楊宗英 張一柳 胡 鯤 劉力碩 蔡紅桂 張鳳翔 楊先樂(lè)

(1. 上海海洋大學(xué)國(guó)家水生動(dòng)物病原庫(kù), 上海 201306; 2. 南昌市農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 南昌 330038;3. 興化市安豐鎮(zhèn)水產(chǎn)站, 興化 225766; 4. 興化市漁業(yè)技術(shù)指導(dǎo)站, 興化 225700)

中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)又稱河蟹、毛蟹、清水蟹、大閘蟹, 因其味道鮮美而深受人們喜愛(ài)。我國(guó)的中華絨螯蟹養(yǎng)殖模式在不斷地改善和發(fā)展, 養(yǎng)殖產(chǎn)量也在逐年上升, 但是隨著我國(guó)養(yǎng)蟹產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展, 集約化程度不斷提高, 中華絨螯蟹的病害問(wèn)題也顯得尤為突出。江蘇省是中國(guó)中華絨螯蟹養(yǎng)殖大省, 興化市則被授予“河蟹養(yǎng)殖第一縣”的稱號(hào), 中華絨螯蟹養(yǎng)殖業(yè)成為了當(dāng)?shù)氐闹еa(chǎn)業(yè)。然而, 2015年大面積暴發(fā)的中華絨螯蟹“水癟子”病對(duì)興化的中華絨螯蟹養(yǎng)殖業(yè)造成了沉重的打擊, 尤其7月中旬“燦鴻”臺(tái)風(fēng)過(guò)境后, 江蘇省興化市80%以上的塘口出現(xiàn)了該病[1], 蟹農(nóng)損失慘重。中華絨螯蟹“水癟子”病已引起了各級(jí)政府和廣大蟹農(nóng)的關(guān)注。

本文首次對(duì)采自中華絨螯蟹“水癟子”病流行區(qū)的病蟹進(jìn)行病原學(xué)和病理學(xué)的系統(tǒng)研究, 旨在為中華絨螯蟹“水癟子”病發(fā)病原因的確定及診斷提供科學(xué)參考, 也為在養(yǎng)殖過(guò)程中對(duì)該病的防控提供一定的指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)用患病中華絨螯蟹采自江蘇省興化市安豐鎮(zhèn)發(fā)病養(yǎng)殖塘, 100只, 規(guī)格為80—100 g, 健康蟹采自江蘇省張家港市中華絨螯蟹養(yǎng)殖基地, 規(guī)格100—120 g, 采樣時(shí)間均為2016年9月份。病蟹肝胰腺淡黃色或土黃色, 鰓絲水腫或稍發(fā)黑, 附肢發(fā)軟、附肢肌肉萎縮; 健康蟹肝胰腺呈橘紅色, 肌肉飽滿。

1.2 病原學(xué)檢測(cè)

寄生蟲(chóng)檢測(cè)將30只病蟹體表、肝胰腺、鰓、肌肉等組織制成水浸片, 參照《水生動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)》[2], 對(duì)病蟹進(jìn)行寄生蟲(chóng)檢查。

細(xì)菌學(xué)檢測(cè)取30只病蟹, 用無(wú)菌水沖洗干凈后, 75%酒精棉球反復(fù)擦拭病蟹的步足外表及外殼, 進(jìn)行初步的蟹體消毒, 用滅菌注射器從病蟹的第三步足基部抽取血淋巴, 迅速將1滴血淋巴滴到普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上作劃線分離, 同時(shí)取肝胰腺、鰓、腹水、肌肉等組織于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上作劃線分離,28℃培養(yǎng)24h, 待平板上長(zhǎng)出形態(tài)一致的優(yōu)勢(shì)菌落后, 挑選單菌落再次進(jìn)行劃線分離, 獲得純培養(yǎng)物后接種于斜面培養(yǎng)基上保存。菌種的鑒定參考周德慶[3]和Bachanan等[4]的方法。

