吳亞堅(jiān)，徐 賽，李 飛，韓沖沖，彭文文，李保同

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，南昌 330045）

吡蚜酮（pymetrozine）是一種具有內(nèi)吸和觸殺活性的吡啶雜環(huán)類(lèi)殺蟲(chóng)劑，主要用于飛虱和蚜蟲(chóng)等刺吸式口器害蟲(chóng)的防治[1]；殺蟲(chóng)雙（bisultap）是一種具有胃毒、觸殺及內(nèi)吸活性的沙蠶毒素類(lèi)殺蟲(chóng)劑，主要用于二化螟和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲(chóng)的防治[2]。由吡蚜酮與殺蟲(chóng)雙復(fù)配加工的緩釋粒在稻田施用1次，可控制水稻整個(gè)生育期的主要害蟲(chóng)。目前，吡蚜酮和殺蟲(chóng)雙單劑的分析方法較多[3-7]，而對(duì)該復(fù)配制劑中有效成分同時(shí)進(jìn)行分析的方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本文建立了利用高效液相色譜同時(shí)測(cè)定該復(fù)配制劑中2種有效成分的方法，方法操作簡(jiǎn)便，線性關(guān)系良好，可用于該制劑質(zhì)量控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent-1260型液相色譜儀，配紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器和Zorbax Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；孔徑約0.45 μm的過(guò)濾膜；SB-5200DT超聲波清洗機(jī)。

吡蚜酮（≥98.5%）和殺蟲(chóng)單（≥98.3%）標(biāo)準(zhǔn)品，均由國(guó)家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心提供；0.5%吡蚜酮·殺蟲(chóng)雙緩釋粒（0.1%吡蚜酮＋0.4%殺蟲(chóng)雙），由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院提供；乙腈、甲醇（色譜純）；二次蒸餾水；磷酸鹽緩沖液（KH2PO4，0.043 mol/L）。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈＋水＋磷酸鹽緩沖液（體積比4∶86∶10）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)242 nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量5μL。在上述色譜條件下，吡蚜酮保留時(shí)間約4.7 min，殺蟲(chóng)單約3.0 min。色譜圖見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 吡蚜酮和殺蟲(chóng)單標(biāo)樣溶液高效液相色譜圖

圖2 0.5%吡蚜酮·殺蟲(chóng)雙緩釋粒高效液相色譜圖

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品約0.01 g（精確至0.02 mg）、殺蟲(chóng)單標(biāo)準(zhǔn)品約0.04 g（精確到0.02 mg），置于50 mL容量瓶中，加乙腈溶解，超聲波水浴助溶10 min，冷卻至室溫，定容，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，濾液備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣10.00 g（精確到0.02 mg），置于50 mL容量瓶中，加乙腈溶解，超聲波水浴助溶10 min，冷卻至室溫，定容，搖勻，離心分離，取上層清液過(guò)0.45 μm濾膜，濾液備用。

1.4 測(cè)定

在上述色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.0%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測(cè)定。

1.5 計(jì)算

吡蚜酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1（%）按照式（1）計(jì)算。

式（1）中：A1為吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；A2為試樣中吡蚜酮峰面積；m1為吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量（g）；m2為試樣稱樣量（g）；P為吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

式（2）中：A1為殺蟲(chóng)單標(biāo)準(zhǔn)品峰面積；A2為試樣中殺蟲(chóng)雙峰面積；m1為殺蟲(chóng)單標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量（g）；m2為試樣稱樣量（g）；P為殺蟲(chóng)單標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）；355.4為殺蟲(chóng)雙的摩爾質(zhì)量（g/mo1），351.4為殺蟲(chóng)單的摩爾質(zhì)量（g/mo1）。

殺蟲(chóng)雙質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2（%）按照式（2）計(jì)算。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)樣的選擇

