李 東，趙衛(wèi)東

1.濱州醫(yī)學(xué)院臨床學(xué)院(煙臺校區(qū))，山東 煙臺 264000； 2.勝利油田中心醫(yī)院消化內(nèi)科

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在世界各地普遍流行，其感染率在歐洲約20%，南美洲約60%，亞洲約50%[1]。研究[2]統(tǒng)計(jì)顯示，2008年我國H.pylori感染率在城市為45.2%，農(nóng)村為39%。H.pylori感染可能與結(jié)腸癌、結(jié)腸息肉的發(fā)病相關(guān)，但尚無定論。近年來，隨著生活水平的提高，我國結(jié)腸息肉的發(fā)病率呈上升趨勢，但其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確。ZUMKELLER等[3]就此對1991年至2002年的文獻(xiàn)進(jìn)行了首次Meta分析發(fā)現(xiàn)，H.pylori感染與結(jié)腸癌及結(jié)腸腺瘤性息肉的發(fā)病可能相關(guān)，OR值為1.4。SOYLU等[4]用免疫組化方法在結(jié)腸腫瘤中檢測到了H.pylori的存在，這進(jìn)一步印證了H.pylori與結(jié)腸息肉及結(jié)腸癌的發(fā)生可能有相關(guān)性。研究[5]顯示，H.pylori感染與結(jié)腸息肉有相關(guān)性，但目前對于不同病理類型的結(jié)腸息肉與H.pylori感染之間是否有一定的關(guān)系，研究較少。本研究主要應(yīng)用嗜銀染色(Warthin-Starry，WS)法檢測H.pylori感染情況，相對有非侵入性的呼氣試驗(yàn)和快速尿素酶檢測，WS染色法具有敏感性、準(zhǔn)確性高，染出的H.pylori清晰度高的特點(diǎn)。應(yīng)用χ2檢驗(yàn)檢測各組之間是否存在一定關(guān)系，從而進(jìn)一步指導(dǎo)臨床。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2016年1月至2017年1月于勝利油田中心醫(yī)院行結(jié)腸鏡檢查的患者180例，切除結(jié)腸息肉，標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)診斷后分為3組，其中腺瘤性息肉60例，炎性息肉60例，增生性息肉60例，同時收集結(jié)腸鏡檢查陰性患者60例，經(jīng)患者同意后取微量標(biāo)本檢測H.pylori感染情況作為對照組。所有患者均無家族性腺瘤性息肉病史，近4周未服用過抗生素、質(zhì)子泵抑制劑或糖皮質(zhì)激素、無H.pylori根除治療史、長期(>1個月)口服NSAID和炎癥性腸病及結(jié)腸癌病史，所有患者均沒有放化療及其他針對腫瘤的特殊治療。

1.2方法

1.2.1 標(biāo)本收集：采用Olympus CF-290電子結(jié)腸鏡檢查，對發(fā)現(xiàn)結(jié)腸息肉患者予以描述鏡下息肉的部位、大小和數(shù)目，所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛液體浸泡后送往病理科。

1.2.2 病理學(xué)組織檢測：組織固定后測定直腸息肉的大小，由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師行病理組織學(xué)檢查確診息肉病理類型，進(jìn)一步分為腺瘤性息肉、炎性息肉、增生性息肉。

1.2.3H.pylori毒力菌株抗體檢測：WS染色法試劑(硝酸銀、明膠、對苯二酚)，TB-718生物組織包埋機(jī)，Leica ST5020全自動組織脫水機(jī)，Olympus bx51顯微鏡，Anymicro DSS圖像采集系統(tǒng)。

1.2.4 WS染色法原理：利用生物組織成分對銀離子的還原性質(zhì)不同，借助含銀離子顯影液中對苯二酚的還原顯影輔助作用，使不同組織部位銀離子密度不同，從而顯示從淺黃色到黑色不同的色彩，也顯示出不同組織部位中微生物和異物的形態(tài)。由于H.pylori具有嗜銀性，在一定條件下，H.pylori可以從銀液中吸附銀離子，后經(jīng)孵育液中的顯色劑處理，H.pylori內(nèi)已吸咐的銀離子被還原為黑色的金屬銀而顯色。