將分離純化的菌株在新鮮斜面培養(yǎng)基上于28℃培養(yǎng)24h, 分別用無(wú)菌生理鹽水洗下制成菌懸液, 用麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷岷脱蛴?jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后, 將菌液濃度稀釋為1×108CFU/mL。選擇取自張家港市中華絨螯蟹養(yǎng)殖基地健康無(wú)病, 附肢健全的中華絨螯蟹, 在90 L水族箱中進(jìn)行分組飼養(yǎng)2周, 待死亡率低于5%且穩(wěn)定時(shí), 將分離純化的菌懸液從健康中華絨螯蟹第三步足基部注入體腔(0.2 mL/只)進(jìn)行攻毒試驗(yàn), 其中每株菌的攻毒試驗(yàn)組設(shè)置3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)放入健康中華絨螯蟹30只, 對(duì)照組注射等量無(wú)菌生理鹽水。將不同菌株感染的中華絨螯蟹試驗(yàn)組和對(duì)照組置于不同持續(xù)充氧的水族箱中, 飼養(yǎng)3個(gè)月并觀察試驗(yàn)蟹是否發(fā)病, 水溫25—28℃, 水體pH7.10—7.25, 溶解氧6.45—6.75 mg/L。試驗(yàn)期間每天正常投喂一次中華絨螯蟹全價(jià)配合飼料, 每天換水1/2。

病毒學(xué)檢驗(yàn)取10只病蟹的病變組織, 加入等體積生理鹽水勻漿, 10000 r/min離心20min, 上清液用孔徑0.22 μm的濾膜過(guò)濾, 濾液經(jīng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂28℃培養(yǎng)24h, 確保無(wú)菌后作為病蟹組織的無(wú)菌組織濾液備用[5]。取一份濾液于30只健康中華絨螯蟹的第三步足基部注射(0.2 mL/只), 對(duì)照組每只蟹注射等量的滅菌生理鹽水, 同樣置于充氧的水族箱中進(jìn)行養(yǎng)殖觀察, 另取少許濾液滴在有支持膜的銅網(wǎng)上, 幾分鐘后用干凈濾紙從網(wǎng)邊吸去多余的液體,待濾液稍干后, 用2%磷鎢酸液染色1min, 濾紙吸去染液后, 在日立H60透射電鏡下觀察[6]。

同時(shí)取病蟹的肝胰腺等病變組織, 用2.5%戊二醛溶液前固定, 1%鋨酸后固定, 固定樣品經(jīng)酒精、丙酮脫水, Epon 812樹(shù)脂包埋, 制備超薄切片, 透射電鏡觀察, 檢查病變組織內(nèi)可能存在的病毒顆粒及包涵體[7]。

1.3 組織切片的制備

選取30只病蟹和正常蟹的肝胰腺、鰓、附肢肌肉等組織, Bouin氏液固定, 固定樣品經(jīng)70%、80%、95%、100%梯度酒精脫水, 二甲苯透明, 常規(guī)石蠟包埋。使用手搖式切片機(jī)切片(厚度約5 μm),H.E(蘇木精-伊紅)染色, Olympus顯微鏡觀察、拍片[8]。

2 結(jié)果

2.1 病癥

發(fā)病初期, 病蟹攝食量減少或者完全停止攝食、食線不飽滿, 活動(dòng)能力弱, 附肢無(wú)力, 反應(yīng)遲鈍,有些病蟹還伴有磨爪。后期可見(jiàn)病蟹殼發(fā)黑, 和正常的青殼有很大的差別, 底盤比較臟, 附肢中空, 用手輕按即會(huì)下陷。

將健康蟹和病蟹分別腹部向上放置, 健康蟹可以迅速翻身, 病蟹翻身艱難且速度較慢甚至無(wú)法翻身。解剖30只病蟹, 初期可發(fā)現(xiàn)病蟹鰓絲腫大, 肝胰腺腫脹并伴有將腫脹的肝胰腺排出體外的傾向,所占比例為33.33%, 嚴(yán)重時(shí)可見(jiàn)鰓絲呈灰白色或者黑色并且脆, 甲殼內(nèi)有大量積液, 打開(kāi)甲殼過(guò)一段時(shí)間, 積液可以形成果凍狀, 肝胰腺由橘黃色變成淡黃色、土黃色或者白色并伴有鰓絲水腫、肌肉萎縮, 所占比例為50.00%, 隨著病情加重, 病蟹的肝胰腺糜爛呈漿糊化, 并且具有黑鰓、灰鰓, 胸腔積水及個(gè)別病蟹排泄肝胰腺等癥狀, 蟹體有強(qiáng)烈的異味, 所占比例為16.67%。

