，A組標(biāo)準(zhǔn)差為1.52，B組標(biāo)準(zhǔn)差為2.41，C組標(biāo)準(zhǔn)差為1.13，D組標(biāo)準(zhǔn)差為0.89，樣本數(shù)據(jù)的可靠性較高。

由表3可知，組間離差平方571.78，組內(nèi)離差平方和50.95，組間自由度為3，組內(nèi)自由度為20，組間均方與組內(nèi)均方比值F值對(duì)應(yīng)的概率值<0.01，各組問的平均值無顯著性差異。

根據(jù)方差齊次性檢驗(yàn)結(jié)果，顯著性概率p>0.05，說明各組方差在α=0.05水平上沒有顯著性差異，即方差具有齊次性。

因方差具有齊次性，運(yùn)用LSD方法進(jìn)行多重比較，結(jié)果見表4。并運(yùn)用Duncan法進(jìn)行多重比較，表格5列出在顯著水平0.05上的比較結(jié)果。

根據(jù)SPSS分析結(jié)果，滴加阿莫西林懸浮液的A組（即組別1）與滴加阿莫西林和綠茶懸浮液的B組（即組別2）間的顯著性為0.932，遠(yuǎn)大于0.05，不存在顯著性差異。滴加青霉素v鉀片的C組（即組別3）與滴加青霉素v鉀片和綠茶懸浮液的D組（即組別4）間顯著性為0.871，遠(yuǎn)大于0.05，不存在顯著性差異。綠茶浸出液對(duì)兩種抗菌藥物均無顯著影響。

2.4綠茶浸出液對(duì)抗菌藥物抑菌作用的敏感性實(shí)驗(yàn)

按綠茶浸出液與抗菌藥物合用形成的抑菌圈直徑與單一抗菌藥物的抑菌圈直徑比值計(jì)算，若比值小于0.7，則屬于拮抗作用；若比值大于1.0，則屬于協(xié)同作用；若比值在0.7～1.0之間或兩者抑菌圈均在10mm以下，則兩者互無作用。

據(jù)計(jì)算，C組與A組的比值為0.98，D組與B組的比值為0.96，說明綠茶浸出液與兩種抗菌藥物均互無作用。

3結(jié)論與分析

大腸桿菌是生活在人和動(dòng)物腸道中的最主要菌群，對(duì)多種抗菌藥物敏感，一般使用對(duì)革蘭氏陰性菌有效的抗菌藥物或廣譜抗菌藥物，但易耐藥。而中醫(yī)認(rèn)為綠茶具有消毒殺菌的作用，因此本實(shí)驗(yàn)采取濾紙片法測(cè)定綠茶浸出液對(duì)兩種常見抗菌藥物的影響。研究發(fā)現(xiàn)，阿莫西林組與青霉素v鉀片對(duì)大腸桿菌的抑菌效果有顯著差異，添加相同濃度的阿莫西林與青霉素v鉀片，青霉素v鉀片組形成的抑菌圈直徑僅為阿莫西林組的63.08%，說明廣譜青霉素對(duì)大腸桿菌的抑菌作用比窄譜青霉素強(qiáng)得多。同時(shí)經(jīng)過顯著性差異分析，發(fā)現(xiàn)綠茶對(duì)兩種藥物的抑菌作用均無顯著影響，但比較抑菌圈直徑仍存在一定差異，單一添加抗菌藥物時(shí)的抑菌圈直徑均略高于抗菌藥物和綠茶濾出液的抑菌圈直徑，綠茶在一定程度上影響了抗菌藥物的作用。

由于實(shí)驗(yàn)材料等因素的限制，本研究未對(duì)茶葉的不同成分對(duì)抗菌藥物抗菌情況的影響進(jìn)行探究，也未通過定量測(cè)定分析綠茶對(duì)抗菌藥物的作用。此外，不同種類的抗菌藥物及選取的供試菌種類可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生一定的影響。目前已有研究表明，茶葉中的茶多酚是發(fā)揮抑菌作用的最主要物質(zhì)，綠茶提取物中茶多糖、差皂素、茶色素、咖啡因等成分抑菌效果不明顯。另有研究表明，當(dāng)茶多酚的濃度大于0.8g/L甚至是1.0g/L時(shí)能夠發(fā)現(xiàn)某些菌的抑菌圈顯著變化，而本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)論是綠茶對(duì)消炎藥抑菌作用沒有顯著影響，可能原因是綠茶濃度較低，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)探究中可以改變綠茶濃度或抗菌藥物濃度進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)探究。

基于高中基本實(shí)驗(yàn)操作水平，師生能夠完成綠茶對(duì)常見抗菌藥物抑菌作用的探究實(shí)驗(yàn)。在提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)操作技能的同時(shí)，培養(yǎng)學(xué)生對(duì)日常生活中“常識(shí)”的批判性思維，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，在此基礎(chǔ)上，學(xué)生還能夠根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)散思維，靈活遷移知識(shí)切實(shí)鍛煉學(xué)生的科學(xué)探究能力。