1.2.5 WS染色法步驟：(1)取15 ml蒸餾水加入浸銀液缸中，將脫蠟到水的石蠟切片用蒸餾水涮洗1次后放入染缸中，再分別取5 ml、10 ml的蒸餾水加入顯影液粉1、2瓶中。將以上浸銀液及顯影液共置于60 ℃溫箱中助溶(最少30 min)，完全溶解后取出備用；(2)將浸銀液缸內(nèi)的液體全部倒掉，蒸餾水涮洗2次；(3)將顯影液1中液體倒入顯影液2中，快速搖勻后加入到浸銀液缸中顯影1～5 min(以組織呈咖啡色為宜)；(4)倒掉顯影液缸中的液體，蒸餾水涮洗2次；(5)脫水透明封片。

1.2.6 結(jié)果分析：光學(xué)顯微鏡下觀察，組織細(xì)胞的細(xì)胞漿為淺黃色或淺灰色，細(xì)胞核呈黑褐色，組織纖維為黑色至棕黃色，H.pylori呈現(xiàn)細(xì)膩而清晰的黑色S形、桿狀、海鷗狀、螺旋狀、球狀、短棒狀，聚居或散在出現(xiàn)。

1.2.7 細(xì)菌感染程度分級：H.pylori陰性：染色后樣本組織內(nèi)無待檢細(xì)菌出現(xiàn)。H.pylori陽性：染色后樣本組織黏膜上皮表層及腺腔內(nèi)見待檢細(xì)菌半定量如下：(+)輕度：黏膜上皮表層及腺腔內(nèi)偶見陽性待檢細(xì)菌；(++)中度：黏膜上皮表層及腺腔內(nèi)可見散在的陽性待檢細(xì)菌，未聚集成簇；(+++)重度：黏膜上皮表層及腺腔可見大量陽性待檢細(xì)菌，聚集成簇或片[6]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用Pearson和Fisher確切概率計(jì)算法行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各組基本特征及H.pylori感染情況統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，息肉組和對照組的性別、年齡相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。息肉組H.pylori感染率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

如表1所示，腺瘤性息肉組、對照組的H.pylori檢出率分別為81.67%、26.67%，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=16.754，P<0.05)。

表1 腺瘤性息肉組與對照組一般資料及H.pylori感染情況比較Tab 1 Comparison of general data and H.pylori infection between the adenomatous polyp group and the control group

如表2所示，增生性息肉組、對照組的H.pylori檢出率分別為51.67%、26.67%，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.787，P<0.05)。

如表3所示，炎性息肉組、對照組的H.pylori檢出率分別為50.00%、26.67%，兩組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.261，P<0.05)。

表2 增生性息肉組與對照組一般資料及H.pylori感染情況比較Tab 2 Comparison of general data and H.pylori infection between the hyperplastic polyp group and the control group

表3 炎性息肉組與對照組一般資料及H.pylori感染情況比較Tab 3 Comparison of general data and H.pylori infection between the inflammatory polyp group and the control group

2.2息肉亞組之間H.pylori感染率比較應(yīng)用多樣本計(jì)數(shù)資料方差分析比較各組之間的差異情況顯示，腺瘤性息肉組H.pylori感染率(81.67%)明顯高于增生性息肉組(51.67%)和炎性息肉組(50.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而后兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

1994年,H.pylori被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為胃癌一級致病因子，人群感染率約50%[7]。H.pylori感染現(xiàn)已成為一個全球性的問題，世界各國尤其是發(fā)展中國家感染率較大，平均感染率在50%以上。目前已證實(shí)，H.pylori感染與胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關(guān)組織淋巴瘤、胃癌等疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。而對于H.pylori感染與結(jié)腸息肉及結(jié)直腸癌的發(fā)病是否相關(guān)一直存在爭議。