2.2 病原生物檢測(cè)結(jié)果

寄生蟲(chóng)檢測(cè)結(jié)果病蟹體表和體內(nèi)很少有寄生蟲(chóng)寄生, 在患病嚴(yán)重的蟹體偶爾發(fā)現(xiàn)有累枝蟲(chóng)、鐘形蟲(chóng), 30只病蟹中, 有4只蟹檢出有寄生蟲(chóng)寄生, 所占比例為13.33%, 其中2只蟹檢出鐘形蟲(chóng), 2只蟹檢出累枝蟲(chóng), 數(shù)量很少, 這些少量的纖毛蟲(chóng)不足以引起中華絨螯蟹發(fā)病, 且在部分健康蟹的甲殼或鰓上同樣能夠檢測(cè)出幾個(gè)纖毛蟲(chóng)類寄生蟲(chóng), 30只健康蟹中, 有5只檢出有寄生蟲(chóng)寄生, 所占比例為16.67%, 其中3只檢測(cè)出有少量的鐘形蟲(chóng), 2只檢測(cè)出有少量的聚縮蟲(chóng), 其他寄生蟲(chóng)未檢出。

細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果病蟹體內(nèi)分離到的優(yōu)勢(shì)菌有5株, 分別是S077-1、S077-2、S077-3 、S077-4 、S077-5, 參照周德慶[3]和Bachanan等[4]的研究結(jié)果, 經(jīng)鑒定有3株菌屬于弧菌屬(Vibriosp.), 在30只病蟹中出現(xiàn)的頻率分別是16.67%、23.33%和10.00%, 1株菌屬于希瓦氏菌屬(Shewanellasp.)出現(xiàn)頻率為20.00%, 1株菌屬于不動(dòng)桿菌屬(Acinetobactersp.), 出現(xiàn)頻率為10.00%, 細(xì)菌回感試驗(yàn), 感染組和對(duì)照組中華絨螯蟹在養(yǎng)殖3個(gè)月內(nèi)均未出現(xiàn)任何病癥。

病毒學(xué)檢測(cè)結(jié)果病蟹組織除菌上清液接種健康蟹, 接種蟹在養(yǎng)殖3個(gè)月內(nèi)未見(jiàn)中華絨螯蟹出現(xiàn)“水癟子”病樣癥狀, 負(fù)染電鏡觀察也未見(jiàn)除菌上清液中有病毒顆粒存在, 且電鏡觀察病蟹組織也未見(jiàn)明顯的病毒顆粒和包涵體。

2.3 正常中華絨螯蟹的組織學(xué)觀察及病蟹組織病理變化

正常中華絨螯蟹肝胰腺的組織學(xué)觀察和病蟹肝胰腺組織病理變化同十足目的其他種類相似, 正常中華絨螯蟹的肝胰腺由無(wú)數(shù)肝小管組成,肝小管是肝胰腺的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位, 肝小管的中央是管腔。每一肝小管都是由位于基膜上的單層柱狀上皮細(xì)胞構(gòu)成, 細(xì)胞核排列整齊, 細(xì)胞間界線清楚, 上皮細(xì)胞分為胚細(xì)胞(EC)、分泌細(xì)胞(BC)、吸收細(xì)胞(FC)和儲(chǔ)存細(xì)胞(RC)(圖版Ⅰ-1)。中華絨螯蟹在發(fā)病初期肝胰腺為淡黃色, 肝細(xì)胞大部分水腫、變性, 出現(xiàn)少量的轉(zhuǎn)運(yùn)泡和空泡, 細(xì)胞排列輕度紊亂(圖版Ⅰ-2), 隨著病情的發(fā)展, 肝小管柱狀上皮細(xì)胞腫大加劇, 部分細(xì)胞間界線消失, 細(xì)胞出現(xiàn)融合, 空泡數(shù)量增多且體積增大(圖版Ⅰ-3);轉(zhuǎn)運(yùn)泡體積增大且轉(zhuǎn)運(yùn)泡內(nèi)的顆粒物增多(圖版Ⅰ-4); 基膜部分破裂, 且有部分肝細(xì)胞壞死, 可見(jiàn)壞死物落入管腔中(圖版Ⅰ-5); 基膜與柱狀上皮細(xì)胞完全分離, 肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊, 部分細(xì)胞解體, 散落在管腔中(圖版Ⅰ-6); 基膜與上皮細(xì)胞完全分離, 且基膜破裂, 部分細(xì)胞核碎裂或崩解, 內(nèi)容物外流(圖版Ⅰ-7); 肝小管結(jié)構(gòu)消失, 僅見(jiàn)模糊的肝小管輪廓, 肝胰腺外觀呈漿糊狀(圖版Ⅰ-8)

