于喜法 秦合軍

乳腺癌是1種臨床上女性最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率在女性腫瘤類疾病中發(fā)病率靠前，有數(shù)據(jù)顯示[1]，乳腺癌的發(fā)病率在多個地區(qū)占據(jù)首位，對女性患者的生命健康造成嚴(yán)重影響。目前，全球范圍內(nèi)乳腺癌的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢[2]，且其發(fā)病有趨于年輕化的趨勢。隨著臨床在乳腺癌的研究不斷成熟，越來越多的免疫組化指標(biāo)被應(yīng)用于評估患者的預(yù)后和指導(dǎo)乳腺癌患者的治療以及判斷治療效果[3]。分析乳腺癌患者的臨床病理特征，掌握其流行病學(xué)特征，從而通過對好發(fā)人群進行篩查及防治，有利于乳腺癌的早期診斷和治療，進而控制乳腺癌的病情具有重要意義[4-5]。本研究通過分析ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67等免疫組化指標(biāo)陽性表達與乳腺癌患者的年齡、組織分型、病理分期、分化程度關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月至2017年3月我院收治且確診為乳腺癌患者106例作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：所選病例經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌患者；年齡25～75歲，平均年齡(43.68±6.94)歲；術(shù)前未接受任何放化療治療；組織學(xué)分型： 17例髓樣癌、30例浸潤性導(dǎo)管癌、59例浸潤性小葉癌；臨床分期：17例Ⅰ期、60例Ⅱ期、20例Ⅲ期、9例Ⅳ期；腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例；分化程度：20例高分化、72例中等分化、14例低分化。所有研究對象在了解本研究目的后均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前接受過放化療等抗腫瘤藥物治療；已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移者。

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)病理診斷 所有樣本均來自于乳腺癌患者術(shù)中所得，并用10%甲醛固定，然后經(jīng)脫水及透明處理，石蠟包埋，制成切片，切片厚度為4 μm，然后行染色處理，采用蘇木精-伊紅(HE)常規(guī)染色，并借助顯微鏡觀察切片判斷腫瘤病理分型。

1.2.2 免疫組化檢測 切片采用梯度酒精進行脫臘水化，抗原修復(fù)，室溫采用3%過氧化氫孵育5～10 min，從而阻斷過氧化物酶活性，蒸餾水沖洗后用PBS浸泡5 min，采用山羊血清進行封閉，加一抗，37 ℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h，PBS浸泡沖洗3次，采用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，并用蒸餾水沖洗、脫水、復(fù)染、封片等操作。陰性對照采用PBS作為一抗代替品，陽性對照采用已知陽性標(biāo)本作為參照對象。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化指標(biāo)檢查陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：ER、PR、P53及Ki-67定位為腫瘤細胞核，陽性表達時細胞核有棕黃色顆粒，在隨意5個高倍鏡視野下，平均陽性細胞比例[6]：陽性細胞比例不足10%為陰性，超過10%為陽性，并根據(jù)陽性細胞比例分為弱陽性(10%～25%)、中度陽性(26%～50%)、強陽性(超過50%)；C-erbB-2位于細胞膜或細胞質(zhì)，陽性表達時其細胞膜或細胞質(zhì)有棕黃色顆粒，根據(jù)其細胞膜或細胞質(zhì)是否著色判斷陰陽性，陰性為不著色，陽性為著色陽性細胞比例超過10%，根據(jù)其著色強弱及連續(xù)性分為弱陽性(弱強度著色且不連續(xù))、陽性(中等強度著色，部分不連續(xù))和強陽性(強著色且著色連續(xù)不間斷)，陽性率=(弱陽性+陽性+強陽性)/病例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件處理分析數(shù)據(jù)，定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；采用t檢驗；定性資料以百分比表示，采用χ2檢驗，采用Pearson進行相關(guān)性分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織免疫組化指標(biāo)陽性率

ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67在乳腺癌組織中的陽性表達率，分別為60.38%(64/106)、57.55%(61/106)、51.58%(55/106)、44.34%(47/106)和73.58%(78/106)，各免疫組化指標(biāo)陽性率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=20.47,P<0.01)，見表1。

表1 各免疫組化指標(biāo)在乳腺癌組織中的表達情況(例，%)

2.2 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67與其臨床病理特征的相關(guān)性

ER、PR與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)，與組織學(xué)分型和病理分期有關(guān)；C-erbB-2、Ki-67與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期有關(guān)(P<0.05)；P53與乳腺癌臨床病理特征無顯著相關(guān)性。ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67與腫瘤分化程度有關(guān)。

2.3 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67表達與組織分化程度的相關(guān)性(表2)

采用Pearson分析，免疫組化指標(biāo)與組織分化程度的相關(guān)性，結(jié)果顯示，ER和PR與乳腺癌組織分化程度呈負相關(guān)性(γ=-0.121,γ=-0.316,P<0.01)；C-erbB-2、P53和Ki-67與乳腺癌組織分化程度呈正相關(guān)性(γ=0.207,γ=0.018,γ=0.284,P<0.01)。

表2 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性(例，%)

注： PR、C-erbB-2、Ki-67陽性表達不同年齡組相比，*為P<0.05；不同組織學(xué)分型相比，Ki-67陽性表達有顯著性差異，*為P<0.05；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者與無轉(zhuǎn)移者相比，C-erbB-2、Ki-67陽性表達有顯著性差異，*為P<0.05；不同臨床分期相比，C-erbB-2、Ki-67陽性表達有顯著性差異，*為P<0.05；不同分化程度相比，ER、PR陽性表達有顯著性差異，*為P<0.05。