近年來，隨著生活水平的提高，我國結(jié)腸息肉、結(jié)腸癌的發(fā)病率也呈上升趨勢，越來越趨向于年輕化，因此，在臨床中對于結(jié)腸息肉、結(jié)腸癌的研究迫在眉睫。H.pylori感染可能導(dǎo)致結(jié)腸息肉甚至結(jié)腸癌，主要是與胃泌素及環(huán)氧合酶2(Cyclooxygenase，COX-2)有關(guān)[8-10]。COX-2作為腫瘤相關(guān)基因，40%～90%的結(jié)腸腺瘤性息肉和90%結(jié)腸癌患者均存在COX-2的高表達(dá)。SOYLU等[4]用免疫組化方法在結(jié)腸腫瘤中檢測到了H.pylori的存在，這印證了H.pylori與結(jié)腸息肉及結(jié)腸癌的發(fā)生可能有關(guān)聯(lián)性。目前已有研究[11-12]表明，H.pylori感染可能與結(jié)腸腺瘤及結(jié)腸癌的發(fā)病有關(guān)，結(jié)腸癌的演化過程一般表現(xiàn)為“正常腸上皮→微小腺瘤→早期腺瘤→中期腺瘤→后期腺瘤→腺癌”，整個過程一般需5～15年，有研究[13]顯示，腺瘤性息肉轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)腸癌的癌變率為1.4%～9.4%。近年來，H.pylori與結(jié)腸息肉的研究有了新的進(jìn)展，顯示了結(jié)腸腺瘤性息肉患者的H.pylori感染率高，認(rèn)為H.pylori的感染增加了結(jié)直腸腺瘤和腺癌的風(fēng)險，增加了結(jié)腸癌發(fā)生的危險性，促進(jìn)了腸黏膜增生。結(jié)腸腺瘤性息肉-結(jié)腸腺癌關(guān)系軸顯示它們之間的密切關(guān)系，研究結(jié)腸息肉發(fā)生的原因及危險因素，有助于結(jié)腸癌的預(yù)防和篩查，從而為臨床建議一個個體化的預(yù)防策略。

結(jié)腸息肉按病理學(xué)類型主要分為腺瘤性、炎性、增生性。對于這三種病理學(xué)類型息肉之間是否與H.pylori感染存在相關(guān)性，目前研究很少。以前的臨床研究多數(shù)是采用非侵入性的檢測方法(如尿素酶呼氣試驗(yàn)、血清H.pylori抗體)或侵入性方法(活檢胃黏膜組織作快速尿素酶試驗(yàn)或特殊染色)，主要是針對胃H.pylori感染情況的研究，沒有直接證據(jù)證明H.pylori定植于腸黏膜。國內(nèi)的CHENG等[14]比較結(jié)直腸腺瘤性息肉組兒童與正常對照組兒童的H.pylori感染率，對腸活檢標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色分析，結(jié)果顯示，兩組H.pylori檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示H.pylori感染可能是結(jié)直腸腺瘤的一個危險因素。國外的SOYLU等[4]也運(yùn)用免疫組化的方法，在結(jié)直腸腺瘤性息肉標(biāo)本中檢測出H.pylori，并發(fā)現(xiàn)腺瘤組的H.pylori感染率比正常對照組要高，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述研究證明了H.pylori確實(shí)可以在腸黏膜上定植，這為H.pylori可能是與腸黏膜通過局部作用誘發(fā)結(jié)直腸癌發(fā)生的理論提供了依據(jù)。本研究采用WS染色法直接檢測腸黏膜H.pylori感染率，進(jìn)一步證實(shí)H.pylori感染與腺瘤性息肉存在相關(guān)性。從而證實(shí)簡便的H.pylori根除治療就可降低腺瘤性息肉的發(fā)生率進(jìn)而降低大腸癌的發(fā)病風(fēng)險，從而減少結(jié)腸癌的發(fā)生，降低診治成本，為腺瘤性息肉及結(jié)腸癌的防治帶來一種全新的方法。

綜上所述，H.pylori感染與腺瘤性息肉、增生性息肉及炎性息肉之間存在相關(guān)性，而腺瘤性息肉相對于炎性息肉、增生性息肉與H.pylori感染情況關(guān)系更為密切。腺瘤性息肉是結(jié)腸癌前病變的最常見形式，因此可推斷，在臨床中根除H.pylori感染對于預(yù)防腺瘤性息肉、結(jié)腸癌有一定作用。因標(biāo)本數(shù)量有限，對于病理診斷為增生性息肉及炎性息肉的患者，雖然數(shù)據(jù)顯示與H.pylori感染存在相關(guān)性，但遠(yuǎn)低于腺瘤性息肉，臨床中仍需進(jìn)一步大量的臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。

[1] MERA R M, BRAVO L E, GOODMAN K J, et al. Long-term effects of clearing helicobacter pylori on growth in school-age children [J]. Pediatr Infect Dis J, 2012, 31(3): 263-266. DOI: 10.1097/INF.0b013e3182443fec.