正常中華絨螯蟹鰓的組織學(xué)觀察和病蟹鰓病理變化正常中華絨螯蟹每條鰓都由具有支撐和運(yùn)輸功能的鰓軸及向兩側(cè)發(fā)出的相互平行的鰓葉構(gòu)成, 正常鰓葉由外向內(nèi)分別是角質(zhì)膜, 上皮細(xì)胞層和鰓腔, 其中網(wǎng)狀的鰓腔由上皮細(xì)胞和柱狀細(xì)胞共同形成, 鰓腔中有曲折迂回的通道, 有少量游離的血細(xì)胞(圖版Ⅱ-1、2)?；疾≈腥A絨螯蟹鰓葉增厚, 上皮層破壞, 角質(zhì)膜呈波狀拱起, 甚至斷裂,上皮細(xì)胞排列不規(guī)則, 上皮細(xì)胞層出現(xiàn)空泡; 鰓腔擴(kuò)大, 鰓腔中血細(xì)胞增多(圖版Ⅱ-3、4)。

正常中華絨螯蟹肌肉的組織學(xué)觀察和病蟹肌肉病理變化中華絨螯蟹的附肢肌肉為橫紋肌,肌纖維排列整齊, 橫紋清晰, 細(xì)胞核呈梭形或圓形,位于細(xì)胞邊緣(圖版Ⅱ-5), 患病中華絨螯蟹, 纖維松散, 部分肌纖維輕度變性或橫紋消失(圖版Ⅱ-6)。

3 討論

3.1 中華絨螯蟹“水癟子”病的發(fā)病特征和流行情況

根據(jù)已做調(diào)查匯總[9], 中華絨螯蟹“水癟子”病主要在江蘇省中華絨螯蟹主養(yǎng)區(qū)興化發(fā)生, 并且是在2015—2016年才大面積暴發(fā)的疾病。據(jù)文獻(xiàn)[10]記載, 該病的發(fā)生至少有7年之久, 之前的發(fā)病率較低, 并未引起人們的廣泛關(guān)注, 2015年該病的大面積暴發(fā)給興化的中華絨螯蟹養(yǎng)殖業(yè)造成了沉重的打擊, 經(jīng)濟(jì)損失達(dá)10億多元[1]。該病在3—4月份就開(kāi)始大量出現(xiàn), 在5—8月份上旬是該病的高發(fā)期,死亡率較高, 在高溫期過(guò)后, 死亡率逐漸下降直至達(dá)到平穩(wěn)甚至恢復(fù)的狀態(tài)。該病在仔蟹期、扣蟹期和成蟹期均存在, 對(duì)于仔蟹和扣蟹, 該病的危害主要是導(dǎo)致肝胰腺變成淡黃色或土黃色, 對(duì)于成蟹,往往還會(huì)導(dǎo)致成蟹脫殼不遂或脫殼后很難鈣化, 甲殼薄且脆。

3.2 中華絨螯蟹的病理特點(diǎn)

解剖病蟹可見(jiàn)病蟹的肝胰腺大多呈現(xiàn)水腫、萎縮、糜爛的狀態(tài); 頭胸甲內(nèi)有積液, 積液呈果凍狀; 鰓絲水腫或伴有灰鰓、黑鰓; 附肢發(fā)軟, 剪開(kāi)附肢可見(jiàn)肌肉萎縮且有水狀液體流出。病變組織石蠟切片觀察結(jié)果顯示, 病變最嚴(yán)重的器官是肝胰腺,病情較輕的中華絨螯蟹, 肝胰腺的肝細(xì)胞水腫、空泡樣變性、排列紊亂。肝胰腺呈漿糊狀壞死的, 病理切片顯示, 肝小管萎縮甚至結(jié)構(gòu)消失, 細(xì)胞核崩解。鰓組織相對(duì)肝胰腺病變較輕, 主要癥狀為鰓葉增厚, 鰓組織中出現(xiàn)細(xì)胞濁腫, 鰓葉上皮細(xì)胞及柱狀細(xì)胞廣泛變性, 排列不規(guī)則, 角質(zhì)膜呈破浪狀拱起, 部分區(qū)域出現(xiàn)細(xì)胞壞死, 鰓腔擴(kuò)張, 鰓腔中血細(xì)胞增多, 上皮細(xì)胞層出現(xiàn)空泡; 肌肉組織病變相對(duì)來(lái)說(shuō)最輕, 主要表現(xiàn)為肌纖維松弛, 部分肌纖維變性或橫紋消失。