3 討論

乳腺癌是1種對女性身體健康和心理健康造成嚴(yán)重威脅的惡性腫瘤疾病，近年來，乳腺癌的發(fā)病人數(shù)逐年增多，且發(fā)病年齡正趨于年輕化，乳腺癌在其發(fā)病早期的治愈率較高，因此，在乳腺癌發(fā)病早期準(zhǔn)確診斷并制定相應(yīng)的治療方案，指導(dǎo)臨床治療，是促進預(yù)后，預(yù)防病情復(fù)發(fā)的關(guān)鍵[7-8]。本研究圍繞ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67等免疫組化指標(biāo)，分析其陽性表達與乳腺癌的病理的關(guān)系，進而為今后乳腺癌的防治工作提供參考。

乳腺癌是1種依賴激素生長的惡性腫瘤，其生長與患者體內(nèi)雌、孕激素水平有關(guān)，PR、ER在患者體內(nèi)的表達情況可用于預(yù)測乳腺癌患者體內(nèi)內(nèi)分泌治療效果，因此，了解ER、PR在體內(nèi)的表達以及其功能狀態(tài)，能更為有效的為糾正內(nèi)分泌紊亂制定治療方案和治療效果的評估提供可靠且有效的生化指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，ER、PR在乳腺癌組織中的陽性表達率分別為60.38%、57.55%，其中PR與乳腺癌患者的年齡有關(guān)，ER、PR陽性表達與腫瘤大小無顯著關(guān)系，與余輝等[9]報道結(jié)果相一致。本研究結(jié)果顯示ER、PR與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無顯著性差異，但有研究報道[10]，ER、PR陽性患者給予適當(dāng)?shù)膬?nèi)分泌治療，可使復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的發(fā)生情況減少，進而延長患者的生存期。同時結(jié)果顯示乳腺癌患者惡性程度與ER、PR在腫瘤組織中的陽性表達率呈負相關(guān)，臨床病理分期Ⅰ期ER、PR的陽性表達率最高，與胡湘軍等[11]研究結(jié)果相一致。

在正常情況下C-erbB-2是處于非激活狀態(tài)時是無腫瘤轉(zhuǎn)化活性，但當(dāng)其被激活時可表現(xiàn)出腫瘤轉(zhuǎn)化活性。當(dāng)體內(nèi)C-erbB-2處于高表達狀態(tài)時，體內(nèi)細胞表現(xiàn)為增殖能力旺盛，有較強的侵襲力，可導(dǎo)致腫瘤細胞快速分化增殖，侵襲周圍組織和向遠端轉(zhuǎn)移[12]。提示腫瘤惡性程度越高，其患者預(yù)后越差，與乳腺癌患者病情進展和轉(zhuǎn)移潛能呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，C-erbB-2陽性表達率為51.89%，C-erbB-2與年齡有關(guān)，35～60歲人群發(fā)病率最高，陽性率為66.67%，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期有關(guān)，隨著淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移，其在乳腺癌患者癌變組織中的陽性表達率越高，同時病理分期越高，其陽性表達率越高，病理IV期患者的陽性表達率高達77.79%，且C-erbB-2的陽性表達與乳腺癌組織惡性程度成正相關(guān)，因此，C-erbB-2的陽性表達越高，其預(yù)后效果越差，故可通過乳腺癌患者組織中C-erbB-2陽性表達情況評估其預(yù)后。

P53基因分為野生型和突變型兩類，野生型P53是1種抑癌基因，具有監(jiān)督細胞基因完整性的作用[13]，突變型P53不僅失去野生型P53抑制癌癥的作用，還具促進腫瘤細胞向惡性轉(zhuǎn)化的活性作用，野生型P53基因在正常情況下難以被檢測到，僅在DNA發(fā)生損傷即腫瘤病變時可檢測到突變型P53。提示突變型P53可能是乳腺癌患者病情進一步惡化的重要因素。本研結(jié)果顯示，P53的陽性率為44.34%，與乳腺癌組織惡性程度呈正相關(guān)，但與乳腺癌的其他病理特征無顯著相關(guān)性，這與國內(nèi)一些研究報道結(jié)果不一致[14]。雖然突變型P53基因在乳腺癌中作為單個生物學(xué)指標(biāo)的特異性較弱，但其參與腫瘤生長過程，并在其他因素間可能發(fā)揮協(xié)同和調(diào)節(jié)作用，進而對乳腺癌的生長及預(yù)后造成影響。

Ki67是1種觀察腫瘤細胞增殖活性的蛋白，其不僅半衰期短，而且退出細胞周期后能快速降解，因此，被認為評估腫瘤細胞活性的最可靠指標(biāo)[15]。有研究報道[16]，乳腺癌早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者其癌變組織中Ki-67的陽性表達率越高，其預(yù)后效果越差，提示Ki-67有促進腫瘤細胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力。本研究結(jié)果顯示，Ki-67陽性率為73.58%，與組織分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期有關(guān)，且與乳腺癌組織惡性程度呈正相關(guān)，說明Ki-67在組織的表達與腫瘤細胞的生長及浸潤有關(guān)。

綜上所述，通過ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67多項免疫組化指標(biāo)聯(lián)合檢測，能更為準(zhǔn)確的判斷乳腺癌的病情、治療效果以及評估預(yù)后效果，進而有助于指導(dǎo)臨床對乳腺癌的治療及療效的判斷，從而提高臨床治療效果。

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