[2] FOCK K M, TALLER N, MOAYYEDI P, et al. Asia-Pacific Gastric Cancer Consensus Conference. Asia-Pacific consensus guidelines on gastric cancer prevention [J]. J Gastroenterol Hepatol, 2008, 23(3): 351-365. DOI: 10.1111/j.1440-1746.2008.05314.x.

[3] ZUMKELLER N, BRENNER H, ZWAHLEN M, et al. Helicobacter pylori infection and colorectal cancer risk: a meta-analysis [J]. Helicobacter, 2006, 11(2): 75-80. DOI: 10.1111/j.1523-5378.2006.00381.x.

[4] SOYLU A, OZKARA S, ALIS H, et al. Immunohistochemical testing for Helicobacter pylori existence in neoplasms of the colon [J]. BMC Gastroenterol, 2008, 8(35): 1-6. DOI: 10.1186/1471-230X-8-35.

[5] 王菊梅， 張昊， 董朝軒， 等. 幽門螺桿菌與結(jié)腸腺瘤相關(guān)性的研究[J]. 中華結(jié)直腸疾病電子雜志， 2016， 5(1)： 73-75.DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2016.01.15.

WANG J M, ZHANG H, DONG C X, et al. Research on the correlation between helicobacter pylori and colonic adenoma [J]. Chin J Colorec Dis(Electronic Edition), 2016, 5(1): 73-75. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2016.01.15.

[6] 賴廣順. 大腸癌的臨床特點(diǎn)及與幽門螺桿菌關(guān)系的研究[D]. 汕頭： 汕頭大學(xué)， 2012.

[7] 施正杰， 方鵬， 鄒甜. 不同療程布拉氏酵母菌聯(lián)合三聯(lián)療法根除幽門螺桿菌的療效研究[J].國際消化病雜志， 2015， 35(4)： 295-297.DOI: 10.3969/j.issn.1673-534X.2015.04.020.

[8] 劉模榮, 趙逵, 王紅, 等. 胃泌素和COX-2在結(jié)腸腺瘤中的表達(dá)及意義[J]. 中國腫瘤臨床, 2008, 35(4): 206-209. DOI: 10.3969/j.issn.1000-8179.2008.04.010.

LIU M R, ZHAO K, WANG H, et al. The expression of gastrin and cyclooxygenase-2 in colorectal adenoma and its significance [J]. Chinese Journal of Clinical Oncology, 2008, 35(4): 206-209. DOI: 10.3969/j.issn.1000-8179.2008.04.010.

[9] D’ONGHIA V, LEONCICN R, CARLI R, et al. Circulating gastrin and ghrelin levels in patients with colorectal cancer: correlation with tumour stage, Helicobacter pylori infection and BMI [J]. Biomed Pharmacother, 2007, 61(2-3): 137-141. DOI: 10.1016/j.biopha.2006.08.007.

[10] SANSBURY L B, MILLIKAN R C, SCHROEDER J C, et al. COX-2 polymorphism, use of nonsteroidal anti-inflammatory drugs, and risk of colon cancer in African Americans (United States) [J]. Cancer Causes Control, 2006, 17(3): 257-266. DOI: 10.1007/s10552-005-0417-0.

[11] 張雪梅, 劉麗娜, 王海燕, 等. 幽門螺桿菌感染和高胃泌素血癥與結(jié)直腸癌的相關(guān)性研究[J]. 腫瘤, 2010, 30(5): 401-404. DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2010.05.008.

ZHANG X M, LIU L N, WANG H Y, et al. The association of Helicobacter pylori infection and hypergastrinemia with colorectal cancer [J]. Tumor, 2010, 30(5): 401-404. DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2010.05.008.

[12] D’ONGHIA V, LEONCINI R, CARLI R, et al. Circulatinfg gastrin and ghrelin levels in patients with colorectal cancer correlation with tumour stage, Helicobacter pylori infection and BMI [J]. Biomed Phaimacother, 2007, 61(2-3): 137-141.doi:10.3969/j.issn.1006-5709.2018.02.009

[13] 呂璧華. 結(jié)腸息肉診治分析[J]. 中華腹部疾病雜志, 2003, 3(12): 895-896.

[14] CHENG H, ZHANG T, GU W, et al. The presence of Helicobacter pylori in colorectal polyps detected by immunohistochemical methods in children [J]. Pediatr Infect Dis J, 2012, 31(4): 364-367.