依據(jù)本病的初步研究結(jié)果可推測(cè)中華絨螯蟹“水癟子”病, 是一種嚴(yán)重的器官損害性疾病, 肝胰腺是主要的靶器官且病變最嚴(yán)重。肝胰腺是甲殼類動(dòng)物重要的消化免疫器官, 其消化酶活力遠(yuǎn)超過(guò)腸道和胃[11], 同時(shí)甲殼動(dòng)物肝胰腺的也與物質(zhì)的貯存、排泄和蛻皮周期有關(guān)[12], 其重要的功能之一就是對(duì)毒物的分解作用, 大部分進(jìn)入中華絨螯蟹體內(nèi)的毒物都要肝胰腺分解為無(wú)毒物質(zhì)?；肌八T子”病的中華絨螯蟹, 肝胰腺發(fā)生嚴(yán)重的病理變化, 且局部發(fā)生壞死, 使中華絨螯蟹的肝胰腺功能受到嚴(yán)重?fù)p傷, 再加上中華絨螯蟹鰓組織細(xì)胞發(fā)生變性、壞死, 會(huì)直接影響到中華絨螯蟹的氣體交換[13,14]。此時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹食欲下降或者不吃食, 由于攝食量減少或停止攝食, 長(zhǎng)期的能量供應(yīng)缺乏會(huì)對(duì)中華絨螯蟹本身的正常生理活動(dòng)造成不可挽回的影響[15]。病蟹出現(xiàn)活動(dòng)緩慢, 上草或上岸不回, 活力下降, 大螯握力減少等癥狀。這也導(dǎo)致了病蟹免疫力下降, 更容易受到外界環(huán)境的影響, 出現(xiàn)死亡。

目前對(duì)中華絨螯蟹“水癟子”病的診斷主要根據(jù)其臨床癥狀——肝胰腺萎縮壞死。但僅僅憑借這些發(fā)病癥狀來(lái)診斷中華絨螯蟹的“水癟子”病, 嚴(yán)格來(lái)說(shuō)是不準(zhǔn)確的。因?yàn)橹腥A絨螯蟹生活的水環(huán)境復(fù)雜, 水體理化因子的突變或持續(xù)性毒害以及水體中存在的多樣性病原都可能使中華絨螯蟹發(fā)生病變, 并且中華絨螯蟹的許多疾病均可能出現(xiàn)相似的癥狀。本文在患“水癟子”病中華絨螯蟹組織器官中觀察到的病理變化, 如肝細(xì)胞空泡化、肝細(xì)胞壞死, 鰓葉腫脹, 細(xì)胞核破裂等是中華絨螯蟹“水癟子”病的一個(gè)重要特征, 根據(jù)這些特征可以準(zhǔn)確診斷中華絨螯蟹“水癟子”病。

3.3 發(fā)病原因

在對(duì)中華絨螯蟹“顫抖病”研究中, 通過(guò)電子顯微鏡觀察可在中華絨螯蟹病變組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)病毒顆粒[13]、螺原體[16]和類立克次氏體[17]等病原生物, 電鏡觀察患“水癟子”病蟹的病變組織和病變組織上清液時(shí), 未見(jiàn)病毒顆粒等病原生物, 且無(wú)菌濾液回感也未出現(xiàn)任何癥狀; 寄生蟲(chóng)學(xué)檢測(cè)極少見(jiàn)蟹體有纖毛蟲(chóng)寄生; 在肝細(xì)胞壞死的肝組織和鰓中分離、純化出5株優(yōu)勢(shì)菌, 但是回感試驗(yàn)證實(shí)5株菌并非中華絨螯蟹“水癟子”病的致病菌, 并且研究發(fā)現(xiàn)隨著病蟹病情的加重, 感染細(xì)菌的量越多, 由此確定壞死細(xì)胞及組織中出現(xiàn)的細(xì)菌是由于病蟹免疫力下降而導(dǎo)致的繼發(fā)感染。除此之外, 之前對(duì)中華絨螯蟹“水癟子”病的發(fā)病情況[9]進(jìn)行調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn), 在養(yǎng)殖方式上, 養(yǎng)殖密度越高的發(fā)病率往往越高; 用菊酯、敵百蟲(chóng)等高毒農(nóng)藥清塘的發(fā)病率明顯比用生石灰、茶籽粕等無(wú)毒、低殘留的高; 同一養(yǎng)殖戶不同塘口飼養(yǎng)的不同苗種發(fā)病率也有不同, 但是并沒(méi)有顯示出對(duì)品種顯著的依賴性; 中華絨螯蟹養(yǎng)殖戶在治療中華絨螯蟹“水癟子”病方面, 無(wú)論是用殺蟲(chóng)藥(對(duì)纖毛蟲(chóng)類有效的藥), 殺菌、抑菌藥物(抗生素類)還是抗病毒藥物(嗎啉呱等)均無(wú)效。由此判斷,生物性病原并不是引發(fā)中華絨螯蟹“水癟子”病的關(guān)鍵因子。