據(jù)文獻(xiàn)[8]記載，殺蟲(chóng)雙標(biāo)樣極易吸潮，不便制備和貯存，而殺蟲(chóng)單標(biāo)樣不易吸潮，易于制備和貯存。由于殺蟲(chóng)雙和殺蟲(chóng)單在水溶液中沒(méi)有本質(zhì)的區(qū)別，且理化性質(zhì)相同，故本方法選擇殺蟲(chóng)單標(biāo)準(zhǔn)品替代殺蟲(chóng)雙標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算時(shí)僅需進(jìn)行系數(shù)折算即可。

2.2 流動(dòng)相的選擇

[3-7]中吡蚜酮和殺蟲(chóng)單（或殺蟲(chóng)雙）的分析方法，采用不同比例甲醇＋水和乙腈＋水流動(dòng)相組合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，色譜峰對(duì)稱性較差。在峰形相對(duì)較好的乙腈＋水組合中加入適當(dāng)比例的磷酸鹽緩沖溶液，取得了良好的效果。當(dāng)以乙腈＋水＋磷酸鹽緩沖液（體積比4∶86∶10）為流動(dòng)相，流速在1.0 mL/min時(shí)，2個(gè)組分分離時(shí)間適中，峰形對(duì)稱，且與雜質(zhì)分離良好。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

通過(guò)紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器對(duì)吡蚜酮和殺蟲(chóng)單的標(biāo)樣溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。吡蚜酮在299 nm有最大吸收峰，在237 nm的吸收峰次之；而殺蟲(chóng)單在242 nm有最大吸收峰。選擇237 nm左右系列波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)在242 nm波長(zhǎng)下2個(gè)組分均有較強(qiáng)的吸收峰，且無(wú)雜質(zhì)干擾。因此，確定242 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 線性相關(guān)性測(cè)定

稱取吡蚜酮標(biāo)樣約0.10 g（準(zhǔn)確至0.02 mg）、殺蟲(chóng)單標(biāo)樣約0.40 g（準(zhǔn)確至0.02 mg），置于50 mL容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)樣母液備用。分別移取標(biāo)樣母液1,2,4,8,16 mL于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，配制系列標(biāo)樣溶液，搖勻，按上述色譜條件測(cè)定其峰面積。以標(biāo)樣溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吡蚜酮線性回歸方程為y=66.446 2 x＋1.744 1，相關(guān)系數(shù)為0.999 9（n=5）；殺蟲(chóng)單線性回歸方程為y=61.532 5 x＋0.845 2，相關(guān)系數(shù)為0.999 8（n=5）。由此說(shuō)明，在選定的色譜條件下，吡蚜酮和殺蟲(chóng)單的質(zhì)量濃度與響應(yīng)值均具有良好的線性關(guān)系。

2.5 方法的精密度

取同一0.5%吡蚜酮·殺蟲(chóng)雙緩釋粒樣品，在上述色譜條件下平行測(cè)定8次。吡蚜酮和殺蟲(chóng)雙標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.000 8和0.001 4，變異系數(shù)分別為0.76%和0.35%。表明該方法的精密度較高（見(jiàn)表1）。

表1 分析方法精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.6 方法的準(zhǔn)確度

稱取5份已知含量的0.5%吡蚜酮·殺蟲(chóng)雙緩釋粒試樣，置于50 mL容量瓶中，分別加入一定量的吡蚜酮和殺蟲(chóng)單標(biāo)樣溶液，按上述方法測(cè)定有效成分的總質(zhì)量（殺蟲(chóng)單折算成殺蟲(chóng)雙）。吡蚜酮平均回收率為99.59%，殺蟲(chóng)雙平均回收率為99.23%（見(jiàn)表2）。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以Zorbax Eclipse XDB-C18柱為分離柱，乙腈＋水＋磷酸鹽緩沖液（體積比4∶86∶10）為流動(dòng)相，242 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)定0.5%吡蚜酮·殺蟲(chóng)雙緩釋粒中有效成分含量。方法操作簡(jiǎn)便，分離效果好，雜質(zhì)干擾較小，線性關(guān)系良好，且具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，適用于該制劑的質(zhì)量檢測(cè)。

表2 分析方法準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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