患“水癟子”病的病蟹其主要的病變組織為肝胰腺和鰓, 其病理變化與斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)[18]和小龍蝦(Orconectes propinquus)受到異物[19]或異常環(huán)境因子[20]脅迫, 中華絨螯蟹受到藥害脅迫[21]、高氨氮脅迫[22]和飼喂含組織胺的飼料[23], 中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)、日本對(duì)蝦(Marsupenaeus japonicus)和凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)受到高pH脅迫[24], 三疣梭子蟹在低鹽脅迫[25]時(shí)表現(xiàn)出來(lái)的病理特征相似, 都是肝細(xì)胞的空泡樣變性、出現(xiàn)轉(zhuǎn)運(yùn)泡、壞死和鰓葉增厚、上皮細(xì)胞變性、鰓角質(zhì)膜拱起, 局部空泡化, 鰓腔中血細(xì)胞增多。有研究表明, 甲殼動(dòng)物在環(huán)境脅迫條件下, 會(huì)將自身儲(chǔ)存的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要用于維持機(jī)體的基本生理代謝[26], 當(dāng)脅迫因子超過(guò)肝胰腺的解毒能力時(shí), 肝胰腺的正常結(jié)構(gòu)和生理功能將被破壞,肝細(xì)胞內(nèi)空泡和轉(zhuǎn)運(yùn)泡數(shù)量增多, 體積增大。有研究推測(cè)B細(xì)胞及其內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)泡數(shù)量增多, 體積增大有助于肝胰腺對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝吸收[27]。還有研究表明轉(zhuǎn)運(yùn)泡內(nèi)的顆粒物質(zhì)和空泡中包裹的物質(zhì)是脅迫機(jī)體的一些異物, 轉(zhuǎn)運(yùn)泡和空泡能夠?qū)⒅懦鲶w外, 起到解毒的目的[21,22]。Rabin[28]認(rèn)為甲殼動(dòng)物血細(xì)胞的功能主要有凝固、吞噬和合成糖原的功能, 患病中華絨螯蟹鰓腔中血細(xì)胞增多, 應(yīng)該是血細(xì)胞通過(guò)對(duì)異物的吞噬作用或者釋放能量以供鰓細(xì)胞利用, 是機(jī)體的一種自我防御體現(xiàn)[29—31]。比較這些病變特征, 可以得出中華絨螯蟹是由于受到了一些毒害因子的脅迫, 所以呈現(xiàn)出了“水癟子”病樣的癥狀, 但是究竟是哪些有害因子導(dǎo)致中華絨螯蟹患“水癟子”病, 還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

3.4 致病機(jī)理

甲殼動(dòng)物的體色的主要取決于類胡蘿卜素的含量, 中華絨螯蟹缺乏相關(guān)的酶系, 所需類胡蘿卜素必須從食物中獲得。蝦青素是體表色素中主要的類胡蘿卜素, 蝦青素本身呈現(xiàn)紅色, 在與蛋白質(zhì)結(jié)合后生產(chǎn)藍(lán)色蝦青素蛋白沉積于甲殼動(dòng)物體表[32]。與蝦青素不同, β-胡蘿卜素主要儲(chǔ)存在甲殼動(dòng)物的脂肪組織中, 其本身的顏色因濃度的差異, 可涵蓋由橘紅至黃色的所有色系, 在肝胰腺中, β-胡蘿卜素所占的比例高達(dá)42%—90%[33], 正因?yàn)棣?胡蘿卜素的含量不同, 致使甲殼動(dòng)物的肝胰腺也呈現(xiàn)不同程度的黃色。蝦青素和β-胡蘿卜素是甲殼動(dòng)物防御系統(tǒng)中非酶促系統(tǒng)的重要成員, 其中蝦青素的單線態(tài)氧淬滅能力是α-生育酚的100倍[34], β-胡蘿卜素是α-生育酚的50倍[35,36], 毒害因子脅迫往往會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生大量的活性氧自由基, 對(duì)中華絨螯蟹造成氧化脅迫[37], 在中華絨螯蟹受到毒害因子脅迫時(shí), 蝦青素和β-類胡蘿卜素很可能最先被動(dòng)用清除體內(nèi)的活性氧自由基, 從而引起類胡蘿卜素的含量減少,出現(xiàn)了“水癟子”病蟹體色變黑和肝胰腺顏色退色變白的癥狀[38]。還有一點(diǎn)就是類胡蘿卜素是脂溶性的, 不飽和脂肪酸的含量越高越有利于類胡蘿卜素的吸收和沉積[39], 脅迫因子可以引起中華絨螯蟹脂質(zhì)過(guò)氧化, 使細(xì)胞膜脂肪酸的不飽和度降低, 吸收和沉積類胡蘿卜素的能力也隨之降低[40]。

肝胰腺不僅是甲殼動(dòng)物動(dòng)物重要的消化器官,同時(shí)也是重要的解毒器官, 其組織結(jié)構(gòu)的可在一定程度上反映生物體受脅迫的程度[41]。甲殼動(dòng)物在受到脅迫時(shí)會(huì)將自身儲(chǔ)存的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要用于維持機(jī)體的基本生理代謝[26], 肝胰腺病變發(fā)白, 肝細(xì)胞空泡化將進(jìn)一步造成肝胰腺代謝異常, 對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力降低, 從而導(dǎo)致全身性功能障礙,免疫機(jī)能下降, 同時(shí)繼發(fā)細(xì)菌感染會(huì)導(dǎo)致中華絨螯蟹的黑鰓、灰鰓等癥狀。甲殼動(dòng)物的血細(xì)胞除有重要的免疫防御功能之外, 也和呼吸有關(guān)[42], 鰓腔中血淋巴減少和血細(xì)胞凝集會(huì)嚴(yán)重影響中華絨螯蟹鰓的呼吸功能, 因此“水癟子”病蟹容易缺氧, 上草、上邊不回?！八T子”病蟹整體免疫機(jī)能的下降也使病蟹對(duì)外界環(huán)境的變化極為敏感, 在環(huán)境出現(xiàn)驟變或長(zhǎng)途運(yùn)輸時(shí)很容易出現(xiàn)死亡。

3.5 中華絨螯蟹“水癟子”病的科學(xué)定名

中華絨螯蟹“水癟子”病是當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶的俗稱,因?yàn)椴⌒反蠖帱S和肌肉不飽滿, 有的甚至無(wú)黃, 且頭胸甲內(nèi)有積液, 剪斷附肢也有水狀液體流出, 為此養(yǎng)殖戶形象地稱之為“水癟子”。從組織學(xué)和解剖學(xué)上來(lái)說(shuō), 蟹黃就是中華絨螯蟹的肝胰腺, 因此養(yǎng)殖戶所說(shuō)的無(wú)黃也就是中華絨螯蟹的肝胰腺不飽滿, 健康中華絨螯蟹的肝胰腺呈橘黃色, 病蟹的肝胰腺顏色變淡, 且隨著病情發(fā)展, 出現(xiàn)萎縮壞死。目前, 對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物病害的研究, 存在一病多癥, 一癥多病、同名異病和同病異名等問(wèn)題, 給科研工作者帶來(lái)很大的困難, 本文研究初步表明中華絨螯蟹“水癟子”病為非生物性疾病, 根據(jù)病因和病癥給予中華絨螯蟹“水癟子”病科學(xué)的定名, 即中華絨螯蟹肝胰腺壞死綜合癥(Hepatopancreatic necrosis syndrome, HPNS)。

圖版Ⅰ 對(duì)照組和患病中華絨螯蟹肝胰腺組織病理觀察PlateⅠ The histology of hepatopancreas of control group and disease Chinese mitten crab

圖版Ⅱ 對(duì)照組和患病中華絨螯蟹腮和肌肉組織病理觀察PlateⅡ The histology of gill tissue and limbs muscle of control group and disease Chinese mitten crab

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